一種金線蓮種子采收后的處理方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于農業科技領域，具體設及一種金線蓮種子采收后的處理方法。
【背景技術】
[0002] 金線蓮為蘭科(Orchidaceae)開唇蘭屬(AnoectochiIus Blume)多年生草本植物， 是我國民間傳統的珍貴藥材，享有"藥王"、"神草"、"鳥人參"等美稱。金線蓮W全草入藥，味 甘性平，具有清熱涼血、桂風利濕之功效，主治咯血、支氣管炎、腎炎、膀脫炎、糖尿病、乳糜 尿、血尿、風濕性關節炎、小兒急驚風、毒蛇咬傷等。
[0003] 金線蓮對生長環境的要求很高，金線蓮種子在自然環境下萌芽率不及萬分之一， 只有在適宜真菌侵染后才能萌發，且種子不宜存放，若經長時間存放萌芽率幾乎為零，再加 上人為過度采挖，使其野生資源溯臨滅絕。近年來，國內外學者針對金線蓮野生資源嚴重匿 乏的現狀，對金線蓮的組織培養進行了大量研究，并已取得一定成效。無性繁殖雖然能夠保 持母本的優良特性，但是多代擴繁后容易出現種源退化現象，且與無性繁殖相比，利用種子 進行有性繁殖利于基因交流，可使后代個體更富有活力和多樣性，為金線蓮新品種的選育 提供了可能，也為種質資源保存及物種延續提供了有力的支持。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種金線蓮種子采收后的處理方法，其能突破現有金線蓮 種子繁殖周期短的局限性，克服金線蓮種子保存技術的不足，W長期有效的保存金線蓮種 子，顯著提高種子的萌發率。
[0005] 為實現上述目的，本發明采用如下技術方案： 一種金線蓮種子采收后的處理方法，包含采收后的保存及保存后的萌發兩部分，其操 作包括W下步驟： 1) 采收后的保存： a. 消毒:于每年10-11月間采集成熟、未開裂的金線蓮葫果，刮除表面微絨毛，用清水 沖洗30min，取出后在超凈工作臺上用質量濃度為75%的酒精消毒30s，再于質量濃度為0.1% 的升隸中消毒20min，取出后用純凈水沖洗3-5遍； b. 脫水干燥:用滅菌過的濾紙吸干金線蓮葫果表面水分，然后將金線蓮葫果置于無菌 稱量紙中，放入裝有變色硅膠的培養皿中脫水干燥20-30d，至表皮開裂;干燥期間發現硅膠 從深藍色變成粉紅色時要及時更換，W保證金線蓮葫果充分干燥； C .密封保存:將干燥至開裂的金線蓮葫果在無菌條件下，于滅菌離屯、管中收集其所含 金線蓮種子，密封后用蠟封口，并于4°C低溫環境中保存； 2) 保存后的萌發:將密封保存的金線蓮種子置于專用培養基中進行萌發。
[0006] 步驟1)所述裝有變色硅膠的培養皿預先經120-130°C微波滅菌120s，然后取出，置 于超凈工作臺中冷卻;如此重復滅菌3-5次至變色硅膠呈深藍色。
[0007] 所用變色硅膠與金線蓮葫果的重量比為80-100:1。
[000引步驟2)所述專用培養基為1/2MS +0.5mg/L NAA+0.7wt%瓊脂+3wt%薦糖+15wt%馬 鈴馨提取液，調抑5.6-5.8。
[0009] 本發明的顯著優點在于:本發明可突破現有金線蓮種子繁殖周期短的局限性，克 服金線蓮種子保存技術的不足，有效保持種子活力，W實現金線蓮種子的長時間保存，并顯 著提高種子的萌發率，保存2年后的金線蓮種子在專用培養基下的萌芽率仍可達82.9%，為 金線蓮種質資源的保存提供了一條有效的途徑，也適用于蘭科開唇蘭屬其他植物的種質資 源保存。
【具體實施方式】
