一種番茄葉片誘導培養基及培養方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于番茄組織培養技術領域，特別涉及一種番茄葉片誘導培養基，還涉及 一種番茄葉片誘導方法。
【背景技術】
[0002] 番茄是茄科番茄屬一年生或者多年生植物，在世界各地廣泛種植，同時也是一種 在餐桌上極受歡迎的食物。隨著基因工程的崛起，番茄產業迎來了巨大的機遇，然而基因工 程必須依賴于組織培養技術才能將其作用發揮到最大。
[0003] 現有的番茄組織培養中多采用幼嫩根尖或番茄種子作為外植體，采取根尖作為外 植體會對母株造成較大傷害，且取材不容易;采用種子作為外植體，其繁殖系數低。
[0004] 葉片作為植株的一部分，由于其分化程度高，全能性較低，較少用于植物組織培 養，但是其具有取材容易，不損傷母株的優點。
【發明內容】
[0005] 基于上述現有技術中存在的問題，本發明提供一種番茄葉片誘導培養基及培養方 法，其采用葉片作為外植體，以MS培養基為基礎培養基，添加有吲哚乙酸（IAA)、6-芐氨基腺 嘌呤(6-BA)、瓊脂粉、蔗糖和硝酸鐠，并對外植體進行暗培養，具有取材容易，誘導率高，縮 短誘導時間的優點。
[0006] -種番茄葉片誘導培養基，以MS培養基為基礎培養基，并添加有吲哚乙酸（IAA)、 6_芐氨基腺嘌呤(6-BA)、瓊脂粉、蔗糖和硝酸鐠，培養基中添加了硝酸鐠，稀土元素鐠可以 促進番茄內源激素的合成和增加番茄激素的活性，促進葉片細胞脫分化和再分化。
[0007] 所述的吲哚乙酸（IAA)的濃度為0.05-0.1511^/1，6-芐氨基腺嘌呤(6-84)的濃度為 5-15 mg/L，瓊脂粉的濃度為5-15g/L，蔗糖的濃度為25-35g/L，硝酸鐠的濃度為10-15 mg/ L0
[0008] 所述的吲哚乙酸（IAA)的濃度為0.08mg/L，6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)的濃度為9mg/ U瓊脂粉的濃度為10g/L，蔗糖的濃度為30g/L，硝酸鐠的濃度為13 mg/L。
[0009] 所述的培養基的pH值為5.5-6.0，微酸性環境有利于番茄葉片脫分化。
[0010] -種番茄葉片誘導培養方法，其包括以下步驟:外植體消毒，接種，暗培養和常規 培養； 外植體消毒，取長度為2-3cm的番茄幼嫩葉片作為外植體，在無菌環境中用73%-76%的 酒精浸泡25-30秒，用無菌水沖洗干凈，用質量濃度為0.08%-0.12%浸泡2-3分鐘，再用無菌 水沖洗干凈，采用葉片作為外植體，不僅僅取材方便，而且不會對母株造成損傷； 接種，在無菌環境中將距葉片邊緣〇.2cm的部分切去，使用打孔器將剩余部分打成直徑 為0.5cm圓形葉塊，將葉塊接種到上述番茄葉片誘導培養中，直徑為0.5cm大小的葉塊可以 滿足組織培養的要求，同時有不會浪費葉片； 暗培養，將接種完畢的葉塊置于黑暗環境中培養4天，黑暗培養有助于激活葉片細胞內 源激素； 常規培養，暗培養結束后將葉塊置于人工氣候箱中培養，光暗周期為16小時光照/8小 時黑暗，光照強度為1800-20001UX，培養溫度為23-25°C。
[0011] 所述的接種步驟中，葉塊形狀還可以是正多邊形。
【具體實施方式】
[0012] 實施例一:番茄葉片誘導培養基的配制。
[0013] 根據表1、表2所不的配方分別稱取MS培養基和本發明的番前葉片誘導培養基的成 份，置于三角瓶中，加入適量的蒸餾水，攪拌溶解，定容至IL并調節pH值為5.8,將其分裝于 組織培養瓶中，封口并置于高壓滅菌中，在121°C下滅菌20分鐘，冷卻，凝固后得到本發明番 茄葉片誘導培養基。
[0014] 表1MS培養基成份和濃度。
[0015] 表2番茄葉片誘導培養基成份和濃度
實施例二:番茄葉片誘導培養方法。
[0016] 外植體消毒:取番茄長度為2_3cm的幼嫩葉片作為外植體，在無菌環境中用75%的 酒精浸泡30秒，用無菌水沖洗干凈，用質量濃度為0.1%浸泡2分鐘，再用無菌水沖洗干凈。 [0017]接種:在超凈工作臺中將距葉片邊緣0.2cm的部分切去，使用打孔器將剩余部分打 成直徑為0.5cm圓形葉塊，將葉塊接種到上述番茄葉片誘導培養中。
