諾麗果提取物及其在制備防治植物炭疽病藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬植物應(yīng)用領(lǐng)域，設(shè)及一種植物活性提取物及其應(yīng)用，具體是一種諾麗果 提取物及其在制備防治植物炭痘病藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 植物炭痘病是由病原菌中的一類真菌，即黑盤抱目中的炭痘屬 (Colletotrichum)真菌的有性世代所引起的病害的統(tǒng)稱。該病主要危害葉片和果實，也 可危害枝梢，引起葉斑、落葉、果實腐爛和枝梢枯死。該病的主要特點是病部易產(chǎn)生黑色小 點，往往呈輪紋狀排雷，潮濕條件下溢出粉紅色黏抱子團。目前防治植物炭痘病的防治方法 主要是化學防治，雖然防治效果較好，但化學防治需要使用大量的化學品，容易引起環(huán)境污 染。
[0003] 諾麗果（Morindacitri化lia)又稱為蘿梨、四季果或印桑權(quán)（Indianmu化erry)， 是一種草本植物，原產(chǎn)于亞洲、澳大利亞及一些太平洋島蝸，其果被當?shù)厝朔Q作"神奇果"， 現(xiàn)引種于我國海南省。諾麗果可用來治療多種疾病，如糖尿病、高血壓、屯、臟不適、疼痛、精 神壓抑及消化不良等。
[0004] 諾麗果提取物具有抗氧化、抗炎、增強記憶力、屯、肌保護、肝細胞福射損傷保護作 用、抑制金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的活性，對真菌白色念珠菌也有抑制活性。如研究發(fā)現(xiàn) 諾麗果提取物能在幽口螺桿菌侵染過程中能下調(diào)炎癥因子化gA，比-8,C0X-2和iNOS的表 達而具有抗炎癥特性化uang，etal.，2014);諾麗果乙醇提取物W及氯仿和乙酸乙醋活性 部位能顯著的增強東賞窘堿誘導(dǎo)的記憶缺失模型鼠的記憶力和腦血流量，并減弱氧化應(yīng)激 壓力和降低乙酷膽堿醋酶活性（Pachau;ri,etal.2012)。Murali化aran等報道諾麗果的 乙酷已醋提取物能顯著的增加由AP25-35誘導(dǎo)的認知缺陷型鼠的短期記憶和長期記憶功 能，降低鼠腦中的乙酷膽堿醋酶活性，恢復(fù)AP誘導(dǎo)降低的超氧岐化酶，谷脫甘膚還原酶， 谷脫甘膚過氧化物酶、抗壞血酸水平（Murali化aran,etal. , 2010)。此外，諾麗果乙醇提取 物還能抑制金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的活性。經(jīng)檢索，諾麗果提取物在防治植物炭痘病 上的應(yīng)用尚無報道。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]本發(fā)明的目的是提供一種諾麗果提取物及其在制備防治植物炭痘病藥物中的應(yīng) 用。
[0006] 本發(fā)明所述的諾麗果提取物是將新鮮成熟的諾麗果棒汁后經(jīng)過濾、離屯、，得到的 上清液為諾麗果汁，諾麗果汁經(jīng)冷凍干燥成粉末狀，用乙醇超聲波浸提，浸提液進行抽濾， 濾液濃縮至浸膏狀得到諾麗果提取物。
[0007] 一種諾麗果極性部位提取物，是取上述諾麗果提取物加入蒸饋水制成懸浮液，用 與懸浮液等體積的石油酸或乙酸乙醋萃取，萃取相進行濃縮得到諾麗果石油酸部位提取物 或諾麗果乙酸乙醋部位提取物。
[0008] 本發(fā)明還包括上述諾麗果提取物、諾麗果石油酸部位提取物或諾麗果乙酸乙醋部 位提取物在制備防治植物炭痘病藥物中的應(yīng)用。發(fā)明人在抑菌試驗基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)上述提取 物在防治植物炭痘病上具有良好的抑菌效果，可W用來制備防治植物炭痘病藥物。
[0009] 所述防治植物炭痘病藥物是將諾麗果提取物、諾麗果石油酸部位提取物或諾麗果 乙酸乙醋部位提取物與常規(guī)輔料配合，采用現(xiàn)有工藝制得的臨床上允許的制劑。
[0010] 本發(fā)明所提供的諾麗果提取物在防治植物炭痘病上具有良好的藥效，可W用來開 發(fā)防治植物炭痘病藥物，避免化學合成藥物產(chǎn)生的3R問題：抗性（resistance)、再增獵獄 (resurgence)和殘留（resi化e)。為植物炭痘病的防治提供一條有效途徑，其制備方法簡 單，成本低。
