活性羊膜保存方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及醫學技術，屬于羊膜保藏措施的改進，特別是活性羊膜保存方法。
【背景技術】
[0002]羊膜來源于胚胎，是一種透明、無神經、血管與淋巴管且抗原性低的韌性組織。羊膜由上皮細胞層、基底膜、基質層、纖維母細胞層、海綿層組成，厚約0.02?0.05mm。羊膜上皮層為單層立方上皮，細胞表面及側面有很多微絨毛，有合成、分泌和沉積基底膜、細胞外間質成份的能力，具有分化的潛能，并可以分泌多種生長因子；而羊膜基質含有豐富的膠元纖維及多種形式的蛋白酶抑制劑；羊膜基底膜是人體最厚的基底膜(約0.1 μπι)，含有IV型膠原纖維網、層粘連蛋白和富含硫酸肝素的蛋白多糖，可以起屏障作用，降低羊膜的通透性。
[0003]隨著新生血管、炎癥及傷口愈合等相關疾病的患者人數增多，羊膜的使用也越來越多。羊膜的制備，尤其是羊膜活性成分的保存措施，也就成為目前研究的一個熱點。目前市面上采用的多為直接經過冷凍的干燥羊膜-生物凍干羊膜，它是將附有羊膜的紙片置于凍干機，在真空條件下用鈷-60輻射烘干，并在室溫下真空包裝，室溫下避光放置兩個月，使用前需置于含慶大霉素的生理鹽水中浸泡3min，但凍干羊膜組織結構及上皮比較容易被破壞，此方法操作相對簡單，成本較低，便于規模化批量生產，可長期保存，運輸方便，但需要用到特殊的設備，安全可靠性低，耗時長，效率低下，實施起來較為繁瑣。現存的另一種干燥羊膜-海藻糖浸泡羊膜，它是將分離出的羊膜置于10%海藻糖溶液中浸泡，然后凍干，真空包裝，射線輻照滅菌后避光保存，該方法保存的羊膜在形態學、生物學方面更接近于自然新鮮羊膜，但其效果尚未得到更多證實。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于提供一種活性羊膜保存方法，安全可靠性高，實施起來簡捷高效。
[0005]本發明的目的是這樣實現的:一種活性羊膜保存方法，①用含抗菌素的PBS浸泡無病毒且已先被漂洗過的新鮮生物羊膜，浸泡時間為5min-10min，再用PBS沖洗羊膜3次X 5min，所述抗菌素包括5萬U/L青霉素、8萬U/L妥布霉素和100mg/L鏈霉素在無菌臺上將羊膜上皮面朝上并平鋪于纖維素膜上，在羊膜可承受的拉伸度范圍內使羊膜展平；③自然晾干羊膜直至羊膜含水量在0.1% — 5%之間后將其剪成(lcm-3cm)* (lcm-3cm)的矩形；④使甘油在121°C物理環境中滅菌20分鐘后冷卻且對保存瓶進行高溫、高壓與消毒；⑤將甘油與DMEM在容器中等質量混合均勻后分別將甘油與DMEM混合成的保存液等質量倒入保存瓶中；⑥將羊膜放入保存瓶裝有的保存液中后，立即用酒精燈將熱封條熱封住保存瓶的瓶口，再將瓶口被熱封住且內置被封存的浸泡有羊膜的保存液的保存瓶置于_80°C物理環境中冷藏。
[0006]注意事項:本發明所用的羊膜供體取自經順產術獲取的胎膜，在產婦術前的病毒學檢驗結果為陰性，其獲得的胎膜在無菌潔凈環境內用無菌生理鹽(濃度0.9%氯化鈉)水洗凈存在于其表面上的血跡和污物，而且術者雙手需戴無菌手套后使羊膜與絨毛膜上輕輕分離開來(即羊膜與絨毛膜鈍性分離)然后在無菌BSS (Balanced Salt Solut1n)沖洗干凈，最后將羊膜平鋪在無菌玻璃平板上，用細胞刮子刮除其海綿層、纖維母細胞層及漿液性滲出液等。
[0007]本發明安全可靠性高，保證無污染，其保存的羊膜性能與新鮮羊膜接近，生物活性高，膠原破壞率少，易于手術操作，作為新鮮羊膜的替代物，取材方便，實施起來簡捷高效，實用性強，能被廣大患者接受并應用于臨床。
