crambescidin化合物的制作方法

專(zhuān)利名稱(chēng)：crambescidin化合物的制作方法
背景技術(shù)：
在從海洋海綿動(dòng)物篩選新型生物活性劑的過(guò)程中，已經(jīng)描述了一組新的有效的細(xì)胞毒性和抗病毒化合物來(lái)自海綿動(dòng)物甘藍(lán)海綿Crambe crambe的crambescidins(1-5)1-4和來(lái)自海綿動(dòng)物羽軸海綿Ptilocaulis spiculifer和Hemimycale sp.的ptilomycalin A(6)5-7，它們具有配合物五環(huán)胍，所述五環(huán)胍通過(guò)線(xiàn)性ω-羥基脂肪酸連接至一個(gè)羥基亞精胺或亞精胺單位上。廣泛的NMR研究已經(jīng)表明，crambescidins(1-4)和ptilomycalin A(6)的五環(huán)胍部分的相對(duì)立體化學(xué)是相同的，同時(shí)crambescidin 816(1)2的氧化降解和ptilomycalin A(6)8的對(duì)映選擇性全合成已經(jīng)精確地確立了它們相同的中心胍部分的絕對(duì)構(gòu)型。
最近，在海綿動(dòng)物Batzella物種中發(fā)現(xiàn)crambescidins和ptilomycalin A同時(shí)存在9。已經(jīng)描述了crambescidin1-4和ptilomycalinA5-7顯著的細(xì)胞毒性、抗病毒和抗真菌的活性，并且已經(jīng)表明crambescidin 816是有效的鈣通道阻斷劑4。
為了獲得大量的crambescidin 816(1)用于臨床前實(shí)驗(yàn)和臨床實(shí)驗(yàn)，將三種甘藍(lán)海綿Crambe crambe樣品經(jīng)過(guò)類(lèi)似于先前描述的(參見(jiàn)實(shí)驗(yàn)部分)分離步驟1-2。通過(guò)FABMS指導(dǎo)的分離，分離出總共1.48g的crambescidin 816(1)以及已知的crambescidins(2-5)、ptilomycalin A(6)和6種新發(fā)現(xiàn)的crambescidin化合物(7-12)。
發(fā)明概述新的crambescidins(7-12)的結(jié)構(gòu)和生物活性是本發(fā)明的主題。crambescidins 834(7)和818(8)的氯代亞精胺單位是天然來(lái)源中從未得到過(guò)的。所述crambescidins的結(jié)構(gòu)如下
1 R1＝OH，R2＝OH，n＝142 R1＝OH，R2＝OH，n＝153 R1＝OH，R2＝OH，n＝164 R1＝OH，R2＝H， n＝146 R1＝H， R2＝H， n＝147 R1＝Cl，R2＝OH，n＝148 R1＝Cl，R2＝h， n＝14
9 R＝OH11 R＝H
新的crambescidins(7-12)的結(jié)構(gòu)根據(jù)高分辨快速原子轟擊質(zhì)譜(HRFABMS)數(shù)據(jù)[m/z 835.5821(M+H)，Δ0.7mmu)]，確定crambescidin 834(7)的分子式為C45H79N6O6Cl。由于在7的FABMS和FABMS/碰撞誘導(dǎo)的離解(CID)/MS譜中，觀察到喪失氯化氫(M+H-HCL，799.6075，Δ-1.4mmu)和H2O(M+H-HCL-H2O，781.5984，Δ-2.9mmu)的碎片離子，顯然存在一個(gè)氯和一個(gè)游離的羥基。
根據(jù)FABMS和NMR數(shù)據(jù)，確定7的羥基五環(huán)胍部分的結(jié)構(gòu)與1的相同。7的在FABMS和FABMS/CID/MS譜中觀察到于m/z420、374、358、264和246的碎片離子，它們是crambescidins(1-4)中羥基五環(huán)胍部分的特征1。通過(guò)COSY、HMQC和HMBC NMR實(shí)驗(yàn)，確定羥基在所述五環(huán)胍單位中的位置幾乎與在crambescidins(1-4)中的相同，提示該羥基的位置和所述羥基五環(huán)胍部分的立體化學(xué)在所有這些crambescidins中是相同的。
在7的FABMS和FABMS/CID/MS中，于m/z 398.3729(C23H48N3O2，Δ1.8mmu)和380.3636(C23H46N3O，Δ0.5mmu)觀察到來(lái)自C-23至C-45側(cè)鏈的碎片離子強(qiáng)峰，它們?cè)谄渌却鷆rambescidins的光譜中不存在。NMR和尤其是FABMS/CID/MS數(shù)據(jù)顯示出來(lái)自C-23至C-37的多亞甲基鏈，所述數(shù)據(jù)提供來(lái)自連續(xù)的亞甲基裂解的一系列幾乎連續(xù)的碎片離子，由m/z 380至198.1616(C10H48N3O，Δ-1.0mmu)。由m/z 614.4549(C36H60N3O5，Δ-1.6mmu)的碎片離子提示的所述側(cè)鏈和所述羥基五環(huán)胍單位之間的酯鍵，被7的HMBC譜中δ168.12(C-22)的羧基碳和δ3.48(s，H-14)及4.16(t，H2-23)的質(zhì)子之間的遠(yuǎn)程相關(guān)所證實(shí)。由COSY和HMQC數(shù)據(jù)，鑒別出兩個(gè)獨(dú)立的自旋系統(tǒng)(從H-39b至H2-41和從H-42a、H-42b至H2-45)和氯代亞精胺單位中氯的位置。根據(jù)HMBC譜中觀察到的C-42(δ57.83)和H-39b(δ3.62)之間和C-39(δ47.19)和H-42a、H-42b(δ3.36，3.62)之間的遠(yuǎn)程C-H相關(guān)，這兩個(gè)自旋系統(tǒng)相互連接。此外，根據(jù)在HMBC譜中觀察到于δ165.49(C-38)的第二個(gè)羧基碳和于δ3.36(H-42a)、2.49(H-37a)和2.76(H-37b)的質(zhì)子之間的相關(guān)，確立了7中的酰胺鍵。
