一種鐵皮石斛組織培養液的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及植物培養領域，尤其涉及一種鐵皮石斛組織培養液。
【背景技術】
[0002] 鐵皮石斛，為蘭科多年生附生草本植物。生于海拔達1600米的山地半陰濕的巖石 上，喜溫暖濕潤氣候和半陰半陽的環境，不耐寒。一般均能耐-5°C的低溫。石斛可分為黃 草、金釵、馬鞭等數十種，鐵皮石斛為石斛之極品，它因表皮呈鐵綠色而得名。鐵皮石斛具有 獨特的藥用價值，以其莖入藥，中藥名：石斛，屬補益藥中的補陰藥，《中國藥典》：益胃生津， 滋陰清熱。由于過度采挖和自然環境的破壞，1978年唄國家列為重點保護的瀕危中藥材。 目前，在鐵皮石斛人工培養的過程中，雖已經獲得成功，但周期長，成活率低，出苗率低，導 致產量和規模上不去，難以滿足社會應用的需要。
【發明內容】
[0003] 基于【背景技術】存在的技術問題，本發明提出了一種鐵皮石斛組織培養液，配伍合 理，不僅為鐵皮石斛提供全面的營養物質，而且能使鐵皮石斛快速促根生莖，還可提高鐵皮 石斛中多糖含量。
[0004] 本發明提出的一種鐵皮石斛組織培養液，其原料按體積百分比包括：〇. 4-0. 6%第 一母液、0. 4-0. 7%第二母液、0. 4-0. 6%第三母液和98-99%第四母液；第一母液的組分包 括：碘化鉀0. 1-0. 2g/L，硫酸錳2-3g/L，硫酸鋅l-2g/L，硼酸l-2g/L，鉬酸鈉0. 05-0. 15g/ L，硫酸銅0? 008-0. 012g/L，氯化鈷0? 01-0. 03g/L;第二母液的組分包括：硫酸亞鐵 0. 008-0. 012mol/L，乙二胺四乙酸二鈉0. 01-0. 05mol/L;第三母液的原料按重量份包括： 肌醇4-8XIO3份，煙酸12-17份，鹽酸吡唆醇25-35份，鹽酸硫胺素3-9份，甘氨酸55-65 份，蒸餾水I.5-2. 5XIO5份；第四母液的組分包括：香蕉泥70-72g/L，硝酸銨0. 7-lg/L，硝 酸鉀 0? 8-1. 2g/L，氯化鈣 0? 2-0. 3g/L，硫酸鎂 0? 15-0. 2g/L，磷酸二氫鈣 0? 05-0. 13g/L，白 糖 39-42g/L，瓊脂 3. 8-4. 3g/L。
[0005] 優選地，第一母液、第二母液、第三母液和第四母液均為水溶液。
[0006] 優選地，第一母液、第二母液、第三母液和第四母液的體積比為0. 42-0. 5 : 0? 42-0. 63 :0? 41-0. 49 :98-99。
[0007] 優選地，第一母液的組分包括：碘化鉀0. 13-0. 17g/L，硫酸錳2. 3-2. 5g/L，硫酸 鋅L3-1. 6g/L，硼酸L6-1. 9g/L，鉬酸鈉 0? 08-0. 12g/L，硫酸銅 0? 009-0. 011g/L，氯化鈷 0.015-0. 025g/L〇
[0008] 優選地，第二母液中，硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉的摩爾濃度比為0.9-1. 1 : 2_4〇
[0009] 優選地，第三母液中，煙酸、鹽酸吡哆醇、鹽酸硫胺素和甘氨酸的重量比為14-16 : 27-33 :5-7 :58-62。
