一種提高植物組培外植體成活率的衣膜包囊培養法
【技術領域】
[0001] 本發明屬農林領域的植物組織培養技術，具體涉及提高植物組培外植體初代培養 成活率的方法。
【背景技術】
[0002] 植物組織培養技術種苗生產、脫除病毒、種質改良等具有廣闊的市場前景。目前植 物組織培養技術環節還存在不少問題，外植體(種子、芽、莖段、葉、根、花瓣、果實等）初代誘 導期間死亡而致組織培養失敗是普遍現象。外植體死亡的原因，除了合適的培養基配方外， 外植體沒有專門的吸收組織或器官，主要靠與培養基的接觸面(切口）吸收營養成分和激 素，接觸面積小且吸收功能非常低下，無法滿足外植體細胞分裂、生長的需要，也是導致外 植體死亡的主要原因,尤其是微小外植體，自身貯存營養物質少,對組培環境適應能力差， 更是難以成活，但目前沒有有效的外植體保活方法。植物分生組織培養是脫除病毒的最有 效方法，但植物僅莖尖生長點分生組織不帶毒或病毒濃度低，由于分生組織只是一群細胞， 只能切取僅〇.I-Imm外植體接種，外植體極其微小接種培養成活率極低，限制了莖尖脫毒 法在脫除病毒的廣泛應用，以致植物脫除病毒進展緩慢。此外，植物的同一組織常常是由2 種或者2種以上遺傳型細胞組成的，稱嵌合體，切取的外植體組織塊含不同遺傳型細胞，培 養所得無性系（愈傷組織、瓶苗）仍是遺傳上異質的嵌合體，這種變異影響組培無性系的純 度和質量，給組織培養技術的應用造成障礙，所以必須盡量切取較小塊外植體，可望保證外 植體細胞同一性，規避培養出的愈傷組織、瓶苗為嵌合體，保證組培無性系的遺傳一致性。
【發明內容】
[0003] 本發明以含營養成分和激素的衣膜劑包囊整個組培外植體再接種到培養基培養， 衣膜對植物組織幾乎沒有傷害，透水、透氣、透光，培養基的營養及激素能被外植體吸收，細 胞呼吸不受影響，相對常規接種方法，擴大了外植體與營養成分、激素的接觸面積，增強營 養成分和激素的吸收，可減輕外植體因營養不良而壞死，提高成活率。
[0004] 一種提高植物組培外植體成活率的包囊培養法，其特征在于，本發明以海藻酸鈉 為成膜劑，附加成分包括營養成分、植物生長調節物質(激素)，種類和濃度及酸堿度與培養 基的營養成分、激素及酸堿度一致。海藻酸鈉交聯固化劑為氯化鈣溶液。
[0005] 本發明提供的技術方案如下： 海藻酸鈉衣膜劑配制、使用方法：海藻酸鈉濃度2%_5%，先用少量水溶化，與耐高壓滅 菌的營養成分、激素混合，定容，調pH與培養基酸堿度一致(一般pH5. 8)，高壓滅菌，冷卻待 用。不耐高壓滅菌的營養成分、激素溶液過濾除菌，加入已經高壓滅菌的海藻酸鈉成膜劑， 攪拌混勻待用。氯化鈣濃度2%，單獨高壓滅菌。接種前將已經消毒的外植體泡入海藻酸鈉 衣膜劑，用滴管吸取外植體，連同衣膜劑滴入氯化鈣溶液，也可從海藻酸鈉衣膜劑夾取外植 體，輕輕抖掉外植體表面多余衣膜劑粘稠液，投入氯化鈣溶液，固化數分鐘。取出外植體投 入無菌水洗去多余氯化鈣，在無菌濾紙上吸去無菌水，接種時輕壓外植體，使其稍陷入瓊脂 培養基表面。
[0006] 本發明的有益效果在于：常規組培方法的營養成分、激素僅存在于培養基，外植體 接觸吸收面積小。本發明將含營養、激素的衣膜劑包囊整個外植體,可擴大外植體吸收養 分、激素面積，提高組培外植體成活率，為外植體誘導成功提供保障。該方法操作簡便，效果 明顯，便于推廣應用。