根據(jù)HRFABMS(M+H，819.5889，Δ-1.0mmu)確定的crambescidin 818(8)的分子式C45H79N6O5Cl，比crambescidin 834(7)少一個(gè)氧(羥基)。8的FABMS和FABMS/CID/MS譜顯示于m/z783.6145(Δ-3.3mmu)的碎片離子，它對(duì)應(yīng)于M+H-HCL，鑒別出存在一個(gè)氯。同時(shí)，存在m/z 404和358以及不存在m/z 420、374、264和246，表明crambescidin 818(8)具有與crambescidin 800(4)相同的五環(huán)胍部分，這一點(diǎn)通過(guò)8與4的1H和13C數(shù)據(jù)比較得到證實(shí)1。由8中的COSY數(shù)據(jù)確定的氯代亞精胺單位的1H和13C NMR的化學(xué)位移，幾乎與7中的化學(xué)位移相同，提示該氯在crambescidin 818和834中的位置和立體化學(xué)是相同的。
根據(jù)HRFABMS數(shù)據(jù)(M+H，674.4734，Δ1.0mmu)，crambescidin673(9)的分子式確定為C38H63N3O7。9的FABMS和FABMS/CID/MS譜顯示于m/z 420、358、264和246的crambescidins中羥基五環(huán)胍單位的特征峰以及來(lái)自連續(xù)的亞甲基裂解的從m/z 628至420的一系列幾乎連續(xù)的同系碎片離子，提示crambescidin 673(9)具有一個(gè)羧酸末端，缺少一個(gè)亞精胺單位。由10和9的1H和13C NMR數(shù)據(jù)完全支持提出的這一結(jié)構(gòu)，表明crambescidin 687(10)是crambescidin 673(9)的甲酯。在10的NMR譜中觀察到于δH3.65和δc51.44的所述甲氧基。與9中相應(yīng)的信號(hào)(δ181.60)相比，10中的C-38信號(hào)(δ174.39)向高磁場(chǎng)位移。
crambescidin 687(10)(HRFABMS，688.4907，M+H；Δ-0.6mmu，對(duì)于C38H66N3O7，HRFABMS數(shù)據(jù)(M+H，674.4734，Δ1.0mmu))。9的FABMS和FABMS/CID/MS譜顯示于m/z 420、358、264和246的crambescidins中羥基五環(huán)胍單位的特征峰以及來(lái)自連續(xù)的亞甲基裂解的從m/z 628至420的一系列幾乎連續(xù)的同系碎片離子，提示crambescidin 673(9)具有一個(gè)羧酸末端，缺少一個(gè)亞精胺單位。1H和13C NMR數(shù)據(jù)(參見(jiàn)表1和表2)完全支持提出的這一結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)借助于COSY數(shù)據(jù)確定。于δ181.60觀察到所述羧基的碳基信號(hào)。
crambescidin 687(10)(對(duì)于C39H66N3O7，HRFABMS，688.4907，M+H；Δ-0.6mmu)因一個(gè)CH2基團(tuán)而不同于9，顯示出與9相似的FABMS和FABMS/CID/MS碎片離子。10和9的1H和13C NMR數(shù)據(jù)的比較表明，crambescidin 687(10)是crambescidin 673(9)的甲酯。在10的NMR譜中觀察到于δH3.65和δc51.44的所述甲氧基。與9中相應(yīng)的信號(hào)(δ181.60)目比，10中的C-38信號(hào)(δ174.39)向高磁場(chǎng)位移。
根據(jù)HRFABMS (M+H，658.4797，Δ-0.2mmu)，crambescidin 657(11)的分子式確定為C38H66N3O7)、因CH38H63N3O6而不同于9，與9的差異在一個(gè)氧(羥基)。11的FABMS和FABMS/CID/MS譜顯示于m/z 404和358的碎片離子以及來(lái)自連續(xù)的亞甲基裂解的從m/z 612至404的一系列幾乎連續(xù)的碎片離子，表明在所述五環(huán)胍部分中的C-13缺乏一個(gè)氧，這由表1和表2中的1H和13C NMR數(shù)據(jù)證實(shí)。
根據(jù)HRFABMS數(shù)據(jù)(m/z 658.4790，M+H，Δ0.5mmu)，確定13，14，15-isocrambescidin 657(12)的分子式C38H63N3O6與11的分子式相同。12的FABMS和FABMS/CID/MS譜數(shù)據(jù)也與11的數(shù)據(jù)相同。然而，11和12的層析特性和NMR圖形相似，但可清楚地區(qū)分，表明它們互為異構(gòu)體。通過(guò)COSY和TOCSY實(shí)驗(yàn)確定的12中五環(huán)胍單位中的1H和13C NMR化學(xué)位移和偶合常數(shù)，與5的數(shù)據(jù)2非常相似，提示12的五環(huán)胍部分的立體化學(xué)由NOESY實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)，其中觀察到H-10和CH3-1之間以及H-14和H-13、H-19之間的NOE效應(yīng)，同時(shí)缺乏H-10和H-13之間的NOE效應(yīng)。1，2crambescidin 9、11或12具有一個(gè)酸性的羧酸末端和一個(gè)強(qiáng)堿性的五環(huán)胍部分6，因此，它們作為內(nèi)鹽形式存在。在7、8或10的1HNMR波譜(在CDCl3中)中，觀察到根據(jù)COSY實(shí)驗(yàn)分別與H-9b和H-14相關(guān)的兩個(gè)低磁場(chǎng)可交換的質(zhì)子，表明這些crambescidins的五環(huán)胍部分為鹽形式。未確定相反離子的性質(zhì)，但這可推測(cè)為Cl-1，因?yàn)閹讉€(gè)分離步驟涉及與NaCl的接觸。
