一種高精度ms培養基質的規模化制作方法
【技術領域】
[0001]本發明公開了一種高精度MS培養基質的規模化制作方法，屬于植物生物技術領域。更具體地說是一種包括有準確計算、精確稱量、先少后多地混合、密封、單獨母液制備、啟封使用等六個步驟，以期獲得不同批次和批次之間誤差極小的培養基質、減少試驗誤差的方法。
【背景技術】
[0002]植物組織培養技術或無土栽培技術通常需要配制培養基母液，即配制擴大一定倍數、含有各種類型試劑的液體。然而，由于母液含有不同類型試劑，常常分為大量元素、微量元素、鐵鹽和有機元素四大類，而四大類所擴大的倍數不同，導致藥品使用質量不一致，一則容易出現計算誤差；二則藥品的廠家、質量不一致，即使計算、稱量一致，也會影響試驗結果；三則由于母液為液體狀態，在春夏之交季節，由于氣溫上升以及濕度增大，極其容易導致母液感染細菌、霉菌，導致母液中呈現不同顏色或出現沉淀的現象，浪費了原料；四則會因稱量者對容器刻度的認知(尤其是微量元素)、儀器精密度的不同而出現較大誤差。
[0003]鑒于母液配制的上述缺點，用常規的母液配制培養基，常常會出現因稱量者、藥品、季節等因素而導致的試驗結果失敗或無法重復的現象，極大的影響了運用植物組織培養或無土栽培技術開展試驗的進程，打擊了試驗者的信心。
【發明內容】
[0004]一種高精度MS培養基質的規模化制作方法，其特征在于，所述的方法中包括有準確計算、精確稱量、先少后多地混合、密封、單獨母液制備、啟封使用等六個步驟。
[0005]根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的六個步驟具體操作如下:
①準確計算:將MS基本培養基所含的16種元素擴大1000倍，即鹽酸硫胺素0.1g, 二水鉬酸鈉0.25g，煙酸0.5g，鹽酸吡哆醇0.5g，碘化鉀0.83g，甘氨酸2g，硼酸6.2g，七水硫酸鋅8.6g，四水硫酸錳22.3g，乙二胺四乙酸鈉鐵36.5g，肌醇100g，磷酸二氫鉀170g，七水硫酸鎂370g，二水氯化鈣440g，硝酸銨1650g，硝酸鉀1900g ；2種元素六水氯化鈷和五水硫酸銅擴大10000倍，即各0.25g ；
②精確稱量:按照①中計算的結果準確稱量，尤其是要用萬分之一天平準確稱量各0.25g的六水氯化鈷和五水硫酸銅；
③先少后多地混合:按照量的少多進行先后混合，即按照鹽酸硫胺素，二水鉬酸鈉，煙酸，鹽酸吡哆醇，碘化鉀，甘氨酸，硼酸，七水硫酸鋅，四水硫酸錳，乙二胺四乙酸鈉鐵，肌醇，磷酸二氫鉀，七水硫酸鎂，二水氯化鈣，硝酸銨，硝酸鉀的順序混合均勻，共計4707.78g ;
④密封:將混合后的固體基質按照250g每瓶的要求分裝于塑料容器中，并進行密封；
⑤單獨母液制備:六水氯化鈷和五水硫酸銅各稱量0.25g，溶于IL蒸餾水中，配制成10000倍母液；
⑥啟封使用:根據需要，每IL蒸餾水中加入準確稱量的上述固體基質4.7g，加熱待其完全溶解后加入10PL六水氯化鈷和五水硫酸銅的單獨母液，進而加入其它所需試劑即可。
[0006]本發明的有益效果:該高精密度培養基質的規模化制作方法具有以下特點，即不同批次的基質之間無計算誤差；由于16種試劑都擴大了 1000倍，2種試劑擴大了 10000倍，不同批次的基質之間的稱量誤差極小，精密度高；理論上，由于固體基質每次為1000倍的使用量(以每次IL計算)，即可以配制1000L的上述配方，液體母液每次僅需要ΙΟΟμ?，批次內部不會出現因為使用不同廠家、不同時期的試劑而導致的人為誤差；擴大后的固體基質為每250g密封于一個塑料容器中，可避免因天氣、溫度、水分等外界因素影響導致出現液體母液常見的沉淀、發霉等現象，而液體基質僅為兩種元素的混合。擴大10000倍后精密度高；上述的諸多優點都為以該培養基為基質開展的后續試驗，獲得準確的試驗結果奠定基礎O O
[0007]【具體實施方式】:
下面結合具體實施例對本發明進行進一步的描述。
[0008]本實施例中一種高精度MS(含碳源和固定介質)固體培養基質的規模化制作方法，包括有準確計算、精確稱量、先少后多地混合、密封、單獨母液制備、啟封使用等六個步驟。
[0009]上述六個步驟具體操作如下:
①準確計算:將MS基本培養基所含的16種元素擴大1000倍，即鹽酸硫胺素0.1g, 二水鉬酸鈉0.25g，煙酸0.5g，鹽酸吡哆醇0.5g，碘化鉀0.83g，甘氨酸2g，硼酸6.2g，七水硫酸鋅8.6g，四水硫酸錳22.3g，乙二胺四乙酸鈉鐵36.5g，肌醇100g，磷酸二氫鉀170g，七水硫酸鎂370g，二水氯化鈣440g，硝酸銨1650g，硝酸鉀1900g ；2種元素六水氯化鈷和五水硫酸銅擴大10000倍，即各0.25g ；
②精確稱量:按照①中計算的結果準確稱量，尤其是要用萬分之一天平準確稱量各0.25g的六水氯化鈷和五水硫酸銅；
