專利名稱：：含有硫酸粘菌素的穩定組合物的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種包含有硫酸粘菌素作為活性成份的新的穩定組合物，它實際上是以復合顆粒形式存在且作為用作飼養有益的動物的飼料添加劑以及作為一種藥物用于預防有益動物的細菌感染，其中作為活性成份的硫酸粘菌素以這樣的方式混合于該組合物中，從而即使在該組合物混合于飼料中并進而將所得混合物于高溫水蒸氣下壓成顆粒或者將該組合物在空氣中于40℃高溫下單獨貯存很長時間的情況下也能防止硫酸粘菌素的部分降解或者部分降低其抗菌活性或能力。本發明還涉及該含有硫酸粘菌素的新的穩定組合物的制備方法。已知粘菌素是環肽抗生素且通常是由粘菌素A，B和C構成(見“MerckIndex”，第11版，第2476頁(1989))。現已上市的硫酸粘菌素通常是硫酸粘菌素A和硫酸粘菌素B的混合物。在下文中術語“硫酸粘菌素”是指硫酸粘菌素A本身或者是指已上市的硫酸粘菌素A和較少量的硫酸粘菌素B的一個混合物。硫酸粘菌素已被正式宣布為一種可以用作飼養有益動物，例如豬，奶牛和雞的飼料的添加劑，用以促進所養有益動物的生長以及提高所喂飼料的消化效率。而且，硫酸粘菌素也廣泛地用作為抗菌藥而對有益動物給藥用以預防動物受由細菌感染而引起腹瀉的侵襲。然而，到目前為止所知的普通的制成顆粒狀且為了上述目的需含有硫酸粘菌素作為添加劑的混合飼料在40℃的高溫下貯存一個月或更長的一段時間后，其所表現出的抗菌活性或能力隨著時間的推移而降到了不適宜的低水平，從而，意謂著在上述混合飼料顆粒中作為抗菌活性組份存在的硫酸粘菌素在混合飼料中是不穩定的。另一方面，已知當硫酸粘菌素單獨在空氣中貯存于一定的環境溫度中相當長的時間，隨著時間的推移硫酸粘菌素并沒有失活到相當大的程度而且其抗菌能力沒有減小。對這些情況，以前還不清楚為什么作為顆粒狀混合飼料的添加劑而混合于其中的硫酸粘菌素在40℃的溫度下貯存一個月或更長時間不穩定的確切原因。因此，迫切需要獲得一種新的含有硫酸粘菌素作為活性組份的穩定且抗菌的組合物，其中的硫酸粘菌素組份穩定使其抗菌活性或能力不至降到一不合適的低水平，此外還需確保即使在該包含有新的穩定且抗菌的組合物的顆粒狀混合飼料貯存于40℃中一個月或者稍長的一段時間的情況下，該混合飼料在貯存期間或之后不表現出抗菌活性或能力的實質性的降低。本發明的目的之一就是提供這樣一個新的符合目前需要的且含有硫酸粘菌素作為活性成份的穩定且抗菌的組合物。本發明的另一目的就是提供一個可方便有效地進行商業化生產的該新的穩定且抗菌的包含有硫酸粘菌素的組合物的制備方法。本發明的另一目的從以下敘述中可以清楚看出。為了達到本發明的上述目的，我們，本發明者，已作了廣泛的研究。結果，我們已發現存在于顆粒狀的混合飼料中的硫酸粘菌素在貯存于40℃的環境中隨著時間的推移而降低抗菌能力亦即在某種意義上就是不穩定的可能的確切原因，是所存在的硫酸粘菌素會逐漸被降解或結構被改變從而在所制備的顆粒狀混合飼料的貯存期內部分或完全失去活性，這包括粘菌素環肽的分子結構的任何改變，并且該硫酸粘菌素組分是因為下述原因而發生降解和失活的。于是，首先這些原因是那些在所用混合飼料中作為雜質或者作為混合飼料中通常的礦物添加劑而伴存的二價金屬離子如鐵離子，鎂離子，鈣離子或其它相近離子，當混合飼料和硫酸粘菌素的混合物在120℃左右的熱水蒸汽中壓成顆粒狀時，這些離子將遷移或擴散進入存在的硫酸粘菌素組分的顆粒中；其次，那些擴散入硫酸粘菌素組分顆粒中的二價金屬離子將在由所用水蒸汽供應水份以及熱和壓力的作用下和硫酸粘菌素組分直接接觸并相互作用；第三，這種二價金屬離子和硫酸粘菌素組分的相互作用可能產生未知的不溶于水或一些有機溶劑中的配合物；第四，上述的二價金屬離子和硫酸粘菌素組分的相互作用在該顆粒狀飼料組合物貯存于40℃左右的高溫時將進一步加劇。