一種野生干巴菌原生態種植方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于食用菌人工栽培技術領域，涉及一種野生干巴菌原生態種植方法。
【背景技術】
[0002]干巴菌是云南省特有的珍稀野生食用菌，中國其他省份及國外都無法生長，學名繡球菌，也叫對花菌、馬牙菌等，它生長在滇中及滇西的山林松樹間，產于七八月雨季，至今仍未實現人工種殖。由于受自然環境條件的制約，產量相當有限，至今仍未實現人工栽培。干巴菌含粗蛋白24.15%，粗纖維8.45%，總糖量3.1 %，10g含維生素Cl.10mg，維生素A16.0mg，B族維生素1.2mg ;含有18種氨基酸和人體必需的8種氨基酸；從干巴菌中還發現一系列新的對聯三苯類色素，具有高度抗氧化活性；干巴菌中含有的多種微量元素鐵、鉀、納、磷、媽，特別是人體普遍缺乏的砸元素，其含量高達4603.59 μ g/100g，屬于罕見的富砸珍貴野生菌，砸有抑制腫瘤細胞增殖和提高機體免疫功能。干巴菌營養豐富，香味獨特，一直以來都處于供不應求狀況。
[0003]目前，市場的供應完全依賴于采集野生資源，在利益的驅使下，野生干巴菌被過度采收，促使野生干巴菌自然資源遭到嚴重破壞，產量和質量逐年下降，價格連年攀升，因此開發一種野生干巴菌原生態種植技術是非常必要的。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于提供一種野生干巴菌原生態種植方法，實現了利用自然環境人工干預制種，并培育野生干巴菌的生態種植技術。
[0005]本發明具體通過以下技術方案實現:
[0006]一種野生干巴菌原生態種植方法，具體包括以下步驟:
[0007]I)自然干巴菌菌種分離:
[0008]選擇5?7月自然環境條件下生長的干巴菌子實體，接種于菌種分離培養皿中，經過純化、鑒定、基因測序，確定為干巴菌菌種，該菌種為一級種；
[0009]2) 二級栽培種的制備:
[0010]所述的二級栽培種分為固體二級種和液體二級種，具體為:
[0011]固體二級種:將固體培養基在121°C滅菌1.5?2小時待溫度下降到室溫，無菌條件下接入經純化的干巴菌一級種；
[0012]液體二級種:將液體培養基高壓蒸汽121°C滅菌0.5?1.0小時，冷至室溫，接種一級種，在濕度60%?80%條件下搖床發酵培養5?15天；
[0013]3)固體二級栽培種的培育:
[0014]在溫度15°C?26°C，濕度60%?80%條件下，培養18?32天，培養基呈現白色菌絲整齊排列，生長飽滿，子實體菌肉整齊聚合為一體；
[0015]4)選擇具有野生干巴菌的生態土壤，土壤PH4.0?7.5，有機質1.0以上；
[0016]5)固體二級栽培種侵染擴繁:在松樹根周圍選點，形成人工菌絲浸染，根據松樹生長年齡，選株行距2米X2米=166株/畝，株行距2米X3米=111株/畝，株行距1.5米父2米=222株/畝，株行距1.5米X3米=148株/畝，每畝以200穴點至250穴點栽培；穴點直徑10cm，深10?12cm，覆土 2?3cm。
[0017]6)接種后穴點覆蓋遮陰網，適期觀察干濕度、昆蟲危害；
[0018]7)采收。
[0019]所述的固體培養基通過以下方法制備:選顆粒飽滿苦蕎或甜蕎15%?40%，浸泡36?75小時，按固體栽培種配松針I %?5 %、松樹皮5 %?10 %、松木肩5 %?15 %，棉籽殼15%?50%，玉米芯15%?30%，麥麩10%?25%，石膏粉0.1%?1.5%,PH5.0?7.5，瓶裝或袋裝。
[0020]所述的液體培養基通過在PDA培養基中加入質量分數I %?15 %的松針浸汁和質量分數0.1%?0.5%的石膏粉制得。
[0021]所述的干巴菌的生長環境為光照度250?850Lux，海拔1300?2350米，年均溫度12.5°C?26°C的松林地環境。
