一種純色萬代蘭組織培養繁育方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種純色萬代蘭組織培養繁育方法。
【背景技術】
[0002]純色萬代蘭(Vanda subconcolor T.Tang et F.T.Wang)為蘭科萬代蘭屬附生草本植物，屬于熱帶附生蘭，具有較強的抗旱能力，容易栽培，葉片和根都很有特色，葉片呈棒狀，生長在直立的莖兩旁，花序從葉腋中長出，四季都可以開花；若光照充足，一年可以開2-3次花；花期長，花色艷麗繁多，花姿奔放，是世界級的花卉名品，富有極高的觀賞價值。純色萬代蘭的種子細小，本身無法儲存養分，自然條件下，其種子萌發階段完全依靠菌根真菌為其提供養分，自然繁殖率低，種子種苗稀缺，資源更新非常困難。
【發明內容】
[0003]本發明的目的是提供一種純色萬代蘭組織培養繁育方法，能夠快速有效地提高純色萬代蘭種苗的繁殖速度和質量，實現純色萬代蘭優質種苗的工廠化育苗，以滿足生產上的需要。
[0004]本發明通過以下技術方案達到上述目的:一種純色萬代蘭組織培養繁育方法，包括以下步驟:
[0005](I)外植體的選擇與消毒:取純色萬代蘭健康植株新萌發的嫩芽作為外植體，剝去外層包葉后，依次用2v/v%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加了2-3滴吐溫-20的100毫升0.lv/v%升萊消毒8_10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經高溫高壓滅菌的蒸餾水；
[0006](2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟(I)得到的外植體剝去0.2-0.3mm的莖尖分生組織，接種到MS培養基中，在培養溫度為23-27°C，光照強度15001UX，光照時間為8-10小時/天的條件下培養60天得到無菌試管苗，其中MS培養基中添加了 1.0mg/L的
6-芐基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚乙酸INAA、2.0mg/LPVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的PH值為5.8 ;
[0007](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養60天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加了 0.2-0.6mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、
0.2-0.6mg/L的激動素ΚΤ、2.0-4.0mg/L萘乙酸ΝΑΑ、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8。
[0008]本發明的突出優點在于:
[0009](I)采用生物技術對純色萬代蘭進行組織培養快速繁殖，能夠在短時間內培育出大量適合栽培種植的純色萬代蘭幼苗，保障純色萬代蘭種苗的增殖系數和種苗質量，實現規模化生產，滿足生產上的需要。
[0010](2)采用本發明所述的培養方法得到的純色萬代蘭叢生芽增殖系數達到8-10倍，叢生芽健壯，接種到生根培養基后容易生根。
【具體實施方式】
[0011]下面結合實施例對本發明的技術方案進一步說明。
[0012]實施例1
[0013]本發明所述的純色萬代蘭組織培養繁育方法的一個實例，包括以下步驟:
[0014](I)外植體的選擇與消毒:取純色萬代蘭健康植株新萌發的嫩芽作為外植體，剝去外層包葉后，依次用2v/v%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加了2-3滴吐溫-20的100毫升0.lv/v%升萊消毒8_10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經高溫高壓滅菌的蒸餾水；
[0015](2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟⑴得到的外植體置于解剖鏡下，剝去0.2-0.3mm的莖尖分生組織，接種到MS培養基中，在培養溫度為23_27°C，光照強度15001ux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養60天得到無菌試管苗，其中MS培養基中添加了 1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚乙酸INAA、2.0mg/LPVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8 ;
[0016](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養60天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加了 0.2mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.6mg/L的激動素KT、3.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，叢生芽增殖系數為8.0。
[0017]實施例2
[0018]本發明所述的純色萬代蘭組織培養繁育方法的另一個實例，包括以下步驟:
[0019](I)外植體的選擇與消毒:取純色萬代蘭健康植株新萌發的嫩芽作為外植體，剝去外層包葉后，依次用2v/v%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加了2-3滴吐溫-20的100毫升0.lv/v%升萊消毒8_10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經高溫高壓滅菌的蒸餾水；
[0020](2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟(I)得到的外植體置于解剖鏡下，剝去0.2-0.3mm的莖尖分生組織，接種到MS培養基中，在培養溫度為23_27°C，光照強度15001ux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養60天得到無菌試管苗，其中MS培養基中添加了 1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚乙酸INAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8 ;
[0021](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養60天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加了 0.6mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.4mg/L的激動素KT、4.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，叢生芽增殖系數為8.6。