順提一句，通過實驗我們發現當硫酸粘菌素本身在環境溫度至25℃的常壓下和諸如鐵離子，鎂離子或相近離子等二價金屬離子接觸時，隨著時間的推移硫酸粘菌素在正常的情況下其抗菌能力沒有顯著性的降低。通過進一步的研究，我們現已發現上述的在顆粒狀混合飼料中偶有發生的硫酸粘菌素組份的降解和失活可以在制備顆粒狀混合飼料的步驟中以及貯存該混合飼料的過程中通過確保阻止伴存于混合飼料中的二價金屬離子的遷移并進而和硫酸粘菌素直接接觸而被阻止或消失。為了阻止這些二價離子的以上述方式的遷移成和硫酸粘菌素組份的直接接觸以至在上述情況下相互作用使硫酸粘菌素降解和失活，我們現已發現有必要以復合顆粒形式提供硫酸粘菌素組份，該復合顆粒由1份重量的硫酸粘菌素微粒，0.1到3份重量的膠體狀態的α-淀粉以及0.5到5份重量的β-淀粉和/或大豆粉微粒的混合物制成，其中含水量為不超過總重量的12％的較低水平，而且顆粒大小在250微米到750微米之間，每一混合物均含有硫酸粘菌素以及β-淀粉和/或大豆粉的微粒均勻分散于膠體狀的α-淀粉的連續相或基質中的內部結構從而使幾乎所有的硫酸粘菌素微粒均包埋進由α-淀粉所構成的連續相或基質中并且每一復合顆粒均有固體分散相的結構。而且，我們還發現如果上述制備并含有分散于其中的硫酸粘菌素微粒的復合顆粒只是簡單地混合于其中而省略了β-淀粉和/或者大豆粉的微粒作為復合顆粒的伴隨組分，或者如果在復合顆粒中存在的硫酸粘菌素微粒，連續相形式的α-淀粉材料以及β-淀粉和/或大豆粉微粒的重量比例超出預定的1∶0.1-3.0∶0.5-5.0的范圍，那么在制備甚至已包含這些硫酸粘菌素的復合顆粒的顆粒狀混合飼料的步驟中以及貯存所制的顆粒狀混合飼料的過程中依然會明顯發生硫酸粘菌素組份的降解和失活。此外，現在我們還發現制備含有硫酸粘菌素分散微粒且具備上述的特定的組成和內部結構的復合顆粒可以使用我們最近設計的方法從而方便且高效地進行，此方法包括將硫酸粘菌素的細顆粒混合于α-淀粉在水中的糊狀水溶液中，攪拌所得混合物使硫酸粘菌素充分分散在α-淀粉的糊狀水溶液中，從而形成均勻的糊漿，再將所得的均勻糊漿和β-淀粉和/或者大豆粉的微粒混合，然后攪和所得的硫酸纖維素微粒，α-淀粉，水以及β-淀粉和/或大豆粉的微粒的混合物從而得到一捏和了的、均勻的且如面團狀的物質塊，其中的硫酸粘菌素以及β-淀粉和/或者大豆粉的微粒均勻分散于在該物質塊中的α-淀粉所構成的水合的連續相或基質中，用合適機器將面團狀物質塊分割成較小的塊，干燥這些小塊至一合適的水含量，研磨干燥小塊得到包含有不同大小分散的復合顆粒的研磨物，再篩選研磨物以回收在所要求大小范圍內的分散的復合顆粒。根據本發明的第一個方面，即提供一含有硫酸粘菌素作為活性成份的且以粉狀或粒狀存在的穩定組合物，其特征是所述粉狀組合物包含由一特定混合物所構成的分散的復合顆粒，此特定混合物由1份重量的硫酸粘菌素、0.1到3份重量的α-淀粉和0.5到5.0份重量的β-淀粉或者大豆粉或者β-淀粉和大豆粉的混合物構成，其中水份含量不超過該混合物重量的12％，由該混合物構成的分散的復合顆粒的大小在250微米到750微米之間，并且由該混合物構成的每一分散復合顆粒均是有這樣的內部結構，即在該混合物的單個復合顆粒中硫酸粘菌素以及β-淀粉和/或者大豆粉作為它們單獨的且均勻分散于由α-淀粉所構成的連續相或基質中的微粒形式存在從而使幾乎所有的硫酸粘菌素以及β-淀粉和/或者大豆粉的微粒均包埋于α-淀粉所構成的連續相或基質中，并且若需要，可通過壓制該混合物的分散的復合顆粒成粒狀從而使該穩定組合物以粒狀存在。