一種擬南芥的嫁接方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種小體型植物的嫁接方法，尤其涉及一種擬南芥的嫁接方法。
【背景技術】
[0002] 嫁接，是無性繁殖中的營養生殖的一種，是利用植物受傷后具有愈傷的機能來進 行的。其作為一項農業生產技術，已被廣泛應用于農業、林業以及園藝植物生產及科研開發 中。自上世紀初開始至今，特別是70、80年代，人們對嫁接基礎理論進行了大量研究。但有 些機理問題目前仍不十分明晰。
[0003] 擬南芥（Arabidopsisthaliana)是一種十字花科的小型野草，由于其具有生育期 短、個體小、基因組小等特點，長期以來被作為遺傳學、分子生物學、發育生物學研究的模式 植物。2000年底擬南芥基因組全序列被公開，作為第一個完成全部基因組序列測定的高等 植物，擬南芥的基因結構與功能分析也逐漸成為科學研究的熱點之一。
[0004] 基于擬南芥作為模式植物的獨特優點，它被廣泛運用于許多植物學、農學和林學 等相關研究中，其研究成果將有助于加深對其他植物相關研究領域的認識和理解，甚至直 接能用于指導重要農林植物的改良和生產。但經檢索，在諸多的有關擬南芥的研究方法中 未見關于擬南芥嫁接的方法的報道。
【發明內容】
[0005] 針對現有及的不足，本發明要解決的問題是提出一種擬南芥的嫁接方法。
[0006] 本發明所述擬南芥的嫁接方法，步驟是：
[0007] 1)砧木準備：擬南芥種子無菌環境下經過消毒處理后，播種于1/2MS固體培養基 上，封口后置于4°C培養2-3天進行春化處理，轉入長日照條件下培養，待苗長出子葉后為 石占木苗，用于嫁接；
[0008] 2)接穗準備：將擬南芥突變體種子經步驟1)相同的消毒處理和培養，待苗長出子 葉后為接穗苗，用于嫁接；
[0009] 3)無菌環境下嫁接；
[0010] 4)嫁接體培養：嫁接體轉入短日照培養，待傷口愈合，長出兩片真葉；
[0011] 5)嫁接苗移栽：成活的嫁接苗移栽于培養基質中，燒灌營養液，長日照培養，直至 嫁接苗開花結果，收獲種子；
[0012] 其特征在于：
[0013] 步驟1)和2)所述對種子表面進行消毒處理的方法是：將種子用70%乙醇處理 5±2分鐘，滅菌水清洗兩次后，用2. 6%NaClO消毒處理10±2分鐘，用蒸餾水清洗4-6次；
[0014] 步驟1)、2)和5)所述長日照條件是：光周期為16小時光照/8小時黑暗，光照條 件下的溫度為22-24°C，黑暗條件下的溫度為20-22°C，光強為6000-80001uX，相對濕度大 于 70% ;
[0015] 步驟3)所述嫁接的方法是：在砧木苗下胚軸的上1/3處用剪刀剪斷，使地下部保 留有2/3的下胚軸作為砧木；在接穗苗下胚軸的上1/3處用剪刀剪斷，使地上部保留有1/3 的下胚軸作為接穗；將接穗和砧木兩個傷面的形成層貼合并貼在培養皿沾有水珠的培養皿 內壁上，封口；
[0016] 步驟4)所述短日照條件是：光周期為8小時光照/16小時黑暗，光照條件下的溫 度為22-24°C，黑暗條件下的溫度為20-22°C，光強為6000-80001UX，相對濕度大于70% ;
[0017] 所述步驟5)中所述的培養基質為蛭石；營養液為B5營養基用水稀釋3倍后的溶 液。所述的嫁接移栽過程是：嫁接苗成活后，先打開培養皿口 1/3,對其進行馴化，保持短日 照狀態，3-4天后，用鑷子將再生苗取出，洗凈根部培養基，盡量不傷及根毛，然后移栽到已 滅菌的蛭石培養缽中，保持長日照狀態培養管理。
[0018] 上述擬南芥的嫁接方法中：步驟3)中所述的剪刀優選長145mm的特快型手術剪 刀。鑷子優選長260_的醫學槍狀鑷子。所述的種子消毒和嫁接的過程，優選在超凈工作 臺無菌環境下操作。
[0019] 本發明提供了一種擬南芥嫁接的方法，是以擬南芥野生型無菌種子發芽幼苗為砧 木，以擬南芥突變體無菌種子發芽幼苗為接穗的嫁接方法，旨在利用擬南芥野生型和大量 的擬南芥突變體進行嫁接，揭示植物嫁接的砧木和接穗互作分子機理，為林果、蔬菜等植物 的品種改良提供理論依據。本發明的方法具有方法易行、操作簡單、傷害小、成活率高、成本 低等特點，為擬南芥嫁接技術提供了新途徑，為植物嫁接在分子機理等相關理論研究提供 了直接的科學研究系統。
【附圖說明】
[0020] 圖1為在培養基上的擬南芥嫁接苗。
[0021] 圖2為移栽前的擬南芥嫁接苗。
【具體實施方式】
[0022] 下面結合具體實例對本發明做進一步詳細說明。
[0023] 以擬南芥Columbia-0 (Col-O)種子苗為接穗與擬南芥Landsbergerecta(Ler)種 子苗為砧木進行嫁接為實例，種子消毒和嫁接過程均在超凈工作臺無菌環境下操作。
[0024] 具體的，擬南芥的嫁接方法步驟是：