[0018] 暗培養:將接種完畢的葉塊置于黑暗環境中培養4天。
[0019] 常規培養:暗培養結束后將葉塊置于人工氣候箱中培養，光暗周期為16小時光照/ 8小時黑暗，光照強度為1800-20001ux，培養溫度為23-25°C，培養30天，得到愈傷組織。
[0020] 實施例三:番茄葉片誘導培養基測試。
[0021] 按照實施例一所示的方法，根據表3所示的番茄葉片誘導培養基濃度及成份配制 培養基，分別將番茄葉片接種于培養基上，誘導培養30天，記錄誘導時間和誘導率。
[0022] 表3番茄葉片誘導培養基
表4番茄葉片誘導培養基實驗結果
注：綜合評分y=〇 · 3*a+0 · 7*b。
[0023] 對照組1完全沒有萌發，接種2周后所有葉塊褐化死亡；由對照組2、3和4與對照組I 相比較，可以看出添加吲哚乙酸、6-芐氨基腺嘌呤、硝酸鐠可以成功誘導番茄葉片脫分化， 植物激素和稀土元素鐠對番茄葉片誘導脫分化至關重要；由試驗組和對照組對比可以看 出，同時添加吲哚乙酸、6-芐氨基腺嘌呤、硝酸鐠可以大大提高番茄葉片誘導率和縮短誘導 時間，其中試驗組5為本發明中的番茄葉片誘導培養基，其效果最好，平均誘導時間為15.73 天，誘導率更高達97.32%，明顯高于其他試驗組。
【主權項】
1. 一種番茄葉片誘導培養基，其特征在于，以MS培養基為基礎培養基，并添加有吲哚乙 酸(IAA)、6_芐氨基腺嘌呤(6-BA)、瓊脂粉、蔗糖和硝酸鐠。2. 根據權利要求1所述的番茄葉片誘導培養基，其特征在于，所述的吲哚乙酸（IAA)的 濃度為0.05-0.1511^/1，6-芐氨基腺嘌呤（6-84)的濃度為5-15 11^/1，瓊脂粉的濃度為5-15g/L，蔗糖的濃度為25-35g/L，硝酸鐠的濃度為10-15mg/L。3. 根據權利要求2所述的番茄葉片誘導培養基，其特征在于，所述的吲哚乙酸（IAA)的 濃度為〇.〇8mg/L，6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)的濃度為9mg/L，瓊脂粉的濃度為10g/L，蔗糖的濃 度為30g/L，硝酸鐠的濃度為13mg/L。4. 根據權利要求2或3所述的番茄葉片誘導培養基，其特征在于，培養基的pH值為5.5-6.0〇5. -種番茄葉片誘導培養方法，其特征在于，其包括以下步驟:外植體消毒，接種，暗培 養和常規培養； 外植體消毒，取長度為2-3cm的番茄幼嫩葉片作為外植體，在無菌環境中用73%-76%的 酒精浸泡25-30秒，用無菌水沖洗干凈，用質量濃度為0.08%-0.12%浸泡2-3分鐘，再用無菌 水沖洗干凈； 接種，在無菌環境中將距葉片邊緣〇.2cm的部分切去，使用打孔器將剩余部分打成直徑 為0.5cm圓形葉塊，將葉塊接種到上述番茄葉片誘導培養中； 暗培養，將接種完畢的葉塊置于黑暗環境中培養4天； 常規培養，暗培養結束后將葉塊置于人工氣候箱中培養，光暗周期為16小時光照/8小 時黑暗，光照強度為1800-20001UX，培養溫度為23-25°C。6. 根據權利要求5所述的番茄葉片誘導培養方法，其特征在于，所述的接種步驟中，葉 塊形狀還可以是正多邊形。
【專利摘要】本發明提供一種番茄葉片誘導培養基及培養方法，屬于番茄組織培養技術領域，其采用葉片作為外植體，以MS培養基為基礎培養基，添加有吲哚乙酸（IAA）、6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）、瓊脂粉、蔗糖和硝酸鐠，并對外植體進行暗培養，本發明的培養基和培養方法具有取材容易，誘導率高，誘導時間短的優點。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105432467
【申請號】CN201510827042
【發明人】何志鏗
【申請人】廣東粵三胖農業科技有限責任公司
【公開日】2016年3月30日
【申請日】2015年11月24日