按照本發明的第一個方面的新的包含有硫酸粘菌素的穩定組合物在這個意義上是穩定的，即本發明的新的組合物表現出的抗菌能力是穩定的且即使在該新的組合物和混合飼料混合后再將所得混合物在120℃左右的高溫水蒸汽下壓成顆粒狀，以及將上述制備顆粒狀的含有本發明新的組合物的混合飼料用密封容器包裝，在相對濕度高達75％的40℃的環境中貯存一個月或稍長一段時間內等情況下也均沒有明顯的降低。當然，本發明的新的穩定組合物若不和任何飼料混合而在隔離條件下單獨貯存于封閉容器即使是在40℃條件下貯存超過一個月的長時間也能保持其起始抗菌能力。相應地，本發明的新的組合物本身也能作為一硫酸粘菌素的穩定抗菌劑而直接對動物給藥用以預防動物免受細菌的侵襲。本發明中用于加入新的穩定組合物中的硫酸粘菌素可以是從3％或者更高純度的粗硫酸粘菌素產品到50％或更高純度的純硫酸粘菌素產品。在本發明的新的穩定組合物中使用的α-淀粉可以是多樣性的且可從多種谷物如小麥，大米，玉米等中產生，也可從各種薯類如白薯，甘薯，塔羅(talo)薯中產生。這也適用于本發明的新的穩定組合物中的β-淀粉。作為必需成份在本發明的新的穩定組合物中存在的淀粉無論是α型的或β型的最好是那些含有低量灰份的。但對所用的天然淀粉都沒有設置嚴格的限制。優選地，在本發明的新組合物中使用的α-淀粉和β-淀粉都是玉米淀粉。而在本發明的新組合物中使用的大豆粉可來源于各種各樣的大豆。在本發明中加于新組合物中的α-淀粉可通過將生淀粉細粒即β-淀粉和水混合，再于95℃或者95℃左右加熱所得水混合物，然后將此膠狀淀粉漿脫水至方便使用的合適水含量，若需要再研磨這些干漿等步驟而可事先制得。如此而得的α-淀粉的干粉可通過和水混合而形成糊狀的α-淀粉的水溶液，還可以進一步地和其它組分混合以形成本發明的新的組合物。在本發明的新的穩定組合物中，分散復合顆粒可優選地由1份重量的硫酸粘菌素、0.2到2份重量的α-淀粉以及1到2份重量的β-淀粉或大豆粉或β-淀粉和大豆粉的混合物所組成的混合物而構成，其中含水量不超過該混合物重量的12％。因此，在按照本發明的復合顆粒中硫酸粘菌素，α-淀粉以及β-淀粉之間的重量比率是在1.0∶0.2-2.0∶1.0-2.0的范圍內，更優選地在1.0∶0.2-1.0∶1.0-2.0的范圍內。本發明的組合物中的復合顆粒中可優選地含有10-50％重量的硫酸粘菌素并且可優選地含有構成復合顆粒的混合物重量的3-10％重量的水份。本發明的組合物中的復合顆粒大小可以不必在250微米到750微米的特殊范圍內但可以有一個250微米到750微米的范圍。優選地，復合顆粒大小在350微米到500微米的范圍內。若需要，本發明的新的穩定組合物還可進一步包括除硫酸粘菌素和淀粉外的附加組分如羧甲基纖維素，當然這需要這些附加組分既不釋放二價金屬離子也不對硫酸粘菌素組分產生任何不利的影響。