一種兜蘭種子萌發培養基及培養方法與應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于植物種苗繁殖領域，具體涉及一種兜蘭種子萌發培養基及培養方法與 應用。
【背景技術】
[0002] 兜蘭（Paphiopedilum Pfitzer)為蘭科兜蘭屬所有植物的統稱，又稱為仙履蘭、拖 鞋蘭等，屬于蘭科（Orchidaceae)中的一個較為原始的類群，全屬約有76種，主要分布于亞 種熱帶地區至太平洋島_，生長在熱帶雨林下，地生或附生。其中杏黃兜蘭（P. armeniacum) 和白花兜蘭（P. emersonii)為我國特有種。全屬均列入《野生動植物瀕危物種國際貿易公 約（CITES)》1級保護的珍稀瀕危物種，同時也是我國一級保護珍稀植物。（羅毅波等，2003)
[0003] 兜蘭花型獨特，株型娟秀，色彩艷麗，花期長，是全球范圍內最受歡迎的蘭花種類 之一。兜蘭的栽培和育種歷史悠久，發展至今已擁有數量巨大的雜交品種，在全世界范圍內 擁有最為眾多的愛好者。兜蘭的傳統繁殖方式為分株繁殖，繁殖速度極慢，利用外植體擴增 的組培技術雖有一些報道，但還不能進行產業化運行。種子的離體非共生萌發技術，是目前 全球范圍內普遍采用的兜蘭種苗生產技術。兜蘭種子微小，不含胚乳，自然條件下其萌發需 要與真菌共生，且萌發率極低。針對兜蘭屬的離體非共生萌發技術雖早有研究，但普遍存在 萌發數量低，萌發狀況不穩定等問題；其無性繁殖，即克隆更是十分困難；故兜蘭的商業化 生產主要通過人工授粉獲得果實，并進行種子的離體非共生萌發獲得實生苗的方式獲得種 苗；受限于種子的萌發率低和穩定性差，規模生產具有一定的難度。
【發明內容】
[0004] 為了克服現有技術的不足和缺點，本發明的首要目的在于提供一種兜蘭種子萌發 培養基。
[0005] 本發明的另一目的在于提供一種提高兜蘭種子離體非共生萌發率的培養方法，該 培養方法能夠有效提高兜蘭種子的離體非共生萌發的萌發率，有效縮短萌發所用時間。
[0006] 本發明的再一目的在于提供上述兜蘭種子萌發培養基的應用。
[0007] 本發明的目的通過以下技術方案予以實現：
[0008] -種兜蘭種子萌發培養基，以1/4MS培養基為基礎培養基；
[0009] 所述的兜蘭種子萌發培養基還包含的組分及其含量如下：
[0011] 所述的胺鮮酯的含量優選為1~8毫克/升；
[0012] 所述的胺鮮酯的含量進一步優選為8毫克/升；
[0013] -種提高兜蘭種子離體非共生萌發率的培養方法，包含如下步驟：
[0014] 將兜蘭種子接入兜蘭種子萌發培養基中，在22°C、黑暗的條件下培養至種子萌 發；
[0015] 所述的兜蘭種子優選為紅魔帝兜蘭種子；
[0016] 所述的兜蘭種子優選通過如下方式獲得：選擇授粉后180天（180DAP)的兜蘭果 實，經過表面消毒后，切開果實，獲得兜蘭種子；
[0017] 所述的表面消毒的方式優選為采用0. 1% (w/v)的升汞溶液浸泡7~15分鐘，期 間多次搖動，以保證表面消毒的效果；
[0018] 所述的培養的時間優選為50天；
[0019] 所述的將兜蘭種子接入兜蘭種子萌發培養基具體的操作為：將兜蘭種子撒播在已 滅菌的兜蘭種子萌發培養基表面；
[0020] 所述胺鮮酯化學名稱為乙酸二乙胺基乙醇脂（Diethyl Aminoethyl Hexanoate)， 分子式 C12H25NO2，分子量 215. 33, CAS 編號為 10369-83-2 ;
[0021] 所述的兜蘭種子萌發培養基在兜蘭繁殖領域中的應用；
[0022] 本發明相對于現有技術具有如下的優點及效果：
[0023] (1)本發明提供的兜蘭種子萌發培養基成分簡單、成本低，米用1/4MS培養基為基 礎培養基，通過降低大量元素的離子濃度，有利于兜蘭種子萌發，提高兜蘭種子離體非共生 萌發率。