[0010] 優選地，第四母液的組分包括：香蕉泥70. 5-71. 5g/L，硝酸銨0. 8-0. 9g/L，硝酸 鉀 0. 9-lg/L，氯化鈣 0. 21-0. 24g/L，硫酸鎂 0. 17-0. 2g/L，磷酸二氫鈣 0. 08-0.llg/L，白糖 40-41g/L，瓊脂 4-4. 2g/L。
[0011] 本發明配伍合理，使氮磷鉀等常量元素和微量元素的處于合理的比例之中，能夠 為鐵皮石斛提供全面的營養物質，而有機物質和無機鹽相互配合，能使鐵皮石斛快速促根 生莖，香蕉泥和白糖相互配合，大大提高本發明中的糖分含量，提高了鐵皮石斛的能量供 給，能夠提高鐵皮石斛中多糖含量，而且加入煙酸等維生素和甘氨酸，能夠提高鐵皮石斛中 氨基酸等含量，提高鐵皮石斛的生根率和生長速度，顯著提高鐵皮石斛的存活率。
【具體實施方式】
[0012] 下面，通過具體實施例對本發明的技術方案進行詳細說明。
[0013] 實施例1
[0014] 本發明提出的一種鐵皮石斛組織培養液，其原料按體積百分比包括：0. 4%第一母 液、0. 7%第二母液、0. 4%第三母液和98. 5%第四母液，第一母液、第二母液、第三母液和 第四母液均為水溶液；第一母液的組分包括：碘化鉀〇.lg/L，硫酸錳3g/L，硫酸鋅lg/L，硼 酸2g/L，鉬酸鈉0. 05g/L，硫酸銅0. 012g/L，氯化鈷0. 01g/L;第二母液的組分包括：硫酸亞 鐵0? 012mol/L，乙二胺四乙酸二鈉0?Olmol/L;第三母液的原料按重量份包括：肌醇8XIO3 份，煙酸12份，鹽酸吡哆醇35份，鹽酸硫胺素3份，甘氨酸65份，蒸餾水1.5X105份；第四母 液的組分包括：香蕉泥72g/L，硝酸銨0. 7g/L，硝酸鉀I. 2g/L，氯化鈣0. 2g/L，硫酸鎂0. 2g/ L，磷酸二氫鈣0? 05g/L，白糖42g/L，瓊脂3. 8g/L。
[0015] 實施例2
[0016] 本發明提出的一種鐵皮石斛組織培養液，其原料按體積百分比包括：0. 6%第一母 液、0. 4%第二母液、0. 6%第三母液和98. 4%第四母液，第一母液、第二母液、第三母液和 第四母液均為水溶液；第一母液的組分包括：碘化鉀〇. 2g/L，硫酸錳2g/L，硫酸鋅2g/L，硼 酸lg/L，鉬酸鈉0. 15g/L，硫酸銅0. 008g/L，氯化鈷0. 03g/L;第二母液的組分包括：硫酸亞 鐵0? 008mol/L，乙二胺四乙酸二鈉0? 05mol/L;第三母液的原料按重量份包括：肌醇4XIO3 份，煙酸17份，鹽酸吡哆醇25份，鹽酸硫胺素9份，甘氨酸55份，蒸餾水2. 5X105份；第四母 液的組分包括：香蕉泥70g/L，硝酸銨lg/L，硝酸鉀0. 8g/L，氯化鈣0. 3g/L，硫酸鎂0. 15g/ L，磷酸二氫鈣0? 13g/L，白糖39g/L，瓊脂4. 3g/L。
[0017] 實施例3
[0018] 本發明提出的一種鐵皮石斛組織培養液，其原料按體積百分比包括：0.42%第一 母液、0. 63%第二母液、0. 41 %第三母液和98. 54%第四母液，第一母液、第二母液、第三母 液和第四母液均為水溶液；第一母液的組分包括：碘化鉀〇. 13g/L，硫酸錳2. 5g/L，硫酸鋅 I. 3g/L，硼酸I. 9g/L，鉬酸鈉0. 08g/L，硫酸銅0. 011g/L，氯化鈷0. 015g/L;第二母液的組 分包括：硫酸亞鐵〇?Ollmol/L，乙二胺四乙酸二鈉0? 02mol/L;第三母液的原料按重量份包 括：肌醇7XIO3份，煙酸14份，鹽酸吡哆醇33份，鹽酸硫胺素5份，甘氨酸62份，蒸餾水 1.8\10 5份；第四母液的組分包括：香蕉泥71.58/1，硝酸銨0.88/1，硝酸鉀1 8/1，氯化鈣 0? 21g/L，硫酸鎂 0? 2g/L，磷酸二氫鈣 0? 08g/L，白糖 41g/L，瓊脂 4g/L。