【具體實施方式】
[0011] 下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明的【具體實施方式】作進一步詳細描述。W下實施例用于 說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通 常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。 陽〇1引實施例一
[0013] 將新鮮成熟的諾麗果棒汁后用4層紗布過濾，W4000r/min離屯、20min，上清液為 諾麗果汁。諾麗果汁經(jīng)冷凍干燥機凍干成粉末狀，用95 %乙醇超聲波（超聲頻率40曲Z，溫 度30°C，時間20min)浸提3次，合并浸提液進行抽濾，濾液經(jīng)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（水浴溫度 45°C)濃縮成浸膏得到諾麗果乙醇提取物。
[0014] 實施例二
[0015]將新鮮成熟的諾麗果棒汁后用4層紗布過濾，WSOOOr/min離屯、15min，上清液為 諾麗果汁。諾麗果汁經(jīng)冷凍干燥機凍干成粉末狀，用95%乙醇超聲波（超聲頻率40曲Z，溫 度32°C，時間30min)浸提3次，合并浸提液進行抽濾，濾液經(jīng)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（水浴溫度 45°C)濃縮成浸膏得到諾麗果乙醇提取物。加入諾麗果乙醇提取物2倍體積的蒸饋水制成 懸浮液，用懸浮液等體積的石油酸（沸程60-90°C)萃取，萃取相經(jīng)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮得 到諾麗果石油酸部位提取物。 W16] 實施例S
[0017] 將新鮮成熟的諾麗果棒汁后用4層紗布過濾，W5000r/min離屯、lOmin，上清液為 諾麗果汁。諾麗果汁經(jīng)冷凍干燥機凍干成粉末狀，用95 %乙醇超聲波（超聲頻率40曲Z，溫 度34°C，時間40min)浸提3次，合并浸提液進行抽濾，濾液經(jīng)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（水浴溫度 45°C)濃縮成浸膏得到諾麗果乙醇提取物。加入諾麗果乙醇提取物2倍體積的蒸饋水制成 懸浮液，用懸浮液等體積的乙酸乙醋萃取，萃取相經(jīng)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮得到諾麗果乙酸 乙醋部位提取物。 陽〇1引實施例四
[0019] 將新鮮成熟的諾麗果棒汁后用4層紗布過濾，W5000r/min離屯、lOmin，上清液為 諾麗果汁。諾麗果汁經(jīng)冷凍干燥機凍干成粉末狀，用95%乙醇超聲波（超聲頻率40曲Z，溫 度36°C，時間50min)浸提3次，合并浸提液進行抽濾，濾液經(jīng)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（水浴溫度 45°C)濃縮成浸膏得到諾麗果乙醇提取物。加入諾麗果乙醇提取物2倍體積的蒸饋水制成 懸浮液，依次用懸浮液等體積的正下醇萃取，萃取相經(jīng)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮得到諾麗果正 下醇部位提取物。
[0020] 抑菌實驗：
[0021] 1、諾麗提取物的溶解
[0022] 將諾麗果乙醇提取物、石油酸部位提取物、乙酸乙醋部位提取物、正下醇部位提取 物分別用水、氯仿、體積比為1 :1的丙酬和氯仿混合物、丙酬溶解，配制成20mg/ml的溶液。