發(fā)明詳述如上所述，本發(fā)明涉及6種新的crambescidins(化合物7-12)的分離和鑒定(即結(jié)構(gòu)和生物活性)。這些如下測(cè)定一般描述。用U-500或UI-500(500-Mhz，1H；125-MHz，13C)光度計(jì)獲得NMR波譜；化學(xué)位移(δ)以相對(duì)溶劑峰的ppm報(bào)告。高分辨和低分辨快速原子轟擊質(zhì)譜(FAB)在ZAB-SE光度計(jì)上測(cè)量，而FABMS/CID/MS譜在70 SE-4F儀器上進(jìn)行，用二硫蘇糖醇-二硫赤蘚糖醇作為基質(zhì)10。使用C-18柱(25×0.8cm，5-μm的粒度)和CH3OH∶0.1M NaCl(8∶2)的溶劑進(jìn)行HPLC分離。
提取和分離。通過(guò)對(duì)提取物和所分離部分的FABMS測(cè)量結(jié)果，指導(dǎo)分離。涉及三種甘藍(lán)海綿Crambe crambe樣品。
通過(guò)SCUBA，于西班牙Murcia收集第一種樣品，并由M.J.Uriz-Lespe博士鑒定(Centred’Estudis Avancats de Blanes，Blanes，西班牙)。用CHCl3∶甲苯(3∶1)萃取所述冷凍樣品(100.2g)。真空蒸發(fā)該萃取物，得到殘余物(6.5g)，使其在CHCl3和1.0M NaCl(1∶1，50ml×3)之間分配。使有機(jī)層(3.2g)在下層之間進(jìn)一步分配，下相通過(guò)HLPC純化，得到1(12.0mg)、2(7.0mg)、3(2.4mg)、4(0.4mg)和5(5.4mg)。
于西班牙Ibiza收集的第二種冷凍樣品(500.0g)按照相同的方法分離，得到crambescidin 816(1，104.5mg)。
于西班牙Isla de Formentor(Cueva)Palma de Mallorca收集第三種樣品(3208.0g)。該冷凍樣品用CHCl3∶甲苯(3∶1)萃取，得到一萃取物(143.0g)，使其在CHCl3和1.0M NaCl(1∶1，1000ml×3)之間分配。使CHCl3層(55.4g)在己烷∶EtOAc∶MeOH∶H2O(4∶7∶4∶3)之間進(jìn)一步分配。下相(18.2g)于m/z 817，801顯示主峰，將下相在快速C-18(200g)柱上層析。該柱用所述混合溶劑[己烷∶EtOAc∶MeOH∶H2O(4∶7∶4∶3)]的下層洗脫，得到兩個(gè)部分，將其通過(guò)HPLC純化，產(chǎn)生crambescidin 816(1，1367.4mg)、843(7，4.4mg)、818(8，3.1mg)和ptilomycalin A(6，2.9mg)。上相(37.2g)于m/z 658和674顯示小峰，將其通過(guò)硅膠(300g，230-400目)快速層析柱分離，用CHCl3(100％-0％)中增加MeOH(0％-100％)的溶劑梯度體系洗脫。將于m/z 658、674和688顯示峰的部分通過(guò)重復(fù)的硅膠(230-400目)柱層析進(jìn)一步純化，用CHCl3∶EtOAc∶MeOH(9∶9∶1)、CHCl3∶MeOH(15∶1)和CHCl3∶MeOH(9∶1)作為溶劑體系洗脫進(jìn)一步純化，產(chǎn)生crambescidin 673(9，23.8mg)、687(10，14.7mg)、657(11，3.4mg)和13，14，15-isocrambescidin657(12，6.6mg)。
crambescidin 834(7)無(wú)色樹(shù)膠，[α]25D-24.7°(c 0.44，MeOH)；FABMS m/z 835(M+H)，799(M+H-HCl，C45H79N6O6，HRFABMS799.6075，Δ-1.4mmu)，781(M+H-HCL-H2O，C45H79N6O6，HRFABMS799.6075，Δ-2.9mmu)，694，655，614(C36H60N3O5，HRFABMS781.5984，Δ-2.9mmu)，694，655，614(C36H60N3O5，HRFABMS614.4549，Δ-1.6mmu)，426，420，398(C23H48N3O2，HRFABMS398.3729，Δ1.8mmu)，380(C23H46N3O，HRFABMS 380.3636，Δ0.5mmu)，374，358，314，264，246，198(C10H20N3O，HRFABMS 198.1616，Δ-1.0mmu)；1H NMR(CD3OD)參見(jiàn)表1；13C NMR(CD3OD)參見(jiàn)表1；13C NMR(CD3OD)參見(jiàn)表2；1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，J＝7，H3-1)，1.46(m，H-2a)，1.54(m，H-2b)，4.51(br d，J＝10，H-3)，5.49(br d，J＝11，H-4)，5.67(br dd，J＝11，7.5，H-5)，2.19(m，H-9a)，2.34(m，H-6b)，1.94(m，H-7a)，2.47(br t，J＝14，H-7b)，1.42(t，J＝12.5，H-9a)，2.56(dd，J＝12.5，5，H-9b)，4.32(m，H-10)，1.57(m，H-11a)，2.33(m，H-1 