一種可食用載體培養蛹蟲草子實體的方法
【專利摘要】本發明公開了一種可食用載體培養蛹蟲草子實體的方法，屬于蛹蟲草培養技術領域。步驟為：（1）將紅棗去核后烘干粉碎，然后與蔗糖、淀粉、甘露糖混合，加水使其呈可以捏成固體狀但沒有液體的浸出的狀態，制成圓餅狀，在抑制雜菌生長的條件下自然晾干，得到可食用載體；（2）將蛹蟲草原菌種依次進行固體種子斜面培養基菌種的活化和液體種子培養基擴大培養，得到蛹蟲草菌絲；（3）用可食用載體吸附蛹蟲草菌絲，待可食用載體長滿菌絲后放入新鮮的出草培養基中，采用劃線處理結皮，用食用載體懸載法培養蛹蟲草。本發明生長周期短，培養基利用率和有效成分利用率高，）實現了蛹蟲草子實體大規模液態栽培。
【專利說明】
一種可食用載體培養蛹蟲草子實體的方法
技術領域
[0001] 本發明屬于蛹蟲草培養技術領域，具體涉及一種可食用載體培養蛹蟲草子實體的 方法。
【背景技術】
[0002] 蛹蟲草亦稱北冬蟲夏草，屬于真菌門、子囊菌亞門、肉座菌目、麥角菌科、蟲草屬， 寄生于夜蛾科等蛹體，分布于世界各地，是一種國內外公認的既可食用又可藥用的真菌。
[0003] 蛹蟲草與冬蟲夏草同屬異種，是我國分布最廣的具有藥用價值的兩種蟲草屬。研 究表明蛹蟲草與冬蟲夏草具有相同屬性，相似的藥理功能及詳盡的臨床效果，可替代冬蟲 夏草如要。蛹蟲草中含有蟲草素、蟲草多糖、蟲草酸、腺苷等成分，具有增強免疫、抗氧化、抗 病毒、抗菌、明顯抑制腫瘤生長、預防治療腦血栓、腦溢血、腎功能衰竭，利尿、抑制血小板積 聚防止血栓形成，消除面斑，抗衰防皺、保護心臟，肝臟，抗痙等多種功能。
[0004] 野生蟲草資源有限，因此人們開始轉而研究蟲草的人工栽培。蛹蟲草對于生長環 境的要求相對較低，人工培育相比之下較容易，目前主要以液體發酵形成菌絲體，通過人工 規模固體培養獲得子實體，另外通過活體培養進行規模化蛹蟲草生產成為現實。蛹蟲草在 培養過程中，如果殺菌不好或者消毒不嚴，易發生細菌、酵母菌和霉菌等污染。若出現細菌、 酵母菌和霉菌污染，將對母種進一步純化，嚴重的將被淘汰。由此可見，細菌、酵母菌和霉菌 對蛹蟲草的污染，將造成培養財力、物力損失，增加不必要的麻煩。
[0005] 為了解決現有技術存在的上述缺陷，本發明研發了一種有可食用的抑菌功能的培 養基，并進一步解決現有培養蛹蟲草子實體存在的周期長、原料利用率低的缺陷。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是提供一種可食用載體培養蛹蟲草子實體的方法。
[0007] 本發明是通過以下技術方案實現的： 一種可食用載體培養蛹蟲草子實體的方法，步驟為： (1) 制備可食用載體： 將紅棗去核后烘干粉碎，然后與蔗糖、淀粉、甘露糖混合，加水使其呈可以捏成固體狀 但沒有液體的浸出的狀態，制成圓餅狀，在抑制雜菌生長的條件下自然晾干，得到可食用載 體； (2) 菌種活化： 將蛹蟲草原菌種依次進行固體種子斜面培養基菌種的活化和液體種子培養基擴大培 養，得到蛹蟲草菌絲； (3) 培養蛹蟲草子實體： 用可食用載體吸附蛹蟲草菌絲，待可食用載體長滿菌絲后放入新鮮的出草培養基中， 置于適宜的環境下培養加速了菌絲的扭結、轉色、出草，過程中需采用劃線處理結皮以便縮 短出草周期，用食用載體懸載法培養蛹蟲草。
[0008] 進一步地，所述的紅棗：蔗糖：淀粉:甘露糖的質量比為20~22:10~12: 13~15: 甘露糖13~15。
[0009] 所述的可食用載體吸附蛹蟲草菌絲的吸附量為8%-10%。
[0010] 所述的可食用載體長滿菌絲后放入新鮮的出草培養基中，在溫度20~25°C，濕度 55~70%的環境中黑暗培養，當菌絲布滿可食用載體表面后劃線處理并移入15~20°C的環 境中進行散射光刺激、溫差刺激，誘導子實體產生，在子實體發生期要適當通風，增加新鮮 空氣。
[0011] 所述的劃線處理結皮是用消毒的鐵絲或鋼絲在菌絲體表面間隔lcmX lcm輕輕的 劃2mm深的網格以便刺激出草。