③先少后多地混合:按照量的少多進行先后混合，即按照鹽酸硫胺素，二水鉬酸鈉，煙酸，鹽酸吡哆醇，碘化鉀，甘氨酸，硼酸，七水硫酸鋅，四水硫酸錳，乙二胺四乙酸鈉鐵，肌醇，磷酸二氫鉀，七水硫酸鎂，二水氯化鈣，硝酸銨，硝酸鉀的順序混合均勻，共計4707.78g ;
④密封:將混合后的固體基質按照250g每瓶的要求分裝于塑料容器中，并進行密封；
⑤單獨母液制備:六水氯化鈷和五水硫酸銅各稱量0.25g，溶于IL蒸餾水中，配制成10000倍母液；
⑥啟封使用:根據需要，每IL蒸餾水中加入準確稱量的上述固體基質4.7g，加熱待其完全溶解后加入10PL六水氯化鈷和五水硫酸銅的單獨母液，進而加入其它所需試劑即可。
[0010]將上述基質配制后的IL溶液加入30g的蔗糖和5g瓊脂粉，進而加入Iml的IN的Κ0Η，溶解完全后分裝于30個200ml的玻璃瓶中，121°C滅菌20min后。于超凈工作臺上接種甜葉菊莖段，25°C光照12h條件下培養20d后，生根良好。
【主權項】
1.一種高精度MS培養基質的規模化制作方法，其特征在于，所述的方法中包括有準確計算、精確稱量、先少后多地混合、密封、單獨母液制備、啟封使用等六個步驟。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的六個步驟具體操作如下: ①準確計算:將MS基本培養基所含的16種元素擴大1000倍，即鹽酸硫胺素0.1g, 二水鉬酸鈉0.25g，煙酸0.5g，鹽酸吡哆醇0.5g，碘化鉀0.83g，甘氨酸2g，硼酸6.2g，七水硫酸鋅8.6g，四水硫酸錳22.3g，乙二胺四乙酸鈉鐵36.5g，肌醇100g，磷酸二氫鉀170g，七水硫酸鎂370g，二水氯化鈣440g，硝酸銨1650g，硝酸鉀1900g ；2種元素六水氯化鈷和五水硫酸銅擴大10000倍，即各0.25g ； ②精確稱量:按照①中計算的結果準確稱量，尤其是要用萬分之一天平準確稱量各0.25g的六水氯化鈷和五水硫酸銅； ③先少后多地混合:按照量的少多進行先后混合，即按照鹽酸硫胺素，二水鉬酸鈉，煙酸，鹽酸吡哆醇，碘化鉀，甘氨酸，硼酸，七水硫酸鋅，四水硫酸錳，乙二胺四乙酸鈉鐵，肌醇，磷酸二氫鉀，七水硫酸鎂，二水氯化鈣，硝酸銨，硝酸鉀的順序混合均勻，共計4707.78g ; ④密封:將混合后的固體基質按照250g每瓶的要求分裝于塑料容器中，并進行密封； ⑤單獨母液制備:六水氯化鈷和五水硫酸銅各稱量0.25g，溶于IL蒸餾水中，配制成10000倍母液； ⑥啟封使用:根據需要，每IL蒸餾水中加入準確稱量的上述固體基質4.7g，加熱待其完全溶解后加入10PL六水氯化鈷和五水硫酸銅的單獨母液，進而加入其它所需試劑即可。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，該高精密度培養基質的規模化制作方法具有以下特點，即不同批次的基質之間無計算誤差；由于16種試劑都擴大了 1000倍，2種試劑擴大了 10000倍，不同批次的基質之間的稱量誤差極小，精密度高；理論上，由于固體基質每次為1000倍的使用量(以每次IL計算)，即可以配制1000L的上述配方，液體母液每次僅需要ΙΟΟμ?，批次內部不會出現因為使用不同廠家、不同時期的試劑而導致的人為誤差；擴大后的固體基質為每250g密封于一個塑料容器中，可避免因天氣、溫度、水分等外界因素影響導致出現液體母液常見的沉淀、發霉等現象，而液體基質僅為兩種元素的混合；擴大10000倍后精密度高；上述的諸多優點都為以該培養基為基質開展的后續試驗，獲得準確的試驗結果奠定基礎。
【專利摘要】本發明公開了一種高精度MS培養基質的規模化制作方法，屬于植物生物技術領域。首先計算基質所含的16種元素擴大1000倍后的需求量以及CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O擴大10000倍后的需求量；準確稱取藥品；將16種元素按照需求量的少多進行先后混合、密封；將CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O用1L蒸餾水溶解后備用；根據需要分別進行啟封使用。通過該方法可制備的基質具有精度高、操作方便、快速、應用簡單、不同批次以及批次內誤差小的特點，尤其是避免了含量極少的藥品CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O的稱量誤差，可運用于植物組織培養等生物技術用途。
【IPC分類】A01H4-00, A01G31-00
【公開號】CN104719140
【申請號】CN201510082547
【發明人】錢夕剛
【申請人】錢夕剛
【公開日】2015年6月24日
【申請日】2015年2月16日