1b)，2.04(ddd，J＝14，10，4.5，H-12a)，2.16(m，H-12b)，3.36(s，H-14)，1.62(m，H-16a)，1.77(ddd，J＝14，14，4.5，H-16b)，1.76(m，H-17a)，2.32(m，H-17b)，1.23(m，H-18a)，1.76(dddd，J＝14，7，7，2，H-18b)，4.09(m，H-19)，1.10(d，J＝6，H-20)，4.09(m，H2-23)，1.61(m，H2-40)，3.43(br，H2-41)，3.27(br，H2-42)，3.79(br，H-43)，1.68(m，H-44a)，2.15(m，H-44b)，2.75(br，H-45a)，2.86(br，H-45b)，5.83(s，H-130H)，10.01(br s，H-8N)，10.07(br s，H-15N)；13C NMR(CDCl3)δ10.16(C-1)，29.09(C-2)，71.29(C-3)，133.66(C-4)，129.84(C-5)，23.44(C-6)，36.90(C-7)，83.56(C-8)，37.03(C-9)，52.41(C-10)，29.53(C-11)，37.19(C-12)，88.68(C-13)，54.55(C-14)，83.04(C-15)，32.09(C-16)，18.00(C-17)，31.56(C-18)，68.84(C-19)，21.43(C-20)，148.13(C-21)，167.17(C-22)，65.93(C-23)，28.38(C-24)，25.78(C-36)，32.19(C-37)，165.01(C-38)，47.21(C-39)，19.10(C-40)，38.74(C-41)，57.50(C-42)，65.05(C-43)，31.71(C-44)，37.04(C-45)；HRFABMS C45H80N6O6Cl的Mr計(jì)算值835.5828(M+H)+，Mr實(shí)測(cè)值835.5821。
crambescidin 818(8)無(wú)色樹(shù)膠，[α]25D-11.4°(c 0.31，MeOH)；FABMS m/z 819(M+H)，783(M+H-HCl，C45H79N6O5，HRFABMS783.6145，Δ-3.3mmu)，696(C41H70N5O4，HRFABMS 696.5437，Δ-.09mmu)，639，612，598，404，430，398，380，358，288，260，206；1H NMR(CD3OD)參見(jiàn)表1；13C NMR(CD3OD)參見(jiàn)表2；1H NMR(CDCl3)δ0.83(t，J＝7，H-1)，1.42(m，H-2a)，1.53(m，H-2b)，4.50(br d，J＝9.5，H-3)，5.48(br d，J＝11，H-4)，5.68(br dd，J＝11，7，H-5)，2.18(m，H-6a)，2.34(m，H-6b)，1.69(m，H-7a)，2.46(br t，J＝13，H-7b)，1.41(t，J＝12.5，-9a)，2.55(dd，J＝12.5，4.5，H-9b)，3.96 m，H-10)，1.61(m，H-11a)，2.21(m，H-11b)，1.79(m，H-12a)，2.27(m，H-12b)，4.28(ddd，10，5，5，H-13)，2.94(d，J＝5，H-14)，1.79(m，H2-16)，1.79(m，H2-17)，1.20(m，H-18a)，1.71(m，H-18b)，3.96(m，H-19)，1.05(d，J＝6，H-20)，4.09(m，H2-23)，1.61(m，H2-24)，1.60(m，H2-36)，2.02(m，H2-37)，3.48(br，H2-40)，3.43(br，H2-41)，3.28(br，H2-42)，3.80(br，H-43)，1.75(m，H-44b)，2.77(br，H-45a)，2.85(br，H-45b)，9.53(br s，H-8n)，9.77(br s，H15N)；13C NMR(CDCl3)δ10.09(C-1)，29.11(C-2)，71.03(C-3)，133.69(C-4)，129.94(C-5)，23.42(C-6)，36.97(C-7)，83.59(C-8)，36.99(C-9)，53.95(C-10)，30.66(C-11)，26.84(C-12)，51.84(C-13)，49.67(C-14)，80.71(C-15)，31.92(C-16)，18.40(C-17)，31.96(C-18)，67.29(C-19)，21.46(C-20)，148.85(C-21)，168.39(C-22)，65.46(C-23)，28.47(C-24)，25.79(C-36)，31.92(C-37)，165.04(C-38)；HRFABMS C45H80N6O5Cl的Mr計(jì)算值819.5879(M+H)+，Mr實(shí)測(cè)值819.5889。
crambescidin 673(9)無(wú)色樹(shù)膠，[α]25D-16.6°(c 0.50，MeOH)；FABMS m/z 674(M+H)，576，420，358，314(C19H28N3O，HRFABMS314.2240，Δ-0.8mmu)，264，246，168；1H NMR參見(jiàn)表1；13C NMR參見(jiàn)表2；HRFABMS C38H64N3O7的Mr計(jì)算值674.4744(M+H)+，Mr實(shí)測(cè)值674.4734。
crambescidin 687(10)無(wú)色樹(shù)膠，[α]25D-18.2°(c 0.52，MeOH)；FABMS m/z 688(M+H)，630，590，420，374，358，314，264，246，168；1HNMR參見(jiàn)表1；13C NMR參見(jiàn)表2；HRFABMS C39H66N3O7的Mr計(jì)算值688.4901(M+H)+，Mr實(shí)測(cè)值688.4907。