[0022]步驟(5)所述的栽培種侵染具體為:
[0023]I)液體菌種浸染:每一個浸染點注射10?40毫升液體栽培種，分為灌根法和側根注射法。
[0024]2)固體栽培種浸染:①斷根法:采用直徑14cm干巴菌打孔器在松樹周圍距主干60?80cm處打10?12cm深孔，接固體栽培種每穴100?200克；②須根、側根接種法:露出地面的松樹根，用干巴菌打孔器打孔接種，每穴100?200克，孔穴深度10?12cm。
[0025]本發明的有益效果為:通過本項發明，為野生干巴菌后期進行仿生態種植打下基礎，可以對產量及質量進行控制。實現了來自自然界的食用菌經馴化、培養后再回到自然種植突破。
【具體實施方式】
[0026]下面結合實施例對本發明做進一步的說明，以下所述，僅是對本發明的較佳實施例而已，并非對本發明做其他形式的限制，任何熟悉本專業的技術人員可能利用上述揭示的技術內容加以變更為同等變化的等效實施例。凡是未脫離本發明方案內容，依據本發明的技術實質對以上實施例所做的任何簡單修改或等同變化，均落在本發明的保護范圍內。
[0027]實施例1
[0028]選宜良縣湯池鎮(松樹林200畝)，進行野生干巴菌的原生態種植，具體通過以下方法:
[0029]I)菌種分離培養基:PDA培養基中加入質量分數1%?15%的松針浸汁制作成母種分尚培養基。
[0030]2)自然干巴菌菌種分離:選擇在5月至7月自然環境條件下生長的干巴菌子實體，接種于菌種分離培養皿中，經過純化、鑒定、基因測序，確定為干巴菌菌種，供制備袋或瓶裝培養基培養菌絲體用，該菌種為一級種。
[0031]3) 二級栽培種制備:選顆粒飽滿苦蕎或甜蕎15%?40%，浸泡36?75小時，配松針I %?5%、松樹皮5%?10%、松木肩5%?15%，棉籽殼15%?50%，玉米芯15%?30%，麥麩10%?25%，石膏粉0.1%?L 5%，ΡΗ5.0?7.5，瓶裝或袋裝。121°C滅菌1.5?2小時。待溫度下降到室溫，無菌條件下接入經純化的干巴菌一級種。
[0032]4)培養條件:經接種的栽培種放到溫度15°C?26°C，濕度60%?80%，培養18?32天，袋裝或瓶裝培養基呈現白色菌絲整齊排列，生長至滿袋，滿瓶，其狀如子實體的菌肉整齊聚合為一體。
[0033]5)菌絲分泌黑色素在15°C?28°C，濕度65%?85%，培養時間為15?30天，白色菌絲體分泌黑色素，從點到面逐漸轉黑，至全袋或整瓶變成黑色菌絲體，隨培養時間延長，菌絲體黑色素不斷增加，留用作為栽培種。
[0034]6)于2013年6月20日接種固體種，栽培面積6畝，采用干巴菌專用打孔器打穴，每穴接種固體培養基200克，每畝行株距1.1米X 1.5米，該地在松林茂盛，每畝中240個點穴，當年遇干旱季節，接種后兩周采取遮陰管理，當年干巴菌收入少，畝共收干巴菌I公斤(2009?2013年是云南干旱期)。2014年5月進入雨季，6?8月共收獲干巴菌50?60公斤，每公斤市場價1000元，2014年收入6?7萬元。
[0035]實施例2
[0036]選宜良縣湯池鎮(松樹林I畝)，進行野生干巴菌的原生態種植，具體通過以下方法:
[0037]I)菌種分離培養基:PDA培養基中加入質量分數1%?15%的松針浸汁制作成母種分尚培養基。
[0038]2)自然干巴菌菌種分離:選擇在5月至7月自然環境條件下生長的干巴菌子實體，接種于菌種分離培養皿中，經過純化、鑒定、基因測序，確定為干巴菌菌種，供制備袋或瓶裝培養基培養菌絲體用，該菌種為一級種。
[0039]3) 二級栽培種制備:PDA培養基中加入質量分數1%?15%的松針浸汁，質量分數0.1%?0.5%的石膏粉，高壓蒸汽121 °C滅菌0.5?1.0小時，滅菌完畢后，待冷至室溫時，接種一級種，濕度60%?80%，搖床發酵培養5?15天，作為液體二級栽培種。