[0010] 為了使本發明所述的內容更加便于理解，下面結合【具體實施方式】對本發明所述的 技術方案做進一步的說明，但是本發明不僅限于此。
[0011] 步驟1)于10-11月間采集成熟、未開裂的金線蓮葫果(若采集時間過早種子未成 熟，萌芽率降低，若采集時間過晚葫果開裂，種子散落不易進行保存）；刮除金線蓮葫果表面 微絨毛，用清水沖洗30min，取出后在超凈工作臺上用質量濃度為75%的酒精消毒30s，再于 質量濃度為0.1%的升隸中消毒20min，取出后用純凈水沖洗3遍； 步驟2)將裝有變色硅膠的培養皿經120°C微波滅菌120s，然后取出，置于超凈工作臺中 冷卻；如此重復滅菌3-5次至變色硅膠呈深藍色；用滅菌過的濾紙吸干金線蓮葫果表面水 分，然后將金線蓮葫果置于無菌稱量紙中，放入裝有金線蓮葫果重量80倍變色硅膠的培養 皿中脫水干燥20d，至表皮開裂;干燥期間發現硅膠從深藍色變成粉紅色時要及時更換，W 保證金線蓮葫果充分干燥； 步驟3)將干燥至開裂的金線蓮葫果在無菌條件下，于滅菌離屯、管中收集其所含金線蓮 種子，密封后用蠟封口，并于4°C低溫環境中保存。
[0012] 1.取上述處理后保存1年的金線蓮種子于不同培養基中進行萌發試驗，具體是分 別 WMS+0.5mg/L NAA+0.7wt%瓊脂+3wt%薦糖、1/2MS+0.5mg/L NAA+0.7wt%瓊脂+3wt%薦糖 與1/2MS+0.5mg/L NAA+0.7wt%瓊脂+3wt%薦糖+15wt%馬鈴馨提取液為培養基，調節其抑值 為5.6-5.8,高溫滅菌后分別分裝于蘭花培養瓶中，每瓶分裝培養基40-50mL，冷卻后備用； 在超凈工作臺上將金線蓮種子分別均勻撒播于培養基表面，每瓶撒播100-150顆種子，于 (25±2)°C進行暗室培養，結果見表1。所用馬鈴馨提取液是將馬鈴馨去皮后按200g/L加水 煮30min，過濾，取濾液即得。
[0013] 表1不同培養基對金線蓮種子萌發效果的影響
由表1可見，采用1/2MS+0.5mg/L NAA+0.7wt%瓊脂+3wt%薦糖+15wt%馬鈴馨提取液為培 養基時，金線蓮種子萌發快，萌發情況較好。
[0014] 2.取上述處理后保存2年的金線蓮種子分兩份進行無菌播種，具體是將其中一份 W1/2MS+0.5mg/L NAA+0.7wt%瓊脂+3wt%薦糖+15wt%馬鈴馨提取液為專用培養基，另一份 WKnudson C+20wt%馬鈴馨提取液為培養基，調節各培養基的pH值為5.6，然后將所用培養 基經高溫滅菌后分別分裝于蘭花培養瓶中，每瓶分裝培養基40-50mL，冷卻后備用；在超凈 工作臺上將金線蓮種子均勻撒播于各培養基表面，每瓶撒播100-150顆種子，于(25±2)°C 進行暗室培養。結果顯示，采用Knudson C培養基培養60d后種子開始萌發，萌發率為58.7%; 而采用本發明專用培養基處理的種子，培養40d后開始萌發，萌發率為82.9%，65d后萌發出 較為整齊的綠色小苗。
[0015] 同期采集野外成熟、未開裂的金線蓮葫果進行無菌播種對比實驗，具體是先刮除 金線蓮葫果表面微絨毛，用清水沖洗30min，取出后在超凈工作臺上用質量濃度為75%的酒 精消毒30s，再于質量濃度為0.1%的升隸中消毒20min，取出后用純凈水沖洗3-5遍，然后用2 把綴子，其中一把夾住葫果果柄，另一把將葫果撐裂，將收集的細小種子分為兩份，其中一 份W1/2MS+0.5mg/L NAA+0.7wt%瓊脂+3wt%薦糖+15wt%馬鈴馨提取液為專用培養基，另一 份WKnudson C+20wt%馬鈴馨提取液為培養基，調節各培養基的pH值為5.6，然后將所用培 養基經高溫滅菌后分別分裝于蘭花培養瓶中，每瓶分裝培養基40-50mL，冷卻后備用；在超 凈工作臺上將金線蓮種子均勻撒播于各培養基表面，每瓶撒播100-150顆種子，于(25±2) °C進行暗室培養。