crambescidin 657(11)無(wú)色樹(shù)膠，[α]25D-12.1°(C 0.34，MeOH)；FABMS m/z 658(M+H)，612，560，404(C22H34N3O4，HRFABMS404.2541，Δ0.8mmu)，360，358，288，206(C13H20NO，HRFABMS206.1547，Δ-0.2mmu)；1H NMR參見(jiàn)表1；13C NMR參見(jiàn)表2；HRFABMS C38H64N3O6的Mr計(jì)算值658.4795(M+H)+，Mr實(shí)測(cè)值658.4797。crambescidin 657的甲烷化將溶于MeOH(1ml)中的11(1mg)和Et2O(2ml)中的重氮甲烷的混合物于室溫下保持24小時(shí)。去除溶劑(N2)，殘余物進(jìn)行硅膠層析，用CHCl3∶MeOH(9∶1)作為溶劑體系洗脫，產(chǎn)生11的甲酯(0.7mg)。無(wú)色樹(shù)膠，F(xiàn)ABMS m/z 672(M+H)，574，404，358，288，206；HRFABMSC39H66N3O6的Mr計(jì)算值672.4952(M+H)+，Mr實(shí)測(cè)值672.4984。
13，14，15-isocrambescidin 657(12)無(wú)色樹(shù)膠，[α]25D-32.7°(c0.29，MeOH)；FABMS m/z 658(M+H)，612，560(C32H54N3O5，HRFABMS 560.4034，Δ2.9mmu)，404，360，358(C21H32N3O2，HRFABMS 358.2494，Δ0.1mmu)，288，206；1H NMR參見(jiàn)表1；13CNMR參見(jiàn)表2；HRFABMS C38H64N3O6的Mr計(jì)算值658.4795(M+H)+，Mr實(shí)測(cè)值658.4790。
表1提供化合物7-12的1H NMR數(shù)據(jù)。表2提供化合物7-12的13C NMR數(shù)據(jù)。
表1. 化合物7-12的1H NMR數(shù)據(jù)H No. 7(CD3OD) 8(CD3OD) 9(CDCl3) 10(CDCl3)11(CDCl3) 12(CDCl3)1 0.89，t，7 0.85，t，7 0.86，t，70.87，t，7 0.82，t，7 0.94，t，7.52a1.49，m1.48，m1.45，m 1.46，m1.42，m 1.47，m2b1.57，m1.55，m1.54，m 1.55，m1.53，m 1.51，m3 4.46，br d，10 4.42，br d，9.54.52，br d，104.51，br d，10 4.38，br d 9.5 4.63，br s4 5.52，br d，11 5.51，br d，11 5.48，br d，115.48，br d，11 5.48，br d，11 5.50，br d，115 5.72，br dd，11，7 5.72，br dd，11，7 5.64，br dd，11，75.66，br dd，11，7 5.64，br dd，11，7 5.62，br dd，11，76a2.18，m2.18，m2.12，m 2.18，m2.14，m 2.10，m6b2.44，m2.42，m2.33，m 2.34，m2.32，m 2.30，m7a2.02，m2.02，m1.81，m 1.92，m1.84，m 1.78，m7b2.37，br t，13.5 2.33，br t，13.5 2.73 br t，14 2.51，br t，14.5 2.74，br t，14 2.73，br t，13.59a1.44，t，12.5 1.44，t，131.32，t，12.5 1.41，t，12.5 1.31，t，12.5 1.35，t，12.5104.32，m4.05，m4,32，m 43.2，m3.98，m 3.89，m11a 1.61，m1.60，m1.55，m 1.57，m1.61，m 1.55，m11b 2.43，m2.29，m2.30，m 2.33，m2.14，m 2.19，m12a 2.06，m1.86，m1.98，m 2.03，m1.78，m 1.62，m12b 2.18，m2.31，m2.14，m 2.16，m2.24，m 2.15，m13 4.35，m 4.26，m 3.98，m143.48，s3.08，d，5 3.31，3 3.35，s2.89，d，4 3.48，d，3.516a 1.65，m1.68，m1.68，m 1.62，m1.62，m 1.62，m16b 1.87，m1.76，m1.74，m 1.76，m2.02，m 1.71，m17a 1.84，m1.75，m1.67，m 1.76，m1.67，m 1.69，mH No.7(CD3OD)8(CD3OD) 9(CDCl3) 10(CDCl3)11(CDCl3) 12(CDCl3)17b 1.96，m 1.82，m2.44，m 2.32，m2.44，m2.01，m18a 1.33，m 1.26，m1.21，m 1.23，m1.21，m1.29，m18b 1.73，m 1.72，m1.66，m 1.76，m1.67，m1.59，m19 3.97，m 3.84，m4.00，m 4.08，m3.99，m3.69，m20 1.14，d，6 1.04，d，6 1.05，d，61.09，d，6.5 1.04，d，6.5 1.17，d，623a 4.16，t，6.5 4.13，dt，6.5，2 4.01，m 3.96，m3.96，m3.97，m24 1.66，m 1.65，m1.60，m 1.60，m1.60，m1.57，m36 1.64，m 1.65，m1.56，m 1.60，m1.60，m1.54，m37a 2.49，m 2.50，m2.22，t，72.23，t，7 2.23，t，7 2.23，t，737b 2.76，m 2.76，m2.22，t，72.23，t，7 2.23，t，7 2.23，t，739a 3.53，dt，13，5 3.45，dt，14，539b 3.62，dt，13，5 3.61，dt，14，540 2.05，m 2.05，m41 3.40，t，5 3.40，t，542a 3.36，dd，15，3 3.36，dd，15，342b 3.62，dd，15，10 3.61，dd，15，1043 4.06，m 4.05，m44a 1.74，m 1.73，m44b 1.85，m 1.84，m45 3.13，m 3.13，m13 OH5.86，s 5.84，sOme3.65，s