[0023] 2、生物自顯影法評價諾麗果提取物抑制植物病原真菌活性 W24] 實驗共選用3株植物病原真菌，分別為蘭花尖抱炭痘菌（Colletotrichum acutatumSimmonds)，草替炭痘病菌（ColletotrichumfragariaeBrooks)，蘭花膠抱炭 痘菌（Colletotrichumgloeosporioides)，采用生物自顯影法觀察薄層板上抑菌圈的大 小來評價諾麗果不同提取物對運種=種病菌的抑制活性，菌株的培養(yǎng)及生物自顯影法參照 T油anca等報道的方法。分別取濃度為20mg/血的諾麗果實不同提取物4和8y以在薄層層 析硅膠板上矩陣點樣，揮干，紫外殺菌30min;用噴霧器將制備好的菌株懸浮液（每ml含有 3. 0X105抱子）和0. 1 %吐溫-80均勻噴灑到硅膠板上，再向硅膠板上均勻噴灑菌株懸浮液 3倍量的巧光顯示劑；（3)將接種了菌株的硅膠板置于30cmX13cmX7. 5cm的濕室（相對濕 度為100 % )中溫度為24±rC的生長箱內(nèi)進行培育，每天光照12h，光強度為60 ± 5ymol/ m^si，培養(yǎng)4d后觀察實驗結(jié)果。實驗設(shè)置空白對照（C&OH)，每個處理均設(shè)3個重復(fù)，結(jié)果 取平均值。 陽0巧]3、實驗結(jié)果
[00%] 諾麗果提取物抑制蘭花和草替炭痘病菌活性結(jié)果（抑菌直徑：mm表示無活性）
[0027]
[0028] 實驗結(jié)果表明，諾麗果乙醇提取物、石油酸部位提取物、乙酸乙醋部位提取物對蘭 花尖抱炭痘菌（Colletotrichuma州tatumSimmonds)、草替炭痘病菌（Colletotrichum fragariaebrooks)、蘭花膠抱炭痘菌（Colletotrichumgloeosporioides)均具有較好的 抑制活性，正下醇部位提取物則沒有抑菌活性，說明諾麗果乙醇提取物、石油酸部位提取 物、乙酸乙醋部位提取物在防治植物炭痘病上具有良好的藥效，可W用來開發(fā)防治植物炭 痘病藥物，為植物炭痘病的防治提供一條有效途徑。
[0029] W上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員來說，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可W做出若干改進和潤飾，運些改進和潤飾 也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種諾麗果提取物，其特征是將新鮮成熟的諾麗果榨汁后經(jīng)過濾、離心，得到的上清 液為諾麗果汁，諾麗果汁經(jīng)冷凍干燥成粉末狀，用乙醇超聲波浸提，浸提液進行抽濾，濾液 濃縮至浸膏狀得到諾麗果提取物。2. -種諾麗果極性部位提取物，其特征在于：取權(quán)利要求1所述的諾麗果提取物加入 蒸餾水制成懸浮液，用懸浮液等體積的石油醚或乙酸乙酯萃取，萃取相進行濃縮得到諾麗 果石油醚部位提取物或諾麗果乙酸乙酯部位提取物。3. 權(quán)利要求1或2所述的諾麗果提取物、諾麗果石油醚部位提取物或諾麗果乙酸乙酯 部位提取物在制備防治植物炭疽病藥物中的應(yīng)用。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：所述防治植物炭疽病藥物是將諾麗果提 取物、諾麗果石油醚部位提取物或諾麗果乙酸乙酯部位提取物與常規(guī)輔料配合，采用現(xiàn)有 工藝制得的臨床上允許的制劑。
【專利摘要】本發(fā)明屬植物應(yīng)用領(lǐng)域，涉及一種諾麗果提取物及其在制備防治植物炭疽病藥物中的應(yīng)用，所述的諾麗果提取物是將新鮮成熟的諾麗果榨汁后經(jīng)過濾、離心，得到諾麗果汁，諾麗果汁經(jīng)冷凍干燥成粉末狀，用乙醇超聲波浸提，浸提液進行抽濾，濾液濃縮至浸膏狀得到諾麗果提取物。在抑菌實驗基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)諾麗果提取物在防治植物炭疽病上具有良好的藥效，可以用來制備防治植物炭疽病藥物，為植物炭疽病的防治提供有效途徑，其制備方法簡單，成本低。
【IPC分類】A01P3/00, A01N65/08
【公開號】CN105145643
【申請?zhí)枴緾N201510481154
【發(fā)明人】譚琳, 臧小平, 馬伏寧, 劉以道, 鄭曉燕, 馬蔚紅
【申請人】中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院?？趯嶒炚?br>【公開日】2015年12月16日
【申請日】2015年8月7日