一種檀香石斛組織培養繁育方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種檀香石斛組織培養繁育方法。
【背景技術】
[0002]檀香石斛，又叫十八棒石斛，為蘭科石斛屬多年生植物卓花石斛蘭(Dendrobiumanosmum Lindl.)，主要分布于越南、菲律賓、馬來西亞、老撾、印度尼西亞等東南亞國家，國內沒有分布。檀香石斛為知名度甚高的春石斛之一，花色紫紅、花瓣質地厚、有濃厚的檀木香味，具有非常高的觀賞價值。
[0003]目前國內市場上流通的檀香石斛主要依賴東南亞國家進口，尚無人工栽培，種苗繁育也處于起步階段，一般通過分株繁育或扦插方式繁殖，這種方法繁育種苗所需時間很長，繁殖倍率低。雖然檀香石斛也有種子，但種子不具胚乳，無發芽能力，只有在真菌共生下，才能促進種子萌發生長，且發芽率非常低，因此檀香石斛的培植受到種苗生產的制約。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是提供一種檀香石斛組織培養繁育方法，能夠有效快速地提高檀香石斛種苗的繁殖速度和質量，實現檀香石斛優質種苗的工廠化育苗，滿足生產上的需要。
[0005]本發明通過以下技術方案達到上述目的:一種檀香石斛組織培養繁育方法，包括以下步驟:
[0006](I)外植體的選擇與消毒:取檀香石斛健康植株新萌發的嫩芽作為外植體，剝去外層包葉后，依次用2% (v/v)洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加了2-3滴吐溫-20的100毫升0.1 % (v/v)升萊消毒8_10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水；
[0007](2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟(I)得到的外植體置于解剖鏡下，剝去0.2-0.3mm的莖尖分生組織，接種到MS培養基中，在培養溫度為23_27°C，光照強度15001ux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養60天得到無菌試管苗，其中MS培養基中添加2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的PH值為5.8 ;
[0008](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養90天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加1.5-4.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、
1.0-3.0mg/L的萘乙酸ΝΑΑ、0.1-0.5mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8。
[0009]本發明的突出優點在于:
[0010](I)采用生物技術對檀香石斛進行組織培養快速繁殖，通過檀香石斛叢生芽的繁殖，在短時間內能夠培育出大量適合栽培種植的檀香石斛幼苗，保障檀香石斛種苗的增殖系數和種苗質量，實現規模化生產，滿足生產上的需要。
[0011](2)采用本發明所述的培養方法得到的檀香石斛叢生芽增殖系數達到10-15倍，叢生芽健壯，接種到生根培養基后容易生根，生根率可達95%以上。
【具體實施方式】
[0012]下面結合實施例對本發明的技術方案進一步說明。
[0013]實施例1
[0014]本發明所述的檀香石斛的組織培養快速繁殖方法的一個實例，包括以下步驟:
[0015](I)外植體的選擇與消毒:取檀香石斛健康植株新萌發的嫩芽作為外植體，剝去外層包葉后，依次用2% (v/v)洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加了2-3滴吐溫-20的100毫升0.1 % (v/v)升萊消毒8_10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水；
[0016](2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟(I)得到的外植體置于解剖鏡下，剝去0.2-0.3mm的莖尖分生組織，接種到MS培養基中，在培養溫度為23_27°C，光照強度15001ux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養60天得到無菌試管苗，其中MS培養基中添加2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的PH值為5.8 ;
[0017](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養90天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、l.0mg/L的萘乙酸NAA、0.5mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8。叢生芽增殖系數為10.8。
[0018]實施例2
[0019]本發明所述的檀香石斛的組織培養快速繁殖方法的另一個實例，包括以下步驟:
[0020](I)外植體的選擇與消毒:取檀香石斛健康植株新萌發的嫩芽作為外植體，剝去外層包葉后，依次用2% (v/v)洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加了2-3滴吐溫-20的100毫升0.1 % (v/v)升萊消毒8_10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水；
[0021](2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟⑴得到的外植體置于解剖鏡下，剝去0.2-0.3mm的莖尖分生組織，接種到MS培養基中，在培養溫度為23_27°C，光照強度15001ux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養60天得到無菌試管苗，其中MS培養基中添加2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的PH值為5.8 ;
[0022](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養90天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加4.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、3.0mg/L的萘乙酸NAA、0.lmg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，叢生芽增殖系數為13.2。
[0023]實施例3
[0024]本發明所述的檀香石斛的組織培養快速繁殖方法的再一個實例，包括以下步驟:
[0025](I)外植體的選擇與消毒:取檀香石斛健康植株新萌發的嫩芽作為外植體，剝去外層包葉后，依次用2% (v/v)洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加了2-3滴吐溫-20的100毫升0.1 % (v/v)升萊消毒8_10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水；
[0026](2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟⑴得到的外植體置于解剖鏡下，剝去0.2-0.3mm的莖尖分生組織，接種到MS培養基中，在培養溫度為23_27°C，光照強度15001ux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養60天得到無菌試管苗，其中MS培養基中添加2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的PH值為5.8 ;
[0027](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養90天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、2.0mg/L的萘乙酸NAA、0.3mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，叢生芽增殖系數為13.6。
[0028]實施例4
[0029]本發明所述的檀香石斛的組織培養快速繁殖方法的又一個實例，包括以下步驟:
[0030](I)外植體的選擇與消毒:取檀香石斛健康植株新萌發的嫩芽作為外植體，剝去外層包葉后，依次用2% (v/v)洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加了2-3滴吐溫-20的100毫升0.1 % (v/v)升萊消毒8_10min、無菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水；
[0031](2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟⑴得到的外植體置于解剖鏡下，剝去0.2-0.3mm的莖尖分生組織，接種到MS培養基中，在培養溫度為23_27°C，光照強度15001ux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養60天得到無菌試管苗，其中MS培養基添加2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8 ;
[0032](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8_10小時/天的條件下培養90天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、3.0mg/L的萘乙酸NAA、0.5mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，叢生芽增殖系數為15.6。
【主權項】
1.一種檀香石斛組織培養繁育方法，其特征在于:該方法包括以下步驟: (1)外植體的選擇與消毒:取檀香石斛健康植株新萌發的嫩芽作為外植體，剝去外層包葉后，依次用2% (v/v)洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1% (v/v)升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水； (2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟(I)得到的外植體置于解剖鏡下，剝去0.2-0.3mm的莖尖分生組織，接種到MS培養基中，在培養溫度為23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養60天得到無菌試管苗，其中MS培養基中添加2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的PH值為5.8 ; (3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養90天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加1.5-4.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、1.0-3.0mg/L的萘乙酸ΝΑΑ、0.1-0.5mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8。
【專利摘要】一種檀香石斛組織培養繁育方法，包括如下步驟：(1)取檀香石斛健康植株新萌發的嫩芽作為外植體進行消毒；(2)將消毒后的外植體置于MS基本培養基中誘導得到無菌試管苗；(3)將所述無菌試管苗置于MS繁殖培養基中進行試管苗快速繁殖培養獲得叢生芽。采用本發明所述的培養方法得到的檀香石斛叢生芽增殖系數達到10-15倍，能夠在短時間內提供成活率高的檀香石斛優質種苗，有效解決檀香石斛的規模化育苗問題。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105104198
【申請號】CN201510518267
【發明人】王曉峰, 韋坤華, 李林軒, 韋范, 繆劍華, 林楊, 肖冬
【申請人】廣西壯族自治區藥用植物園
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2015年8月21日