表2. 化合物7-12的13C NMR數(shù)據(jù)C No.7(CD3OD) 8(CD3OD) 9(CDCl3)10(CDCl3) 11(CDCl3) 12(CDCl3)110.26 10.1210.2210.1410.1710.30229.70 29.5729.0629.1029.1829.14371.83 71.6470.7071.2670.5770.364133.54133.62 133.84 133.67 133.91 133.895130.59130.66 129.78 129.75 129.88 129.62623.73 23.7423.7223.4523.7724.37736.88 37.1936.7836.8836.8337.41884.44 84.4183.5383.6083.6685.00938.98 37.6737.7737.1137.7837.3410 53.41 54.9052.2152.4053.8052.8811 30.00 30.7829.66*29.6730.66*30.2612 37.52 26.8835.7036.8826.8529.64*13 89.86 53.4788.4488.6951.5851.9914 55.17 49.9755.5954.6450.6441.4815 83.82 81.4883.1583.0880.6483.2016 31.90 31.9129.45*32.0831.91*29.68*17 18.46 18.7717.6017.9417.9519.9018 31.76 32.27*31.67*31.5332.19**31.58**19 69.34 67.7568.0968.8266.7168.8120 21.00 21.0921.4921.4121.5922.2521 148.86149.54 148.85 148.12 149.48 149.74C No. 7(CD3OD)8(CD3OD) 9(CDCl3)10(CDCl3)11(CDCl3)12(CDCl3)22168.12 169.54 167.37 167.16168.59 168.172366.3865.8565.5765.91 65.07 65.062428.8328.9528.2428.39 28.66 28.303626.9826.3325.6525.79 25.61 25.533732.0832.38*32.18**34.10 32.09**31.91**38165.49 165.56 181.60 174.39181.38 180.533947.1947.194019.1519.144139.2639.264257.8357.834366.3866.424432.0232.084537.6937.69Ome 51.44標(biāo)記*或**的信號(hào)可以交換。
生物活性。crambescidins(1-4)抑制L1210細(xì)胞的生長(zhǎng)1，crambescidin 816(1)也表現(xiàn)出對(duì)單純皰疹(Herpes simplex)、I型病毒(HSV-I)的抗病毒活性，并且表明是一種強(qiáng)Ca2+通道的阻斷劑4。13，14，15-isocrambescidin 800(5)對(duì)L1210細(xì)胞的細(xì)胞毒性明顯較低，并且未觀察到抗病毒活性2。ptilomycalin A(6)顯示出對(duì)L1210、P388和KB細(xì)胞的細(xì)胞毒性，表現(xiàn)出對(duì)白色念珠菌(Candida albicans)的抗真菌活性以及抗病毒活性(HSV)5，6。
在針對(duì)L1210鼠白血病細(xì)胞細(xì)胞的平行測(cè)定(參見(jiàn)表3)中，采用crambescidin 816(1)作為標(biāo)準(zhǔn)，具有一個(gè)氯代亞精胺單位的crambescidins 834(7)和818(8)的活性比1高5倍。然而，沒(méi)有亞精胺衍生單位的crambescidin 674(9)和687(10)的活性比1低5倍。13，14，15-isocrambescidin 657(12)如預(yù)期的一樣，其活性顯著低于(于5μg/ml下沒(méi)有抑制)其它c(diǎn)rambescidins。ptilomycalin A(6)的活性略低于1的活性。
同時(shí)，在對(duì)紅酵母(Rhodotorula glutinis)的抗微生物測(cè)定中，具有亞精胺衍生物衍生單位的crambescidins和ptilomycalin A于2μg/孔下表現(xiàn)出活性，其它c(diǎn)rambescidins于20μg/孔下不表現(xiàn)出任何活性。這些觀察揭示出crambescidins和ptilomycalin A中所述五環(huán)部分和所述亞精胺或其衍生物單位的籠狀結(jié)構(gòu)，在其強(qiáng)的生物活性中起重要作用。
令人感興趣的是，在該測(cè)定中crambescidin 657(11)表現(xiàn)出是細(xì)胞毒性最強(qiáng)的化合物。尤其參見(jiàn)表4。用重氮甲烷甲烷化，顯著降低該活性。因?yàn)樵趦?nèi)鹽形式的11中，側(cè)鏈的酸性末端向所述堿性五環(huán)胍部分折疊，并且該內(nèi)鹽的構(gòu)象不同于其它c(diǎn)rambescidins，所以11的細(xì)胞毒性可以來(lái)自對(duì)所述細(xì)胞的不同作用機(jī)制。