【具體實施方式】
[0008]—種活性羊膜保存方法，①用含抗菌素的PBS(Phosphate Buffer Saline)浸泡無病毒且已先被漂洗過的新鮮羊膜，浸泡時間為5min-10min，再用PBS沖洗羊膜3次X 5min，所述抗菌素包括5萬U/L青霉素、8萬U/L妥布霉素和100mg/L鏈霉素；②在無菌臺上將羊膜上皮面朝上并平鋪于纖維素膜上，在羊膜可承受的拉伸度范圍內使羊膜展平；③自然晾干羊膜直至羊膜含水量(質量比例)在0.1% — 5%之間后將其剪成(lcm-3cm)* (lcm-3cm)的矩形；④使甘油在121°C物理環境中滅菌20分鐘后冷卻且對保存瓶進行高溫、高壓與消毒；⑤將甘油與DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium/培養基)在容器中等質量混合均勻后分別將甘油與DMEM混合成的保存液等質量倒入保存瓶中；⑥將羊膜放入保存瓶裝有的保存液中后，立即用酒精燈將熱封條熱封住保存瓶的瓶口，再將瓶口被熱封住且內置被封存的浸泡有羊膜的保存液的保存瓶置于-80°C物理環境中冷藏。
[0009]需使用活性羊膜時，將其從-80°C物理環境中從保存瓶內取出，置于常溫下3-5min，保存液由固態變為液態后，方可取出被浸泡的羊膜使用，在_80°C時浸泡于被封存于保存瓶內的保存液中的活性羊膜一般保存壽命為2年。
【主權項】
1.一種活性羊膜保存方法，其特征在于:①用含抗菌素的PBS浸泡無病毒且已先被漂洗過的新鮮羊膜，浸泡時間為5min-10min，再用PBS沖洗羊膜3次X 5min，所述抗菌素包括5萬U/L青霉素、8萬U/L妥布霉素和100mg/L鏈霉素；②在無菌臺上將羊膜上皮面朝上并平鋪于纖維素膜上，在羊膜可承受的拉伸度范圍內使羊膜展平；③自然晾干羊膜直至羊膜含水量在0.1% — 5%之間后將其剪成(lcm-3cm)* (lcm-3cm)的矩形；④使甘油在121°C物理環境中滅菌20分鐘后冷卻且對保存瓶進行高溫、高壓與消毒；⑤將甘油與DMEM在容器中等質量混合均勻后分別將甘油與DMEM混合成的保存液等質量倒入保存瓶中將羊膜放入保存瓶裝有的保存液中后，立即用酒精燈將熱封條熱封住保存瓶的瓶口，再將瓶口被熱封住且內置被封存的浸泡有羊膜的保存液的保存瓶置于-80°C物理環境中冷藏。
【專利摘要】本發明公開了一種活性羊膜保存方法，①用PBS浸泡無病毒且已先被漂洗過的新鮮羊膜，浸泡時間為5min-10min，再用PBS沖洗羊膜3次×5min，所述抗菌素包括5萬U/L青霉素、8萬U/L妥布霉素和100mg/L鏈霉素；②在無菌臺上將羊膜上皮面朝上并平鋪于纖維素膜上，在羊膜可承受的拉伸度范圍內使羊膜展平；③自然晾干羊膜直至羊膜含水量在0.1％—5％之間后將其剪成矩形；④使甘油在121℃物理環境中滅菌20分鐘后冷卻且對保存瓶進行消毒；⑤將甘油與DMEM在容器中等質量混合均勻后分別將甘油與DMEM混合成的保存液等質量倒入保存瓶中；⑥將羊膜放入保存瓶裝有的保存液中后，立即用酒精燈將熱封條熱封住保存瓶的瓶口，再將保存瓶置于-80℃物理環境中冷藏。本發明安全可靠性高，實施起來簡捷高效。
【IPC分類】A01N1/02
【公開號】CN105028386
【申請號】CN201510300532
【發明人】熱孜萬·買買提明
【申請人】熱孜萬·買買提明
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年6月5日