一種何首烏防褐化誘導培養基及其配制方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于何首烏組織培養技術，特別涉及一種何首烏防褐化誘導培養基，還涉 及一種何首烏防褐化誘導培養基配置方法。
【背景技術】
[0002] 何首烏，是寥科何首烏屬多年生纏繞藤本植物，塊根肥厚，長橢圓形，黑褐色，其塊 根入藥，可安神、養血、活絡、消癰，是常見的中藥材。
[0003] 目前何首烏快速繁殖多采用組織培養，然而由于外植體上存在傷口，傷口會分泌 大量酚類物質致使何首烏組織褐化死亡，造成大量浪費，影響誘導率。
【發明內容】
[0004] 基于現有技術存在上述問題，本發明提供一種何首烏防褐化誘導培養基，其以MS 培養基為基礎培養基，并添加有6-BA(6_芐氨基腺嘌呤）、IBA(吲哚丁酸）、活性炭、蜂蜜、瓊 脂粉、蔗糖，該培養基具有抑制何首烏誘導培養時產生的褐化現象，降低褐化率，提高誘導 率的優點。
[0005] -種何首烏防褐化誘導培養基，以MS培養基為基礎培養基，并添加有6-BA(6_芐氨 基腺嘌呤）、IBA(吲哚丁酸）、活性炭、蜂蜜、瓊脂粉、蔗糖。
[0006] 6-84(6-芐氨基腺嘌呤）的濃度為1-1.511^/1、184(吲哚丁酸）的濃度為0.2-0.8 mg/L，活性炭的濃度為5-15g/L，蜂蜜的濃度為100-200mg/L，瓊脂粉的濃度為8~llg/L，蔗 糖的濃度為25~35g/L。
[0007] 6-BA(6-芐氨基腺嘌呤）的濃度為1 ·2-1 ·4mg/L，IBA(吲哚丁酸）的濃度為0·4-0·6 mg/L，活性炭的濃度為9-llg/L，蜂蜜的濃度為140-160mg/L，瓊脂粉的濃度為9~10g/L，蔗 糖的濃度為28~32g/L。
[0008] 何首烏防褐化誘導培養基的pH值為6.2~6.6。
[0009] 何首烏防褐化誘導培養基的pH值為6.4。
[0010] 蜂蜜是中華蜜蜂出產的中蜂蜜，中蜂蜜具有抗壞血酸、類黃酮及一些酶等抗氧化 成分，可以抑制褐變，降低褐化率，同時中蜂蜜還具有大量的天然營養物質，可補充培養基 的不足。
[0011] -種何首烏防褐化誘導培養基的配制方法，其包括以下步驟： 步驟S10溶解配制培養基，用蒸餾水溶解MS基礎培養基各成分，并添加6-BA(6-芐氨基 腺嘌呤）、IBA(B引噪丁酸）、活性炭、瓊脂粉、鹿糖； 步驟S20滅菌，分別將步驟S10配制好的培養基和蜂蜜進行滅菌，放于無菌環境中，備 用； 步驟S30培養基混合，在無菌環境中，待步驟S20滅菌后的培養基冷卻到60°C時，添加步 驟S20過濾滅菌的蜂蜜，混勻，冷卻至凝固。
[0012] 步驟S10還包括步驟SI 1調節pH值，使用HCL和Κ0Η滴定調節培養基pH值至6.4。
[0013] 步驟S20還包括步驟S21高溫滅菌和S22過濾滅菌； S21高溫滅菌，將步驟S10配制好的培養基放于高壓滅菌鍋中，于120~121°C高溫滅菌20 ~21分鐘，冷卻，備用； S22過濾滅菌，在無菌環境中使用無菌水對蜂蜜進行稀釋，過濾滅菌，備用。
【具體實施方式】
[0014] 實施例一:配制何首烏防褐化誘導培養基。
[0015]根據表1所示的MS培養基配方以及表2所示的何首烏防褐化誘導培養基配方，配制 本發明所述的何首烏防褐化誘導培養基。
[0016] 用天平稱取MS培養基中的各成分以及6-BA(6-芐氨基腺嘌呤）、IBA(吲哚丁酸）、活 性炭、瓊脂粉、蔗糖，置于三角瓶中，加入適量蒸餾水，攪拌溶解，并使用HCL或者Κ0Η調節pH 值至6.4，定容至90〇111匕將三角瓶封口，置于高壓滅菌鍋中，于121°(3滅菌2〇1]1；[11，然后置于超 凈工作臺中自然冷卻，備用。
[0017] 按表2所示的何首烏防褐化誘導培養基配方中的蜂蜜用量，在超凈工作臺中稱取 蜂蜜，使用無菌水稀釋，并過濾滅菌，備用。
[0018] 在無菌環境中，待滅菌后的培養基冷卻到60°C時，向培養基加入經過濾滅菌的蜂 蜜，混勻，并將培養基分裝至組織培養瓶中，晾涼，待其凝固后將組織培養瓶封口，備用。
[0019] 表1 MS培養基的成分及其用量。
[0020] 表2何首烏防褐化誘導培養基的成分及其用量。
[0021] 實施例二:本發明所述的何首烏防褐化誘導培養基的測試 根據表1所示的MS培養基配方以及表3所示的何首烏防褐化誘導培養基配方，參照實施 例一所述的培養基制備方法，分別配制各試驗組、對照組的何首烏防褐化誘導培養基。