所述新的crambescidin化合物將具有與先前已知的crambescidin化合物相當(dāng)?shù)乃幱糜猛荆貏e是作為抗腫瘤化合物，如表3和表4所示。表3.化合物1、6-12和甲基11對(duì)L1210細(xì)胞的細(xì)胞毒性濃度 抑制(％)(μg/ml) 1 6 7 8 910 11 12 甲基111.0100100100100100 10010010000.597 99 95 95 00 1000 00.25 70 60 95 95 00 1000 00.10 20 90 90 00 93 0 0表4. 對(duì)腫瘤細(xì)胞系的細(xì)胞毒性μg/mlcrambescidinsP-388A-549 HT-29MEL-28834(7) 0.05 0.050.05 0.05818(8) 0.1 0.1 0.1 0.1673(9) Nd Nd Nd Nd687(10)Nd Nd Nd Nd657(11)0.25 0.050.05 0.05816(1) 0.5 0.5 0.4Nd活性未檢測(cè)。
本發(fā)明的化合物已經(jīng)以基本純的形式分離(或半合成制備)，即其純度水平足以允許進(jìn)行其物理學(xué)和生物學(xué)鑒定。如上所述，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這些化合物具有特定的抗腫瘤活性，因此它們可用作哺乳動(dòng)物、特別是人類(lèi)的藥物。因此，本發(fā)明的另一方面涉及含有本文鑒定的活性化合物的藥用組合物和使用這類(lèi)藥用組合物的治療方法。
在體外，已經(jīng)在小鼠白血病P-388、人肺癌A-549、人結(jié)腸癌HT-29和人黑素瘤MEL-28的細(xì)胞培養(yǎng)物中測(cè)定了所述化合物的抗腫瘤活性。采用Bergeron等，Biochem.Biophys.Res.Comm.，121848，1984和Schroeder等，J.Med.Chem.，241078，1981中描述的方法，進(jìn)行該步驟。
本發(fā)明的活性化合物對(duì)哺乳動(dòng)物腫瘤表現(xiàn)出抗腫瘤活性，所述哺乳動(dòng)物腫瘤諸如P-388鼠白血病、A-549人肺癌、HT-29人結(jié)腸癌和MEL-28人黑素瘤。本發(fā)明因此包括對(duì)哺乳動(dòng)物的治療方法，所述哺乳動(dòng)物為受對(duì)這些化合物敏感的惡性腫瘤影響的任何哺乳動(dòng)物，該方法包括給予所述受影響個(gè)體治療有效量的活性化合物或化合物的混合物、或其藥用組合物。
本發(fā)明也涉及藥用組合物，所述藥用組合物包含作為活性組分的一種或多種本發(fā)明的化合物，本發(fā)明也涉及制備所述藥用組合物的方法。
藥用組合物的實(shí)例包括具有合適組成的任何固體(片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑等)或液體(溶液、懸浮液或乳液)即用于經(jīng)口、局部或胃腸外給藥的組合物，它們可以含有純化合物，或與任何載體或其它藥理學(xué)活性的化合物結(jié)合使用。當(dāng)胃腸外給予時(shí)，這些組合物可能需要是無(wú)菌的。
包含本發(fā)明化合物的藥用組合物的準(zhǔn)確的劑量，將根據(jù)具體制劑、應(yīng)用方式以及特別是部位、宿主和待治療的細(xì)菌或腫瘤而改變。應(yīng)該考慮其它因素，如年齡，體重、性別、飲食、給藥時(shí)間、排泄速率、該宿主的身體狀況、藥物組合、反應(yīng)敏感性和該疾病的嚴(yán)重性?？梢栽谧畲竽褪艿膭┝糠秶鷥?nèi)，進(jìn)行連續(xù)或定期給藥。參考文獻(xiàn)以下參考文獻(xiàn)提供涉及本發(fā)明的背景信息。(1)Jares-Erijiman，E.A.；Sakai，R；Rinehart，K.L.J.Org.Chem.1991，56，5712-5715.(2)Jares-Erijiman，E.A.；Ingrum，A.L.；Carney，J.R.；Rinehart，K.L.；Sakai，R.J.Org.Chem.1993，58，4805-4808.(3)Taveras，R.；Daloze，D.；Braekman，J.C.；Hajdue，E.Biochem.Syst.Ecol.1994，22，645.(4)Berlinck，R.G.S.；Braekman，J.C.Daloze，D.；Bruno，I.；Riccio，R.；Ferri，S.；Spampinato，S.；Speroni，E.J.Nat.Prod.，1993，56，1007-1015.(5)Kashman，Y.；Hirsch，S.；McConnell，O.J.；Ohtani，I.；Kusumi，T.；Kakisawa，H.J.Am.Chem.Soc.，1989，111，8925-8926.(6)Ohtani，I.；Kusumi，T.；Kakisawa，H.；Kashman，Y.；Hirsch，S.J.Am.Chem.Soc.，1992，114，8472-8479.(7)Ohtani，I.；Kusumi，T.；Kakisawa，H.Tetrahedron Lett.，1992，33，2525-2528.(8)Overman，L.E.；Rabinowitz，M.H.；Renhowe P.A.J.Am.Chem.Soc.，1995，117，2657-2658.(9)Patil，A.D.；Kumar，N.V.；Kokke，W.C.；Bean，M.F.； Freyer，A.J.；Brosse，C.D.；Mai，S.；Truneh，A.；Faulkner，D.J.；Carte，B.；Breen，A.L.；Hertzberg，R.P.；Johnson，R.K.；Westley，J.W.；Potts B.C.M.J.Org.Chem.1995，60，1182-1188.(10)Witten，J.L.；Schaffer，M.H.；O’Shea，M.；Cook，J.C.；Hemling，M.E.；Rinehart，K.L.，Jr.Biochem.Biophys，Res.Commun..1984，124，350-358.
