一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法
【專利摘要】一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法，屬于天然抑菌劑加工技術領域。其包括：1）菌種選擇；2）L.reuteri乳酸菌活化；3）L.reuteri乳酸菌培養；4）L.reuteri乳酸菌的離心清洗；5)輔酶B12反應液的制備；6）reuterin的生產；7）reuterin的提取；8）微乳液制備；9）產品復配；10）產品包裝。本發明得到的羅伊氏素手機抑菌噴霧不僅具有很高的抑菌效率，而且生產成本低。
【專利說明】
一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法
技術領域
[0001] 本發明屬于天然抑菌劑加工技術領域，具體涉及一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生 產方法。
【背景技術】
[0002] 隨著智能手機和手機App的開發和普及，人們用手機的時間越來越多。尤其是大學 生，調查顯示，我國平均每位大學生一天用手機的時間為4.5小時，可見手機對大學生非常 有吸引力。前段時間在廣州地鐵上扶手檢測出有超級細菌的存在，可見人的手上可能沾染 危害極大的細菌，因此急需一種新產品給手機抑菌，從而保護自己的健康。
[0003] 在考察市面上已有的殺菌抑菌產品后發現，目前市場上大多數抑菌噴霧都是化學 材料，不環保，對人體健康有著潛在的危害，可能造成二次污染。
[0004] 多聚賴氨酸是目前天然防腐劑中具有優良防腐性能的微生物類食品防腐劑。它 是由25~30賴氨酸殘基聚合而成，具有強烈的抑菌能力，可以作為防腐劑用于食品的保鮮。 多聚賴氨酸抑菌譜廣，在酸性和微酸性環境中對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、酵母菌、 霉菌均有一定的抑菌效果，多聚賴氨酸對其他天然防腐劑不易抑制的革蘭氏陰性的大腸 桿菌、沙門氏菌抑菌效果非常好，而且其對耐熱性芽孢桿菌和一些病毒也有抑制作用。 [000 5]本發明結合reuterin與￡-多聚賴氨酸天然、健康、高效的抑菌特點，采用酶原再激 活的方式促進reuterin發酵生產，使用食品級e-多聚賴氨酸微乳液作為載運體系的方式， 將他們二者復配得到的手機抑菌噴霧具有高效的抑菌能力，針對手機上的微生物種類進行 抑菌成分的調配后得到最佳抑菌效果的手機抑菌噴霧。
【發明內容】
[0006] 針對現有技術存在的問題，本發明的目的在于設計提供一種羅伊氏素手機抑菌噴 霧的生產方法的技術方案。
[0007] 所述的一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法，其特征在于包括以下步驟： 1) 取羅伊氏乳桿菌(L. reuteri)菌株解凍后，培養于固體MRS平板上進行活化； 2) 取活化后的單一菌落置于滅過菌的液體MRS培養基中靜置培養，通入氮氣，保持在厭 氧的環境下進行培養； 3) 取培養所得上清液進行離心，將離心所得上層清夜倒去，洗菌后進行培養； 4) 制備輔酶此反應液，每lmL輔酶B12反應液中含有0.01~0.1 mol/L KC1，0.05~0.5 mol/L 1，2-PD，10~20umol/L 輔酶Bi2，0? 01 ~0? 05mol/L磷酸甲緩沖溶液，pH3~4; 5) 取步驟3)得到的菌體，加入甘油和葡萄糖，在厭氧條件下發酵； 6) 取步驟5)得到的發酵液，離心，取上清發酵液，得到羅伊氏素提取液； 7) 取步驟6)得到的羅伊氏素提取液加入步驟4)得到的輔酶B12反應液中，按照步驟5) 的條件厭氧發酵后，取上清發酵液即為羅伊氏素提取液，48h后更換重新活化的羅伊氏乳桿 菌（L.reuteri); 8) 取e-多聚賴氨酸作為溶質，甘油作為溶劑，配置成10~12mg/L濃度的e-多聚賴氨酸 微乳液； 9) 在e-多聚賴氨酸微乳液中加入步驟7)得到的羅伊氏素提取液，充分混勻； 10) 將復配后的溶液加入到噴霧瓶中，得到手機抑菌噴霧產品。
[0008] 所述的一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法，其特征在于所述的步驟1)中羅伊 氏乳桿菌(L. reuteri)活化條件:37°C培養10~12h。
[0009] 所述的一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法，其特征在于所述的步驟2)中羅伊 氏乳桿菌(L ? reuter i )厭氧培養條件:37 °C培養15~16h。
[0010] 所述的一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法，其特征在于所述的步驟3)中離心 條件:轉速3000 rpm，離心溫度20~25°C，離心時間10~15min;洗菌條件:0.85%氯化鈉溶液 洗菌兩次;培養條件:溫度37 °C下于0.85%氯化鈉溶液中培養0.5~lh。