[0040]4)培養條件:經接種的栽培種放到溫度15°C?26°C，濕度60%?80%，培養18?32天，袋裝或瓶裝培養基呈現白色菌絲整齊排列，生長至滿袋，滿瓶，其狀如子實體的菌肉整齊聚合為一體。
[0041]5)菌絲分泌黑色素在15°C?28°C，濕度65%?85%，培養時間為15?30天，白色菌絲體分泌黑色素，從點到面逐漸轉黑，至全袋或整瓶變成黑色菌絲體，隨培養時間延長，菌絲體黑色素不斷增加，留用作為栽培種。
[0042]6)于2013年6月20日接種液體種，每穴接種液體菌種40毫升，當年干旱液體菌種受影響，當年僅為接種穴的20%。2014年液體菌種接種的200穴，60%的穴點均收獲干巴菌。
【主權項】
1.一種野生干巴菌原生態種植方法，其特征在于:包括以下步驟: 1)自然干巴菌菌種分離:選擇5?7月自然環境條件下生長的干巴菌子實體，接種于菌種分離培養皿中，經過純化、鑒定、基因測序，確定為干巴菌菌種，該菌種為一級種； 2)二級栽培種的制備: 將固體培養基在121°C滅菌1.5?2小時待溫度下降到室溫，無菌條件下接入經純化的干巴菌一級種； 3)固體二級栽培種的培育:在溫度15°C?26°C，濕度60%?80%條件下，培養18?32天，培養基呈現白色菌絲整齊排列，生長飽滿，子實體菌肉整齊聚合為一體； 4)選擇具有野生干巴菌的生態土壤，土壤PH4.0?7.5，有機質1.0以上； 5)二級栽培種侵染:在松樹根周圍選點，形成人工菌絲浸染，根據松樹生長年齡，選株行距2米X2米=166株/畝，株行距2米X3米=111株/畝，株行距1.5米X2米=222株/畝，株行距1.5米X3米=148株/畝，每畝以111穴點至250穴點栽培；穴點直徑10cm，深10?12cm，覆土 2?3cm，每畝以111穴點至250穴點栽培； 6)接種后穴點覆蓋遮陰網，適期觀察干濕度、昆蟲危害； 7)米收。
2.根據權利要求1所述的一種野生干巴菌原生態種植方法，其特征在于:所述的固體培養基通過以下方法制備:選顆粒飽滿苦蕎或甜蕎15%?40%，浸泡36?75小時，按固體栽培種配松針I %?5 %、松樹皮5 %?10 %、松木肩5 %?15 %，棉籽殼15 %?50 %，玉米芯15%?30%，麥麩10%?25%，石膏粉0.1%?1.5%, PH5.0?7.5，瓶裝或袋裝。
3.根據權利要求1所述的一種野生干巴菌原生態種植方法，其特征在于:所述的干巴菌的生長環境為光照度250?850Lux，海拔1300?2350米，年均溫度12.5°C?26°C的松林地環境。
4.根據權利要求1所述的一種野生干巴菌原生態種植方法，其特征在于:步驟(5)所述的點穴栽培具體為:采用直徑14cm干巴菌打孔器在松樹周圍距主干60?80cm處打10?12cm深孔，接固體栽培種每穴100?200克。
5.根據權利要求1所述的一種野生干巴菌原生態種植方法，其特征在于:步驟(5)所述的點穴栽培具體還為:露出地面的松樹根，用干巴菌打孔器打孔接種，每穴100?200克，孔穴深度10?12cm，覆土 2?3cm。
【專利摘要】本發明公開了一種野生干巴菌原生態種植方法，具體通過自然干巴菌菌種分離、二級栽培種的制備及培育、選擇干巴菌的生長環境、栽培種侵染擴繁及正常管理來完成。本發明方法從自然界采集，經實驗室馴化、培養，制造馴化種，再進行種植，長出野生干巴菌，既修復了原來的松林和生態，保證了野生干巴菌品質，又大大提高了產量，有利于野生干巴菌的人工生態擴繁。
【IPC分類】A01G1-04, C05G1-00
【公開號】CN104718979
【申請號】CN201510089826
【發明人】羅星野, 姜國銀, 陳天蓉, 楊春花, 姜怡, 張炳炎
【申請人】昆明羅望子科工貿有限公司
【公開日】2015年6月24日
【申請日】2015年2月27日