[0022]實施例3
[0023]本發明所述的純色萬代蘭組織培養繁育方法的再一個實例，包括以下步驟:
[0024](I)外植體的選擇與消毒:取純色萬代蘭健康植株新萌發的嫩芽作為外植體，剝去外層包葉后，依次用2v/v%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加了
2-3滴吐溫-20的100毫升0.lv/v%升萊消毒8_10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經高溫高壓滅菌的蒸餾水；
[0025](2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟(I)得到的外植體置于解剖鏡下，剝去0.2-0.3mm的莖尖分生組織，接種到MS培養基中，在培養溫度為23_27°C，光照強度15001ux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養60天得到無菌試管苗，其中MS培養基中添加了 1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚乙酸INAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8 ;
[0026](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養60天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加了 0.6mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的激動素KT、2.0mg/L萘乙酸NAA,2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP，30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，叢生芽增殖系數為9.8。
[0027]實施例4
[0028]本發明所述的純色萬代蘭組織培養繁育方法的又一個實例，包括以下步驟:
[0029](I)外植體的選擇與消毒:取純色萬代蘭健康植株新萌發的嫩芽作為外植體，剝去外層包葉后，依次用2v/v%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加了
2-3滴吐溫-20的100毫升0.lv/v%升萊消毒8_10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經高溫高壓滅菌的蒸餾水；
[0030](2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟(I)得到的外植體置于解剖鏡下，剝去0.2-0.3mm的莖尖分生組織，接種到MS培養基中，在培養溫度為23_27°C，光照強度15001ux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養60天得到無菌試管苗，其中MS培養基中添加了 1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚乙酸INAA、2.0mg/LPVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8 ;
[0031](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養60天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加了 0.4mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.4mg/L的激動素KT、3.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP，30g/L蔗糖和
3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，叢生芽增殖系數為10.2。
【主權項】
1.一種純色萬代蘭組織培養繁育方法，其特征在于:該方法包括以下步驟: (1)外植體的選擇與消毒:取純色萬代蘭健康植株新萌發的嫩芽作為外植體，剝去外層包葉后，依次用2v/v%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1?八％升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經高溫高壓滅菌的蒸餾水； (2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟⑴得到的外植體剝去0.2-0.3mm的莖尖分生組織，接種到MS培養基中，在培養溫度為23-27°C，光照強度15001UX，光照時間為.8-10小時/天的條件下培養60天得到無菌試管苗，其中MS培養基中添加了 1.0mg/L的.6-芐基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚乙酸INAA、2.0mg/LPVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的PH值為5.8 ; (3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養60天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加了 0.2-0.6mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、.0.2-0.6mg/L的激動素ΚΤ、2.0-4.0mg/L萘乙酸ΝΑΑ、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8。
【專利摘要】一種純色萬代蘭組織培養繁育方法，包括如下步驟：(1)取純色萬代蘭健康植株新萌發的嫩芽作為外植體進行消毒；(2)將消毒后的外植體置于MS基本培養基中誘導得到無菌試管苗；(3)將所述無菌試管苗置于MS繁殖培養基中進行試管苗快速繁殖培養獲得叢生芽。采用本發明所述的培養方法得到的純色萬代蘭叢生芽增殖系數達到8-10倍，能夠在短時間內提供健壯的純色萬代蘭優質種苗，有效解決純色萬代蘭的規模化育苗問題。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105210871
【申請號】CN201510660352
【發明人】韋坤華, 王曉峰, 韋范, 李林軒, 黃寶優, 肖冬, 繆劍華, 王一諾, 李翠, 韋瑩
【申請人】廣西壯族自治區藥用植物園
【公開日】2016年1月6日
【申請日】2015年10月12日