[0019] 實施例4
[0020] 本發明提出的一種鐵皮石斛組織培養液，其原料按體積百分比包括：〇. 5%第一 母液、0. 42%第二母液、0. 49%第三母液和98. 59%第四母液，第一母液、第二母液、第三母 液和第四母液均為水溶液；第一母液的組分包括：碘化鉀〇. 17g/L，硫酸錳2. 3g/L，硫酸鋅 1. 6g/L，硼酸I. 6g/L，鉬酸鈉0. 12g/L，硫酸銅0. 009g/L，氯化鈷0. 025g/L;第二母液的組 分包括：硫酸亞鐵0. 009mol/L，乙二胺四乙酸二鈉0. 04mol/L;第三母液的原料按重量份包 括：肌醇5XIO3份，煙酸16份，鹽酸吡唆醇27份，鹽酸硫胺素7份，甘氨酸58份，蒸餾水 2. 2XIO5份；第四母液的組分包括：香蕉泥70. 5g/L，硝酸銨0. 9g/L，硝酸鉀0. 9g/L，氯化鈣 0? 24g/L，硫酸鎂 0? 17g/L，磷酸二氫鈣 0?llg/L，白糖 40g/L，瓊脂 4. 2g/L。
[0021] 實施例5
[0022] 本發明提出的一種鐵皮石斛組織培養液，其原料按體積百分比包括：0. 45%第一 母液、0. 43%第二母液、0. 42%第三母液和98. 7%第四母液，第一母液、第二母液、第三母液 和第四母液均為水溶液；第一母液的組分包括：碘化鉀〇. 15g/L，硫酸錳2. 39g/L，硫酸鋅 I. 47g/L，硼酸I. 74g/L，鉬酸鈉0? 10g/L，硫酸銅0? 01g/L，氯化鈷0? 02g/L;第二母液的組 分包括：硫酸亞鐵〇?Olmol/L，乙二胺四乙酸二鈉0? 03mol/L;第三母液的原料按重量份包 括：肌醇6XIO3份，煙酸15份，鹽酸吡哆醇30份，鹽酸硫胺素6份，甘氨酸60份，蒸餾水 2X105份；第四母液的組分包括：香蕉泥70. 91g/L，硝酸銨0. 82g/L，硝酸鉀0. 96g/L，氯化 鈣 0? 22g/L，硫酸鎂 0? 19g/L，磷酸二氫鈣 0? 09g/L，白糖 40. 52g/L，瓊脂 4. 14g/L。
[0023] 在無菌條件下取長有2-3節莖段的長度為I. 5-2cm的有腋芽的鐵皮石斛莖段作為 外植體，將外植體分別置于實驗組（實施例5制得的營養液）和對照組（普通MS培養液） 中培養30天后進行比較，其中培養條件如下：溫度為23-25°C，光照強度為1300-1800LUX， 光照時間為12_13h/d。實驗結果如下：
[0024]
【主權項】
1. 一種鐵皮石斛組織培養液，其特征在于，其原料按體積百分比包括：〇. 4-0. 6%第一 母液、0. 4-0. 7%第二母液、0. 4-0. 6%第三母液和98-99%第四母液； 第一母液的組分包括：碘化鉀0. 1-0. 2g/L，硫酸錳2-3g/L，硫酸鋅l-2g/L，硼酸l-2g/L，鉬酸鈉 0? 05-0. 15g/L，硫酸銅 0? 008-0. 012g/L，氯化鈷 0? 01-0. 03g/L; 第二母液的組分包括：硫酸亞鐵0. 008-0. 