[0011] 所述的一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法，其特征在于所述的步驟5)中發酵 條件:37°C發酵2~2.5h。
[0012] 所述的一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法，其特征在于所述的步驟5)中甘油 和葡萄糖的重量比為3:1，加入量為菌體重量的10倍。
[0013] 所述的一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法，其特征在于所述的步驟6)中離心 條件為:轉速10000 rpm，離心溫度4°C，離心時間10~12min。
[0014] 所述的一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法，其特征在于所述的步驟9)中羅伊 氏素提取液的濃度為:7~10mL/L。
[0015] 與現有技術相比，本發明具有如下優點： 1.其主要抑菌成分--reuterin為天然抑菌劑，具有較廣的抑菌譜。
[0016] 2. reuterin作為食品級的抑菌劑，不會對人體健康造成傷害。
[0017] 3.以e-多聚賴氨酸甘油溶液食reuterin運載體系，提高了抑菌噴霧的穩定性，且 不會對手機屏幕造成損傷。
[0018] 4. e-多聚賴氨酸與reuterin復配使用，不僅具有很高的抑菌效率，而且生產成本 低。
【附圖說明】
[0019] 圖1為加手機抑菌噴霧與不加手機抑菌噴霧兩種條件下對沙門氏菌菌落總數的影 響圖； 圖2為加手機抑菌噴霧與不加手機抑菌噴霧兩種條件下對沙門氏菌0D值的影響圖。
【具體實施方式】
[0020] 以下結合實施例來進一步說明本發明。
[0021] 實施例1 1)菌種選擇 選擇使用的L. reuteri菌株。L. reuteri所使用的培養基為MRS broth medium。而L. reuteri的保存是以在培養基中加入12.5%的甘油溶液，做為抗凍劑并保存在-80°C的冰箱 中。
[0022] 2)L. reuteri乳酸菌活化 將L. reuteri從-80°C冰箱中取出，在4°C下解凍后，吸取100微升涂布培養于固體MRS 平板上使其活化，37°C培養12h。
[0023] 3)L. reuteri 乳酸菌培養 選取單一菌落(colony)置于滅過菌的液體MRS培養基中靜置培養，通入氮氣5分鐘使其 保持在厭氧的環境下，37°C培養16h。
[0024] 4)L. reuteri乳酸菌的離心清洗 取培養所得上清液5mL，于低溫高速離心機中進行離心，轉速3000 rpm，離心溫度20°C， 離心時間lOmin。接著將離心所得上層清夜倒去，用0.85%氯化鈉溶液洗菌兩次，并在37°C下 于0.85%氯化鈉溶液中培養菌體，時間為0.5h。
[0025] 5)輔酶B12反應液的制備 lmL反應液中含有0.05 mol/L KC1，0.2 mol/L 1，2-PD，15 umol/L 輔酶Bi2,0.035 mol/L磷酸甲緩沖液(Ph3.6)。
[0026] 6)reuterin 的生產 在離心清洗后的菌體中加入5mL的甘油:葡萄糖(3:1)溶液(甘油和葡萄糖溶液加入量 為菌體重量的10倍），在厭氧條件下37°C發酵2h。
[0027] 7)reuterin 的提取 將菌懸液進行離心操作，轉速10000 rpm，離心溫度4°C，離心時間10min，提取上清 reuterin發酵液。
[0028] 8)酶原再激活 將步驟7)分離的得到的L. reuteri中加入lmL輔酶B12反應液，按照步驟6)條件發酵 后，取上清發酵液生產羅伊氏素提取液，48h后更換重新活化的羅伊氏乳桿菌(L.reuteri)。 [0029] 9)微乳液制備 選用多聚賴氨酸作為溶質，甘油作為溶劑，配置成12 mg/L濃度的e-多聚賴氨酸溶 液100mL。
[0030] 10)產品配比 在e-多聚賴氨酸微乳液中加入〇. 5mLreuterin提取液，充分混勾。
[0031] 11)產品包裝 將復配后的溶液加入到噴霧瓶中，得到手機抑菌噴霧產品。噴霧包裝采用25mL pet瓶 裝。
[0032]將該實施例得到的手機抑菌噴霧進行抑菌試驗，抑菌效果如下表以及附圖1、2。
[0033]從表和附圖中可知，本發明得到的手機抑菌噴霧具有廣譜抑菌作用，并且具有很 高的抑菌效率。
[0034] 實施例2 1)菌種選擇 選擇使用的L. reuteri菌株。L. reuteri所使用的培養基為MRS broth medium。而L. reuteri的保存是以在培養基中加入12.5%的甘油溶液，做為抗凍劑并保存在-80°C的冰箱 中。
[0035] 2)L. reuteri乳酸菌活化 將L. reuteri從-80°C冰箱中取出，在4°C下解凍后，吸取100微升涂布培養于固體MRS 平板上使其活化，37°C培養10h。
[0036] 3)L. reuteri 乳酸菌培養 選取單一菌落(colony )置于滅過菌的液體mrs培養基中靜置培養，通入氮氣5分鐘使其 保持在厭氧的環境下，37°C培養15h。
[0037] 4)L. reuteri乳酸菌的離心清洗 取培養所得上清液3mL，于低溫高速離心機中進行離心，轉速3000 rpm，離心溫度25°C， 離心時間15min。接著將離心所得上層清夜倒去，用0.85%氯化鈉溶液洗菌兩次，并在37°C下 于0.85%氯化鈉溶液中培養菌體，時間為1 h。