[0012] 本發明方法使用可食用載體紅棗、淀粉、蔗糖、甘露糖作為制備培養基的原料，利 用可食用載體懸載法對蛹蟲草子實體進行培養，采用正交優化實驗確定對原基光照、溫差 刺激的最佳條件，確定子實體生長的最佳條件:其中光照刺激為，白天自然光，晚上黑暗培 養;溫差刺激為，白天溫度為22°C，夜晚溫度為27°C ;連續刺激出草。
[0013] 與現有技術相比，本發明具有以下優點： (1) 本發明培養蛹蟲草子實體的生長周期為30天左右，相比傳統的56天左右的培養周 期，縮短了 20天左右； (2) 傳統的蛹蟲草子實體類胡蘿卜素含量為1.028mg/g，而利用本發明培養基，類胡蘿卜 素含量可達到1 · 653mg/g; (3 )實現了蛹蟲草子實體大規模液態栽培。
【具體實施方式】
[0014] 下面將結合本發明實施例，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述， 顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的 實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都 屬于本發明保護的范圍。
[0015] -種可食用載體懸載法培養蛹蟲草子實體的方法，步驟： (1) 制備可食用載體： 先將可食紅棗去核后烘干，并采用適當的方法將其粉碎后稱取20g_22g，后稱取適量的 鹿糖l〇g-12g、淀粉13g-15g、甘露糖13-15g，將這幾種原料與純水按一定比例混合，使其可 以捏成固體狀但沒有液體的浸出，將混合物捏成適宜大小且厚薄一致的圓餅狀，放置通風 處自然晾干，但要抑制雜菌的生長； (2) 可食用載體懸載法培養蛹蟲草子實體： 首先對蛹蟲草原菌種進行初步的活化，包括固體種子斜面培養基菌種的活化和液體種 子培養基擴大培養，通過液體種子培養基培養出大量的蛹蟲草菌絲，用已制備好的可食用 載體吸附適量的蛹蟲草菌種液菌絲，后期待食用載體長滿菌絲后放入新鮮的出草培養基 中，置于適宜的環境下培養加速了菌絲的扭結、轉色、出草，過程中需采用劃線處理結皮以 便縮短出草周期，用食用載體懸載法培養蛹蟲草； 其中斜面種子培養基PDA:稱取200g左右去皮的馬鈴薯煮半小時后過濾得到液體，再加 入大約20g葡萄糖、1.5g磷酸二氫鉀、2g硫酸鎂、0.5g蛋白胨、lg牛肉膏攪拌均勾，最后加入 18g-20g瓊脂粉，用玻璃棒在KDM型控溫電熱套中加熱攪拌直至瓊脂粉完全融化，分裝加塞 后在101KPa、121°C的條件下滅菌20min-30min。滅菌完成后，擺斜面備用，斜面培養基上畫 '之'字接種后在20°C_24°C溫度下培養7-10天，試管斜面菌種特征如表1所示，
液體種子培養基培養菌絲:稱取葡萄糖40g、蛋白胨10g、磷酸二氫鉀O.lg、硫酸鎂0.5g， 溶于適量蒸餾水中并用KDM型控溫電熱套加熱使藥品完全溶解后定容待1000mL，分裝加塞 后在101KPa、121°C的條件下滅菌20min-30min，滅菌后置于超凈工作臺備用，液體種子培養 基中接入一厘米左右大小的菌塊后放入恒溫震蕩培養器中，在23°C左右、120r/min條件下 培養3-5天，液體錐形瓶菌種特征如表2所示；
可食用載體懸載法培養蛹蟲草子實體:培養基配方為大米粉50g、蛋白胨9g、硫酸鎂2g、 磷酸二氫鉀1.5g;高水平培養基3為：大米粉75g、蛋白胨13.5g、硫酸鎂3g、磷酸二氫鉀 2.25g;低水平培養基1為：大米粉25g、蛋白胨4.5g、硫酸鎂lg、磷酸二氫鉀0.75g;可食載體 覆蓋液體培養基的百分比為70%_90%為宜;根據正交軟件分析可得到出草時間直觀分析 表如表3所不，出草時間方差分析表如表4所不，