【具體實施方式】 [0007] 實施例一 蝴蝶蘭)組培的無菌類原球莖為材料，把體視顯微鏡放在超凈臺， 在體視顯微鏡下，離類原球莖莖尖先端約Imm切取莖尖為外植體，對照組直接接種，培養基 配方為l/2MS+6-BA5mg/L+椰子汁200ml/L+蔗糖20g/L，pH5. 8。衣膜包囊外植體方法，海藻 酸鈉濃度3%，附加營養激素同培養基各組分，調pH至5. 8,高壓滅菌后冷卻待用，另備2%氯 化鈣高壓滅菌。接種時將莖尖投入海藻酸鈉衣膜劑，用鑷子取出輕輕抖掉多余粘稠液，投入 氯化鈣溶液，固化3分鐘，取出投入無菌水洗去多余氯化鈣，在無菌濾紙上吸去無菌水，接 種時輕壓外植體,使其稍陷入瓊脂培養基表面。每瓶接種5個外植體，每次3瓶，重復3次。 接種后在25°C、15001UX光下培養，光照12h/d。培養期間均未發生微生物污染，不同培養時 間的莖尖褐化率、誘導(細胞分裂而膨大）率結果見表1。
[0008] 表1蝴蝶蘭類原球莖莖尖的衣膜包囊培養法效果觀察
【主權項】
1. 一種提高植物組培外植體成活率的衣膜包囊培養法，其特征在于：衣膜劑包括海藻 酸鈉成膜劑、營養成分、植物激素，衣膜劑粘液基本無色透明，與已表面消毒的外植體混合， 用滴管吸取外植體，連同衣膜劑滴入氯化鈣溶液，也可夾取表面沾粘有衣膜劑的外植體塊， 投入氯化鈣溶液，衣膜固化，接種在培養基培養。
2. 如權利要求1所述的植物組培衣膜包囊外植體方法，其特征在于：所述衣膜劑的營 養成分，植物激素、酸堿度與培養基所添加的營養成分、植物激素、酸堿度一致。
3. 如權利要求1所述的植物組培衣膜包囊外植體方法，其特征在于：所述海藻酸鈉濃 度為2%_5%，聞壓滅困。
4. 如權利要求1所述的植物組培衣膜包囊外植體方法，其特征在于：所述的營養成分、 植物激素，耐高壓滅菌的混溶于海藻酸鈉溶液一起高壓滅菌，不耐高壓滅菌的過濾除菌后 混溶于已高壓滅菌海藻酸鈉溶液。
5. 如權利要求1所述的植物組培衣膜包囊外植體方法，其特征在于：所述的氯化鈣溶 液濃度2%，高壓滅菌后冷卻。
【專利摘要】本發明公開了一種在植物組培中以含營養成分、植物激素的衣膜劑包囊外植體以提高培養成活率的方法，屬農林領域的植物組織培養技術。包括以透氣、透水、透光性好，對植物組織安全、耐高壓滅菌衣膜劑包囊外植體。成膜劑為海藻酸鈉溶液，混溶營養成分、激素，與已表面消毒的外植體混合，取出外植體浸入氯化鈣溶液，交聯固化成粒狀。通過包囊，可擴大外植體對營養、激素的接觸、吸收面積，提高誘導培養成活率。在植物組培中，利用莖尖分生組織的脫毒培養，避免外植體塊為嵌合體而帶來組培無性系變異，都盡量切取小塊外植體，本發明包囊微小外植體對提高培養成活率效果明顯，且該方法操作簡便，成本低廉，便于推廣應用。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104604681
【申請號】CN201510033454
【發明人】劉福平
【申請人】福建省亞熱帶植物研究所
【公開日】2015年5月13日
【申請日】2015年1月23日