[0038] 5)輔酶B12反應液的制備 lmL反應液中含有0.01 mol/L KC1,0.05 mol/L 1，2-PD, 10 umol/L 輔酶Bi2,0.01 mol/L磷酸甲緩沖液(Ph3)。
[0039] 6)reuterin 的生產 在離心清洗后的菌體中加入5mL的甘油:葡萄糖(3:1)溶液(甘油和葡萄糖溶液加入量 為菌體重量的10倍），在厭氧條件下37°C發酵2.5h。
[0040] 7)reuterin 的提取 將菌懸液進行離心操作，轉速10000 rpm，離心溫度4°C，離心時間12min，提取上清 reuterin發酵液。
[0041 ] 8)酶原再激活 將步驟7)分離的得到的L. reuteri中加入lmL輔酶Bi2反應液，按照步驟6)技術條件發 酵后，取上清發酵液生產羅伊氏素提取液，48h后更換重新活化的羅伊氏乳桿菌（L. reuteri)〇
[0042] 9)微乳液制備 選用多聚賴氨酸作為溶質，甘油作為溶劑，配置成12 mg/L濃度的e-多聚賴氨酸溶 液50mL。
[0043] 10)產品配比 在e-多聚賴氨酸微乳液中加入〇. 5mLreuterin提取液，充分混勾。
[0044] 11)產品包裝 將復配后的溶液加入到噴霧瓶中，得到手機抑菌噴霧產品。噴霧包裝采用25mL pet瓶 裝。
[0045] 該實施例得到的手機抑菌噴霧進行如實施例1相同的試驗，最終也能達到如實施 例1相同的技術效果。
【主權項】
1. 一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法，其特征在于包括以下步驟： 1) 取羅伊氏乳桿菌(L. reuteri)菌株解凍后，培養于固體MRS平板上進行活化； 2) 取活化后的單一菌落置于滅過菌的液體MRS培養基中靜置培養，通入氮氣，保持在厭 氧的環境下進行培養； 3 )取培養所得上清液進行離心，將離心所得上層清夜倒去，洗菌后進行培養； 4) 制備輔酶B12反應液，每lmL輔酶B12反應液中含有0.01~0.1 mol/L KC1，0.05~0.5 mol/L 1，2-PD，10~20umol/L 輔酶Bi2，0·01 ~0·05mol/L磷酸甲緩沖溶液，pH3~4; 5) 取步驟3)得到的菌體，加入甘油和葡萄糖，在厭氧條件下發酵； 6) 取步驟5)得到的發酵液，離心，取上清發酵液，得到羅伊氏素提取液； 7) 取步驟6)得到的羅伊氏素提取液加入步驟4)得到的輔酶B12反應液中，按照步驟5)的 條件厭氧發酵后，取上清發酵液即為羅伊氏素提取液，48h后更換重新活化的羅伊氏乳桿菌 (L.reuteri)； 8) 取ε-多聚賴氨酸作為溶質，甘油作為溶劑，配置成10~12mg/L濃度的ε-多聚賴氨酸 微乳液； 9) 在ε-多聚賴氨酸微乳液中加入步驟7)得到的羅伊氏素提取液，充分混勻； 10) 將復配后的溶液加入到噴霧瓶中，得到手機抑菌噴霧產品。2. 如權利要求1所述的一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法，其特征在于所述的步 驟1)中羅伊氏乳桿菌(L· reuteri)活化條件:37°C培養10~12h。3. 如權利要求1所述的一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法，其特征在于所述的步 驟2)中羅伊氏乳桿菌(L. reuteri)厭氧培養條件:37°C培養15~16h。4. 如權利要求1所述的一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法，其特征在于所述的步 驟3)中離心條件:轉速3000 rpm，離心溫度20~25°C，離心時間10~15min;洗菌條件:0.85% 氯化鈉溶液洗菌兩次;培養條件:溫度37°C下于0.85%氯化鈉溶液中培養0.5~lh。5. 如權利要求1所述的一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法，其特征在于所述的步 驟5)中發酵條件:37 °C發酵2~2.5h。6. 如權利要求1所述的一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法，其特征在于所述的步 驟5)中甘油和葡萄糖的重量比為3:1，加入量為菌體重量的10倍。7. 如權利要求1所述的一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法，其特征在于所述的步 驟6)中離心條件為:轉速10000 rpm，離心溫度4°C，離心時間10~12min。8. 如權利要求1所述的一種羅伊氏素手機抑菌噴霧的生產方法，其特征在于所述的步 驟9)中羅伊氏素提取液的濃度為:7~10mL/L。
【文檔編號】A01N63/02GK105851063SQ201610276532
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月29日
【發明人】朱炫, 陳躍文, 陳杰, 虞親雅, 王培衡, 姚黃宏
【申請人】浙江工商大學