[0024] (2)本發明在1/4MS培養基為基礎上，通過添加適量的胺鮮酯可顯著提高兜蘭種 子萌發率并縮短萌發時間，其中萌發率高達90%以上，添加過高或過低的胺鮮酯均不利于 兜蘭種子的萌發。
[0025] (3)本發明在1/4MS培養基為基礎上，通過添加活性炭、蛋白胨、胺鮮酯聯合作用 于種子，有效吸附種子產生的酚類、醌類物質，抑制褐化，打破種子的休眠，促進種子萌發， 顯著縮短萌發時間。
[0026] (4)本發明提供了一種提高兜蘭種子離體非共生萌發率的培養方法，該方法具有 操作簡便、成本低、提高種子離體非共生萌發的萌發率的效果，可以用于兜蘭的大規模繁殖 生產。
【具體實施方式】
[0027] 下面結合實施例對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限于此。 [0028] 實施例1
[0029] -種兜蘭種子萌發培養基，以1/4MS培養基為基礎培養基；
[0030] 所述的兜蘭種子萌發培養基還包含的組分及其含量如下：
[0031]
[0032] -種提高兜蘭種子離體非共生萌發率的培養方法，包括以下步驟：
[0033] (1)外植體的獲得：在紅魔帝兜蘭植株開花時，選取長勢好的植株作為親本進行 人工授粉，授粉后180天采收果實，以果實內種子作為外植體材料，進行無菌播種；
[0034] (2)將步驟⑴采收后的果實置于0. 10% (w/v)的升汞溶液中進行消毒12分鐘， 期間多次搖動，以保證表面消毒的效果；然后用無菌水漂洗3次；在超凈工作臺中切開果 實，將種子撒在已滅菌的兜蘭種子萌發培養基表面；
[0035] (3)將接種后的培養瓶置于22°C、黑暗條件下培養50天，當種子萌發后，轉入 20001UX的光照條件下培養至有2片真葉形成，即可轉接；
[0036] 本實施例兜蘭種子的萌發率為27. 2%。
[0037] 實施例2
[0038] -種兜蘭種子萌發培養基，以1/4MS培養基為基礎培養基；
[0039] 所述的兜蘭種子萌發培養基還包含的組分及其含量如下：
[0041] -種提高兜蘭種子離體非共生萌發率的培養方法，包括以下步驟：
[0042] (1)外植體的獲得：在紅魔帝兜蘭植株開花時，選取長勢好的植株作為親本進行 人工授粉，授粉后180天采收果實，以果實內種子作為外植體材料，進行無菌播種；
[0043] (2)將步驟⑴采收后的果實置于0. 10% (w/v)的升汞溶液中進行消毒12分鐘， 期間多次搖動，以保證表面消毒的效果；然后用無菌水漂洗3次；在超凈工作臺中切開果 實，將種子撒在已滅菌的兜蘭種子萌發培養基表面。
[0044] (3)將接種后的培養瓶置于22°C、黑暗條件下培養50天，當種子萌發后，轉入 20001UX的光照條件下培養至有2片真葉形成，即可轉接；
[0045] 本實施例兜蘭種子的萌發率為90. 1 %。
[0046] 實施例3
[0047] -種兜蘭種子萌發培養基，以1/4MS培養基為基礎培養基；
[0048] 所述的兜蘭種子萌發培養基還包含的組分及其含量如下：
[0049]
[0050] -種提高兜蘭種子離體非共生萌發率的培養方法，包括以下步驟：
[0051] (1)外植體的獲得：在紅魔帝兜蘭植株開花時，選取長勢好的植株作為親本進行 人工授粉，授粉后180天采收果實，以果實內種子作為材料，進行無菌播種；
[0052] (2)將步驟⑴采收后的果實置于0. 10% (w/v)的升汞溶液中進行消毒12分鐘， 期間多次搖動，以保證表面消毒的效果；然后用無菌水漂洗3次；在超凈工作臺中切開果 實，將種子撒在已滅菌的兜蘭種子萌發培養基表面。
[0053] (3)將接種后的培養瓶置于22°C、黑暗條件下培養50天，當種子萌發后，轉入 20001UX的光照條件下培養至有2片真葉形成，即可轉接；
[0054] 本實施例兜蘭種子的萌發率為4. 2%。
[0055] 對照實施例