已經(jīng)詳細(xì)描述了本發(fā)明，包括其優(yōu)選的實(shí)施方案。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到，考慮本說(shuō)明書(shū)時(shí)，可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行修改和/或改進(jìn)，這仍在以下權(quán)利要求書(shū)中提出的本發(fā)明的范圍和精神內(nèi)。
權(quán)利要求
1.基本純的crambescidin 834。
2.基本純的crambescidin 818。
3.基本純的crambescidin 673。
4.基本純的crambescidin 687。
5.基本純的crambescidin 657。
6.基本純的13，14，15isocrambescidin 657。
7.基本純的甲基crambescidin 657。
8.藥用組合物或獸醫(yī)用組合物，它包含有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為crambescidin 834的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
9.藥用組合物或獸醫(yī)用組合物，它包含有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為crambescidin 818的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
10.藥用組合物或獸醫(yī)用組合物，它包含有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為crambescidin 673的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
11.藥用組合物或獸醫(yī)用組合物，它包含有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為crambescidin 687的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
12.藥用組合物或獸醫(yī)用組合物，它包含有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為crambescidin 657的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
13.藥用組合物或獸醫(yī)用組合物，它包含有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為13，14，15isocrambescidin 657的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
14.藥用組合物或獸醫(yī)用組合物，它包含有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為甲基crambescidin 657的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
15.有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為crambescidin 834的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑用于藥物生產(chǎn)的用途，所述藥物用于治療性或預(yù)防性治療患有哺乳動(dòng)物腫瘤的患者。
16.有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為crambescidin 818的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑用于藥物生產(chǎn)的用途，所述藥物用于治療性或預(yù)防性治療患有哺乳動(dòng)物腫瘤的患者。
17.有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為crambescidin 673的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑用于藥物生產(chǎn)的用途，所述藥物用于治療性或預(yù)防性治療患有哺乳動(dòng)物腫瘤的患者。
18.有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為crambescidin 687的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑用于藥物生產(chǎn)的用途，所述藥物用于治療性或預(yù)防性治療患有哺乳動(dòng)物腫瘤的患者。
19.有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為crambescidin 657的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑用于藥物生產(chǎn)的用途，所述藥物用于治療性或預(yù)防性治療患有哺乳動(dòng)物腫瘤的患者。
20.有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為13，14，15isocrambescidin 657的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑用于藥物生產(chǎn)的用途，所述藥物用于治療性或預(yù)防性治療患有哺乳動(dòng)物腫瘤的患者。
21.有效抗腫瘤量的、基本純的、本文命名為甲基crambescidin657的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑用于藥物生產(chǎn)的用途，所述藥物用于治療性或預(yù)防性治療患有哺乳動(dòng)物腫瘤的患者。
全文摘要
通過(guò)FABMS指導(dǎo)的分離,已經(jīng)從地中海海綿動(dòng)物甘藍(lán)海綿Crambe crambe的提取物中,獲得2種新的具有一個(gè)氯代亞精胺單位的低量成分crambescidin 834 (7)、818(8)和4種新的沒(méi)有亞精胺衍生單位的低量成分crambescidin673(9)、687(10)、657(11)和13,14,15－isocrambescidin 657(12)以及已知的crambescidins(1－5)和ptilomycalin A(6)。通過(guò)波譜數(shù)據(jù)解析(參見(jiàn)圖4－9),闡述了它們的結(jié)構(gòu)。在對(duì)L1210鼠白血病細(xì)胞的平行測(cè)定中,crambescidins 834(7)、818 (8)和657(11)表現(xiàn)出的細(xì)胞毒性是已知的crambescidin 816(1)的5倍。具有亞精胺單位或亞精胺衍生單位的crambescidins均表現(xiàn)出對(duì)紅酵母的抗菌活性。
文檔編號(hào)A01N43/90GK1259938SQ98806080
公開(kāi)日2000年7月12日 申請(qǐng)日期1998年4月14日 優(yōu)先權(quán)日1997年4月15日
發(fā)明者石建功, 孫富榮, K·L·萊恩哈特 申請(qǐng)人:法馬馬有限公司, 李內(nèi)特·歐內(nèi)斯特