[0025] 1)砧木準備：擬南芥種子無菌環境下經過消毒處理后，播種于1/2MS固體培養基 上，封口后置于4°C培養2-3天進行春化處理，轉入長日照條件下培養，待苗長出子葉后為 石占木苗，用于嫁接；
[0026] 2)接穗準備：將擬南芥突變體種子經步驟1)相同的消毒處理和培養，待苗長出子 葉后為接穗苗，用于嫁接；
[0027] 其中，上述對種子表面進行消毒處理的方法是：將種子用70%乙醇處理5±2分 鐘，滅菌水清洗兩次后，用2. 6%NaClO消毒處理10±2分鐘，用蒸餾水清洗4-6次；所述長 日照條件是：光周期為16小時光照/8小時黑暗，光照條件下的溫度為22-24°C，黑暗條件 下的溫度為20-22°C，光強為6000-80001ux，相對濕度大于70% ;
[0028] 3)無菌環境下嫁接；
[0029] 其中，所述嫁接的方法是：在砧木苗下胚軸的上1/3處用剪刀剪斷，使地下部保留 有2/3的下胚軸作為砧木；在接穗苗下胚軸的上1/3處用剪刀剪斷，使地上部保留有1/3的 下胚軸作為接穗；將接穗和砧木兩個傷面的形成層貼合并貼在培養皿沾有水珠的培養皿內 壁上，封口；
[0030] 上述的剪刀選長145mm的特快型手術剪刀，鑷子選長260mm的醫學槍狀鑷子。
[0031] 4)嫁接體培養：嫁接體轉入短日照培養，待傷口愈合，長出兩片真葉；
[0032] 其中，所述短日照條件是：光周期為8小時光照/16小時黑暗，光照條件下的溫度 為22-24°C，黑暗條件下的溫度為20-22°C，光強為6000-80001UX，相對濕度大于70% ;
[0033] 5)嫁接苗移栽：成活的嫁接苗移栽于培養基質中，燒灌營養液，長日照培養，直至 嫁接苗開花結果，收獲種子；
[0034] 其中，所述的培養基質為蛭石；營養液為B5營養基用水稀釋3倍后的溶液。所述 長日照條件是：光周期為16小時光照/8小時黑暗，光照條件下的溫度為22-24°C，黑暗條 件下的溫度為20-22°C，光強為6000-80001ux，相對濕度大于70% ;所述的嫁接移栽過程 是：嫁接苗成活后，先打開培養皿口 1/3,對其進行馴化，保持短日照狀態，3-4天后，用鑷子 將再生苗取出，洗凈根部培養基，盡量不傷及根毛，然后移栽到已滅菌的蛭石培養缽中，保 持長日照狀態培養管理。
[0035] 上述B5營養基的配方如下（單位mg/L):
[0036]
【主權項】
1. 一種擬南芥的嫁接方法，步驟是： 1) 砧木準備：擬南芥種子無菌環境下經過消毒處理后，播種于1/2MS固體培養基上， 封口后置于4°C培養2-3天進行春化處理，轉入長日照條件下培養，待苗長出子葉后為砧木 苗，用于嫁接； 2) 接穗準備：將擬南芥突變體種子經步驟1)相同的消毒處理和培養，待苗長出子葉后 為接穗苗，用于嫁接； 3) 無菌環境下嫁接； 4) 嫁接體培養：嫁接體轉入短日照培養，待傷口愈合，長出兩片真葉； 5) 嫁接苗移栽：成活的嫁接苗移栽于培養基質中，澆灌營養液，長日照培養，直至嫁接 苗開花結果，收獲種子； 其特征在于： 步驟1)和2)所述對種子表面進行消毒處理的方法是：將種子用70%乙醇處理5±2分 鐘，滅菌水清洗兩次后，用2. 6% NaClO消毒處理10±2分鐘，用蒸餾水清洗4-6次； 步驟1)、2)和5)所述長日照條件是：光周期為16小時光照/8小時黑暗，光照條件下的 溫度為22-24°C，黑暗條件下的溫度為20-22°C，光強為6000-80001UX，相對濕度大于70%; 步驟3)所述嫁接的方法是：在砧木苗下胚軸的上1/3處用剪刀剪斷，使地下部保留有 2/3的下胚軸作為砧木；在接穗苗下胚軸的上1/3處用剪刀剪斷，使地上部保留有1/3的下 胚軸作為接穗；將接穗和砧木兩個傷面的形成層貼合并貼在培養皿沾有水珠的培養皿內壁 上，封口； 步驟4)所述短日照條件是：光周期為8小時光照/16小時黑暗，光照條件下的溫度為 22-24°C，黑暗條件下的溫度為20-22°C，光強為6000-80001UX，相對濕度大于70% ; 所述步驟5)中所述的培養基質為蛭石；營養液為B5營養基用水稀釋3倍后的溶液。
2. 根據權利要求1所述擬南芥的嫁接方法，其特征在于：步驟3)中所述的剪刀為長 145mm的特快型手術剪刀。
【專利摘要】本發明公開了一種擬南芥的嫁接方法，是以擬南芥野生型無菌種子發芽幼苗為砧木，以擬南芥突變體無菌種子發芽幼苗為接穗的嫁接方法。本發明的方法具有方法易行、操作簡單、傷害小、成活率高、成本低等特點，為擬南芥嫁接技術提供了新途徑，為林果、蔬菜等植物的品種改良提供理論依據，也為植物嫁接在分子機理等相關理論研究提供了直接的科學研究系統。
【IPC分類】A01G1-06
【公開號】CN104604539
【申請號】CN201510049787
【發明人】孫超, 夏陽, 郝玉金, 燕麗萍, 劉翠蘭, 李麗
【申請人】山東省林業科學研究院
【公開日】2015年5月13日
【申請日】2015年1月30日