012mol/L，乙二胺四乙酸二鈉 0.01-0. 05mol/L； 第三母液的原料按重量份包括：肌醇4-8 XIO3份，煙酸12-17份，鹽酸吡哆醇25-35份， 鹽酸硫胺素3-9份，甘氨酸55-65份，蒸餾水1. 5-2. 5 XIO5份； 第四母液的組分包括：香蕉泥70-72g/L，硝酸銨0. 7-lg/L，硝酸鉀0. 8-1. 2g/L，氯 化鈣 0? 2-0. 3g/L，硫酸鎂 0? 15-0. 2g/L，磷酸二氫鈣 0? 05-0. 13g/L，白糖 39-42g/L，瓊脂 3. 8-4. 3g/L〇
2. 根據權利要求1所述鐵皮石斛組織培養液，其特征在于，第一母液、第二母液、第三 母液和第四母液均為水溶液。
3. 根據權利要求1或2所述鐵皮石斛組織培養液，其特征在于，第一母液、第二母液、第 三母液和第四母液的體積比為〇. 42-0. 5 :0. 42-0. 63 :0. 41-0. 49 :98-99。
4. 根據權利要求1-3任一項所述鐵皮石斛組織培養液，其特征在于，第一母液的組分 包括：碘化鉀 0. 13-0. 17g/L，硫酸錳 2. 3-2. 5g/L，硫酸鋅I. 3-1. 6g/L，硼酸I. 6-1. 9g/L，鉬 酸鈉 0? 08-0. 12g/L，硫酸銅 0? 009-0. 01lg/L，氯化鈷 0? 015-0. 025g/L。
5. 根據權利要求1-4任一項所述鐵皮石斛組織培養液，其特征在于，第二母液中，硫酸 亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉的摩爾濃度比為0.9-1. 1 :2-4。
6. 根據權利要求1-5任一項所述鐵皮石斛組織培養液，其特征在于，第三母液中，煙 酸、鹽酸吡哆醇、鹽酸硫胺素和甘氨酸的重量比為14-16 :27-33 :5-7 :58-62。
7. 根據權利要求1-6任一項所述鐵皮石斛組織培養液，其特征在于，第四母液的組分 包括：香蕉泥 70. 5-71. 5g/L，硝酸銨 0? 8-0. 9g/L，硝酸鉀 0? 9-lg/L，氯化鈣 0? 21-0. 24g/L， 硫酸鎂 〇. 17-0. 2g/L，磷酸二氫鈣 0. 08-0.llg/L，白糖 40-41g/L，瓊脂 4-4. 2g/L。
【專利摘要】本發明公開一種鐵皮石斛組織培養液，其原料按體積百分比包括：0.4-0.6％第一母液、0.4-0.7％第二母液、0.4-0.6％第三母液和98-99％第四母液；第一母液的組分包括：碘化鉀0.1-0.2g/L，硫酸錳2-3g/L，硫酸鋅1-2g/L，硼酸1-2g/L，鉬酸鈉0.05-0.15g/L，硫酸銅0.008-0.012g/L，氯化鈷0.01-0.03g/L；第四母液組分包括：香蕉泥70-72g/L，硝酸銨0.7-1g/L，硝酸鉀0.8-1.2g/L，氯化鈣0.2-0.3g/L，硫酸鎂0.15-0.2g/L，磷酸二氫鈣0.05-0.13g/L，白糖39-42g/L，瓊脂3.8-4.3g/L。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104542288
【申請號】CN201410849880
【發明人】李軍
【申請人】安徽康久生物科技有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2014年12月31日