[0056] -種兜蘭種子萌發培養基，以1/4MS培養基為基礎培養基；
[0057] 所述的兜蘭種子萌發培養基還包含的組分及其含量如下：
[0059] -種提高兜蘭種子離體非共生萌發率的培養方法，包括以下步驟：
[0060] (1)外植體的獲得：在紅魔帝兜蘭植株開花時，選取長勢好的植株作為親本進行 人工授粉，授粉后180天采收果實，以果實內種子作為材料，進行無菌播種；
[0061] (2)將步驟⑴采收后的果實置于0. 10% (w/v)的升汞溶液中進行消毒12分鐘， 期間多次搖動，以保證表面消毒的效果；然后用無菌水漂洗3次；在超凈工作臺中切開果 實，將種子撒在已滅菌的兜蘭種子萌發培養基表面。
[0062] (3)將接種后的培養瓶置于22°C、黑暗條件下培養50天，當種子萌發后，轉入 20001UX的光照條件下培養至有2片真葉形成，即可轉接；
[0063] 本實施例兜蘭種子的萌發率為2. 6%。
[0064] 上述實施例為本發明較佳的實施方式，但本發明的實施方式并不受上述實施例的 限制，其他的任何未背離本發明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應為等效的置換方式，都包含在本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1. 一種兜蘭種子萌發培養基，其特征在于：以1/4MS培養基為基礎培養基； 所述的兜蘭種子萌發培養基還包含的組分及其含量如下： 純椰汁 100毫升/升 活性炭 1克/升 蛋白胨 0.5克/升 胺鮮酯 1~16毫克/升。2. 根據權利要求1所述的兜蘭種子萌發培養基，其特征在于： 所述的胺鮮酯的含量為1~8毫克/升。3. 根據權利要求2所述的兜蘭種子萌發培養基，其特征在于： 所述的胺鮮酯的含量為8毫克/升。4. 一種提高兜蘭種子離體非共生萌發率的培養方法，其特征在于包含如下步驟： 將兜蘭種子接入權利要求1~3任一項所述的兜蘭種子萌發培養基中，在22°C、黑暗的 條件下培養至種子萌發。5. 根據權利要求4所述的提高兜蘭種子離體非共生萌發率的培養方法，其特征在于： 所述的兜蘭種子為紅魔帝兜蘭種子。6. 根據權利要求4所述的提高兜蘭種子離體非共生萌發率的培養方法，其特征在于： 所述的兜蘭種子通過如下方式獲得：選擇授粉后180天的兜蘭果實，經過表面消毒后， 切開果實，獲得兜蘭種子。7. 根據權利要求4所述的提高兜蘭種子離體非共生萌發率的培養方法，其特征在于： 所述的表面消毒的方式為采用〇. 1% w/v的升汞溶液浸泡7~15分鐘。8. 根據權利要求4所述的提高兜蘭種子離體非共生萌發率的培養方法，其特征在于： 所述的培養的時間為50天。9. 根據權利要求4所述的提高兜蘭種子離體非共生萌發率的培養方法，其特征在于： 所述的將兜蘭種子接入兜蘭種子萌發培養基具體的操作為：將兜蘭種子撒播在已滅菌 的兜蘭種子萌發培養基表面。10. 權利要求1~3所述的兜蘭種子萌發培養基在兜蘭繁殖領域中的應用。
【專利摘要】本發明屬于植物種苗繁殖領域，具體涉及一種兜蘭種子萌發培養基及培養方法與應用。所述的兜蘭種子萌發培養基以1/4MS培養基為基礎培養基；還包含的組分及其含量如下：純椰汁100毫升/升；活性炭1克/升；蛋白胨0.5克/升；胺鮮酯1～16毫克/升。所述的培養方法，包含如下步驟：將兜蘭種子接入兜蘭種子萌發培養基中，在22℃、黑暗的條件下培養至種子萌發。該兜蘭種子萌發培養基及其培養方法大幅度提高了萌發率，提高了生產效率。
【IPC分類】A01G31/00
【公開號】CN105325274
【申請號】CN201510732333
【發明人】譚劍鋒, 劉偉, 劉運權, 王燕君, 韓一航
【申請人】華南農業大學, 廣州華農大生物技術開發有限公司
【公開日】2016年2月17日
【申請日】2015年10月30日