結果顯示，采用Knudson C培養基培養60d后種子開始萌發，萌發率為 60.4%;而采用本發明專用培養基處理的種子，培養40d后開始萌發，萌發率為84.6%，65d后 萌發出較為整齊的小苗。
[0016] 通過對比實驗可W發現，按本發明保存處理2年的金線蓮種子與當年采集的金線 蓮種子活性相當，將其在相同條件下進行播種，其萌發率并無明顯差異，說明本發明采收后 的處理方法能有效保持種子活力，有利于金線蓮種子的長期保存，且利用本發明專用培養 基進行萌發，能顯著提高種子的萌發率。
[0017] W上所述僅為本發明的較佳實施例，凡依本發明申請專利范圍所做的均等變化與 修飾，皆應屬本發明的涵蓋范圍。
【主權項】
1. 一種金線蓮種子采收后的處理方法，其特征在于:包含采收后的保存及保存后的萌 發兩部分，其操作包括以下步驟： 1) 米收后的保存： a. 消毒：于每年10-11月間采集成熟、未開裂的金線蓮蒴果，刮除表面微絨毛，用清水 沖洗30min，取出后用質量濃度為75%的酒精消毒30s，再于質量濃度為0.1%的升汞中消毒 20min，取出后用純凈水沖洗3-5遍； b. 脫水干燥:將金線蓮蒴果表面的水分用滅菌過的濾紙吸干，然后將其放入裝有變色 硅膠的培養皿中脫水干燥20-30d，至表皮開裂； c. 密封保存:將干燥至開裂的金線蓮蒴果在無菌條件下，于滅菌離心管中收集其所含 金線蓮種子，密封后用蠟封口，并于4°C低溫環境中保存； 2) 保存后的萌發:將密封保存的金線蓮種子置于專用培養基中進行萌發。2. 根據權利要求1所述金線蓮種子采收后的處理方法，其特征在于:步驟1)所述裝有變 色硅膠的培養皿預先微波滅菌120s，然后取出，置于超凈工作臺中冷卻；如此重復滅菌3-5 次至變色硅膠呈深藍色； 所述微波滅菌的溫度為120_130°C。3. 根據權利要求1所述金線蓮種子采收后的處理方法，其特征在于:所用變色硅膠與金 線蓮蒴果的重量比為80-100:1。4. 根據權利要求1所述金線蓮種子采收后的處理方法，其特征在于:步驟2)所述專用 培養基為1/2MS +0 · 5mg/L ΝΑΑ+0 · 7wt%瓊脂+3wt%蔗糖+15wt%馬鈴薯提取液，調pH5 · 6-5 · 8。
【專利摘要】本發明公開了一種金線蓮種子采收后的處理方法，包含采收后的保存及保存后的萌發兩部分，所述采收后的保存是將成熟、未開裂的金線蓮蒴果刮除表面微絨毛，經沖洗、消毒后，于裝有變色硅膠的培養皿中脫水干燥，然后于滅菌離心管中收集金線蓮種子，密封、低溫保存；所述保存后的萌發是將密封保存的金線蓮種子置于專用培養基中進行萌發。按本發明方法處理可有效保持種子活力，使金線蓮種子得以長期保存，并顯著提高種子的萌發率，種子存儲2年后萌芽率仍可達80%以上，為金線蓮種質資源的保存提供了一條有效的途徑，也適用于蘭科開唇蘭屬其他植物的種質資源保存。
【IPC分類】A01C1/00, A01F25/00
【公開號】CN105493683
【申請號】CN201610001283
【發明人】蔣元斌, 林叢發, 郭慧慧, 尤云桂, 林鸞芳, 周麗英, 吳壽華, 董海濤
【申請人】寧德市農業科學研究所
【公開日】2016年4月20日
【申請日】2016年1月5日