[0022] 表3何首烏防褐化誘導培養基。
[0023] 選擇生長健康，品質優良的何首烏，取其1.5-2.5厘米莖尖，置于超凈工作臺中，用 質量濃度為75%的酒精浸泡30秒，用無菌水沖洗干凈，再用質量濃度為0.1%的氯化汞溶液消 毒5分鐘，用無菌水沖洗干凈，將莖尖離傷口處0.5厘米部分切除，剩下部分接種于表3所示 各試驗組、對照組的培養基中，黑暗培養5天，然后于光暗周期為12h光照/12h黑暗、光照強 度為20001UX、溫度為25±2°C的條件下進行培養。培養30天后統計莖尖愈傷組織誘導率和 褐化率，結果如表4所示。
[0024] 表4何首烏防褐化誘導培養基測試結果。
[0025] 由表4的試驗結果扣知，米用本友明所述的何苜馬防褐化誘導培養基，能對何首烏 誘導組織培養褐化起到一定的抑制作用，能將褐化率降低至7.83%，另外從試驗組1與2，、試 驗組5與6,試驗組7與9對比可以看出蜂蜜對抑制褐化具有明顯作用，但用量超過150mg/L后 其抑制褐化的能力沒有隨著用量的添加而更加明顯，所以蜂蜜的用量在150mg/L為最佳。
【主權項】
1. 一種何首烏防褐化誘導培養基，其特征在于，以MS培養基為基礎培養基，并添加有6-BA(6-芐氨基腺嘌呤）、IBA(吲哚丁酸）、活性炭、蜂蜜、瓊脂粉、蔗糖。2. 根據權利要求1所述的一種何首烏防褐化誘導培養基，其特征在于，6-BA(6-芐氨基 腺嘌呤）的濃度為1-1.511^/1、184(吲哚丁酸）的濃度為0.2-0.8 11^/1，活性炭的濃度為5-15g/L，蜂蜜的濃度為100-200mg/L，瓊脂粉的濃度為8~llg/L，蔗糖的濃度為25~35g/L。3. 根據權利要求2所述的一種何首烏防褐化誘導培養基，其特征在于，6-BA(6-芐氨基 腺嘌呤）的濃度為1 · 2-1 · 4mg/L，IBA( B引噪丁酸）的濃度為0 · 4-0 · 6 mg/L，活性炭的濃度為 9-llg/L，蜂蜜的濃度為140-160mg/L，瓊脂粉的濃度為9~10g/L，蔗糖的濃度為28~32g/L。4. 根據權利要求1至3的其中之一所述的一種何首烏防褐化誘導培養基，其特征在于， 所述的何首烏防褐化誘導培養基的pH值為6.2~6.6。5. 根據權利要求4的所述的一種何首烏防褐化誘導培養基，其特征在于，所述的何首烏 防褐化誘導培養基的pH值為6.4。6. 根據權利要求1至3的其中之一所述的一種何首烏防褐化誘導培養基，其特征在于， 所述的蜂蜜是中華蜜蜂出產的中蜂蜜。7. -種何首烏防褐化誘導培養基的配制方法，其特征在于，其包括以下步驟： 步驟S10溶解配制培養基，用蒸餾水溶解MS基礎培養基各成分，并添加6-BA(6-芐氨基 腺嘌呤）、IBA(B引噪丁酸）、活性炭、瓊脂粉、鹿糖； 步驟S20滅菌，分別將步驟S10配制好的培養基和蜂蜜進行滅菌，放于無菌環境中，備 用； 步驟S30培養基混合，在無菌環境中，待步驟S20滅菌后的培養基冷卻到60°C時，添加步 驟S20過濾滅菌的蜂蜜，混勻，冷卻至凝固。8. 根據權利要求7所述的一種何首烏防褐化誘導培養基的配制方法，其特征在于，所述 的步驟S10還包括步驟SI 1調節pH值，使用HCL和K0H滴定調節培養基pH值至6.4。9. 根據權利要求7所述的一種何首烏防褐化誘導培養基的配制方法，其特征在于，所述 的步驟S20還包括步驟S21高溫滅菌和S22過濾滅菌； S21高溫滅菌，將步驟S10配制好的培養基放于高壓滅菌鍋中，于120~121°C高溫滅菌20 ~21分鐘，冷卻，備用； S22過濾滅菌，在無菌環境中對蜂蜜進行稀釋，過濾滅菌，備用。
【專利摘要】本發明提供一種何首烏防褐化誘導培養基，屬于何首烏組織培養技術領域，該培養基以MS培養基為基礎培養基，并添加有6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)、IBA（吲哚丁酸）、活性炭、蜂蜜、瓊脂粉、蔗糖，該培養基具有抑制何首烏誘導培養時產生的褐化現象，降低褐化率，提高誘導率的優點。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105532464
【申請號】CN201610011324
【發明人】何志鏗
【申請人】佛山市金藍領教育科技有限公司
【公開日】2016年5月4日
【申請日】2016年1月9日