對可食載體懸載法培養蛹蟲草子實體產量的計算方法如下:待子實體長到5cm左右，其 頂部出許多乳頭狀的小突起，或出現龜背狀花紋，表明蛹蟲草已經成熟，采收后測定蛹蟲草 子實體的鮮重;每瓶隨機選擇10根子實體，測定其直徑及高度。 蛹蟲草子實體中有效成分蟲草素的提取:醇熱回流法 材料:粉碎的蛹蟲草子實體;70%乙醇 在培養皿中，稱取0.5g-0.6g蛹蟲草菌絲粉末放入試管，然后向每個試管加入5ml 70% 乙醇，沸水浴約0.5h左右，待溶液冷卻后，以5000r/min的速度，離心15min，然后用移液槍取 大約650μ1上清液注入試管內，每支試管加入4ml 70%乙醇，然后用紫外分光光度計在259nm 處測定其吸光值。因為蟲草素的含量與用紫外分光光度計測定出來的吸光值成正相關，所 以可以通過比較吸光值的變化來比較不同樣品中蟲草素的含量變化。
[0016]測量成熟的蛹蟲草子實體中的類胡蘿卜素含量 采摘不同光照條件下蛹蟲草子實體，把它們放入不同的培養皿中，放入60°C的烘箱中 烘干，然后用粉碎機將樣品粉碎，干燥條件下保存備用，不同的實驗組中類胡蘿卜素的含量 如表5所示，不同的實驗組中蟲草素的吸光值如表6所示；
提取方法:酸熱法 材料:2mol/L鹽酸;丙酮 在不同的培養皿中，稱取約lg蛹蟲草粉末，放入50ml的離心管中，然后加入配置好的 2mol/L鹽酸10ml。在室溫下浸泡40min，然后放入100°C處理4min，等溶液冷卻后，在離心機 上以3000r/min的速度離心10min，離心完了之后，把離心管中的上清液倒掉。加入蒸餾水， 再次離心，再次倒掉上清液，這個步驟重復兩次。而后往每一個離心管加20ml丙酮，室溫下 震蕩 30min，再在4〇〇〇r/min的條件下離心15min，得到上清液即為類胡蘿卜素浸提液。
[0017] 測量方法:將上述的提取液稀釋十倍后，用紫外分光光度計在475nm處測定每個樣 品的吸光度，然后按照下列公式計算類胡蘿卜素含量。
[0018] 類胡蘿卜素含量(yg/g)=AXVXD/(hl6XW
【主權項】
1. 一種可食用載體培養蛹蟲草子實體的方法，其特征在于，步驟為： (1) 制備可食用載體： 將紅棗去核后烘干粉碎，然后與蔗糖、淀粉、甘露糖混合，加水使其呈可以捏成固體狀 但沒有液體的浸出的狀態，制成圓餅狀，在抑制雜菌生長的條件下自然晾干，得到可食用載 體； (2) 菌種活化： 將蛹蟲草原菌種依次進行固體種子斜面培養基菌種的活化和液體種子培養基擴大培 養，得到蛹蟲草菌絲； (3) 培養蛹蟲草子實體： 用可食用載體吸附蛹蟲草菌絲，待可食用載體長滿菌絲后放入新鮮的出草培養基中， 培養過程中需采用劃線處理結皮，用食用載體懸載法培養蛹蟲草。2. 根據權利要求1所述的可食用載體培養蛹蟲草子實體的方法，其特征在于，所述的紅 棗:蔗糖:淀粉:甘露糖的質量比為20~22:10~12: 13~15:甘露糖13~15。3. 根據權利要求1或2所述的可食用載體培養蛹蟲草子實體的方法，其特征在于，所述 的可食用載體吸附蛹蟲草菌絲的吸附量為體積的8% -10%。4. 根據權利要求1或2所述的可食用載體培養蛹蟲草子實體的方法，其特征在于，所述 的出草培養基為:大米粉50g、蛋白胨9g、硫酸鎂2g、磷酸二氫鉀1.5g;高水平培養基3為:大 米粉75g、蛋白胨13.5g、硫酸鎂3g、磷酸二氫鉀2.25g;低水平培養基1為:大米粉25g、蛋白胨 4.5g、硫酸鎂lg、磷酸二氫鉀0.75g。5. 根據權利要求1或2所述的可食用載體培養蛹蟲草子實體的方法，其特征在于，所述 的可食用載體長滿菌絲后放入新鮮的出草培養基中，當菌絲布滿培養基表面后劃線處理 并移入15~20°C的環境中進行散射光刺激、溫差刺激，誘導子實體產生，在子實體發生期要 適當通風，增加新鮮空氣防止菌絲自溶現象的發生。6. 根據權利要求1或2所述的可食用載體培養蛹蟲草子實體的方法，其特征在于，所述 的劃線處理結皮是用消毒的鐵絲或鋼絲在菌絲體表面間隔lcmX lcm輕輕的劃2mm深的網格 以便刺激出草。
【文檔編號】A01G1/04GK105830744SQ201610233625
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年4月15日
【發明人】賀瑩, 趙建英, 高平, 王莉, 馮彩平, 高曉麗, 呼鳳蘭, 郭芳, 焦紅英
【申請人】呂梁學院