按照本發明的第二方面，還要提供一個制備含有硫酸粘菌素作為活性成份的穩定組合物的方法，該組合物是以包含分散的且由作為活性組分的硫酸粘菌素，α-淀粉以及β-淀粉和/或大豆粉的混合物所構成復合顆粒的粉狀形式存在的，其中的硫酸粘菌素以及β-淀粉和/或大豆粉微粒是在該混合物的單個復合顆粒中的α-淀粉所構成的連續相或基質中均勻分散的，其特征是，該方法包括下列步驟(a)將1份重量的硫酸粘菌素細粒和0.1到3份重量的α-淀粉在水中的糊狀水溶液混合，攪拌所得混合物至硫酸粘菌素顆粒良好地分散且部分溶解于α-淀粉的糊狀水溶液中從而使該混合物形成一均勻糊漿，(b)將由硫酸粘菌素，α-淀粉和水的混合物組成的均一糊漿和0.5到5份重量的β-淀粉和/或大豆粉微粒混合，(c)攪和由硫酸粘菌素，α-淀粉，水以及β-淀粉和/或大豆粉所混成的混合物直至該捏和的混合物變成一均勻的面團狀塊，其中的硫酸粘菌素微粒以及β-淀粉微粒和/或者大豆粉微粒均勻分散在一由該塊中的α-淀粉所構成的水合的連續相或基質中，(d)將所得的均一面團狀物質塊分割成較小的塊，(e)將該小物塊干燥至水含量占其重量的10％，(f)研磨該干燥小塊得一包含分散復合顆粒的且具有不同顆粒大小的磨碎物，其中的每一復合顆粒由硫酸粘菌素，α-淀粉以及β-淀粉和/或者大豆粉所組成，并且有這樣的內部結構，即硫酸粘菌素以及β-淀粉和/或大豆粉的微粒在一由存在于該復合顆粒中的α-淀粉所構成的連續相或基質中均勻分散從而使幾乎所有硫酸粘菌素以及β-淀粉和/或大豆粉的微粒均包埋于在該不同大小的復合顆粒中存在的α-淀粉的連續相或基質中，(g)將上述磨碎物篩選回收那些包含顆粒大小在250μm到750μm范圍內的復合顆粒的粉末。(h)若需要，將在步驟(g)中獲得的粉末壓制成粒狀。在按照本發明的第二方面的步驟中，步驟(a)和(b)以及(c)，(d)，(f)，(g)和(h)可在室溫下各自使用適合于相應目的的常規設備采用已知的基本方法而完成。但方法中的干燥步驟(e)是在100℃或更高的高溫中于減壓下在合適的卻是常規的設備中進行的。按照本發明的硫酸粘菌素的穩定組合物可作為一種飼料添加劑。按本發明的第一方面，含有硫酸粘菌素作為活性組份的新的穩定組合物可以按合適的比例混入普通的用以飼養家畜如豬，牛和雞的飼料中。已知這些普通的飼料可能是諸如玉米，小麥，大麥，大豆，大米或其它谷類，米糠，小麥麥麩的粉狀喂養材料，或者也可能是普通的干顆粒狀混合飼料即由玉米粉，小麥粉，脫脂大豆粉，魚粉，奶渣，維生素，礦物質如硫酸鐵，碳酸鎂，氨基酸以及調味劑所組成的干混型飼料。按照本發明的含有硫酸粘菌素的新的穩定組合物可以按這樣的合適比例與普通的混合飼料混合，即在所得的混合物中得到10ppm到100ppm的硫酸粘菌素且使得混合物能用普通造粒機在120℃左右的高溫下在熱水蒸汽中壓成顆粒狀。在將上述的混合物制成顆粒的過程中，混在飼料中的本發明的新的穩定組合物的硫酸粘菌素組份能保持穩定，也就是說能防止其失活至不合適的程度。此外，只要該顆粒狀混合飼料密封于不透氣的容器中且貯存在40℃左右的高溫中一個月左右的長時間中，那么那些在制成的顆粒狀的混合飼料中存在的硫酸粘菌素組分在與按照本發明的硫酸粘菌素的新的穩定組合物結合時也能保持穩定，也就是說能防止失活至不適宜的程度。本發明現可參照如下各實施例而得以闡明。實施例1(1)制備按照本發明的含有硫酸粘菌素的新的穩定組合物制備按照本發明的硫酸粘菌素的新的穩定組合物的一個典型的例子如下述步驟(i)到(viii)的方法所示在步驟(i)中，將粉化的生玉米淀粉(20克)和水(100克)混合后在充分的攪拌下加熱到95℃直至生淀粉膠化成α-淀粉的狀態且形成α-淀粉在水中的糊狀水溶液。在步驟(ii)中，將上述步驟(i)所得的α-淀粉于水中的糊狀水溶液(共120克)和100克市售的硫酸粘菌素細粉混合(由硫酸粘菌素A和硫酸粘菌素B的混合物組成的且其中的硫酸粘菌素的重量含量為50％)，在室溫中充分攪拌所得混合物直到硫酸粘菌素分散且有部分溶解于α-淀粉的糊狀水溶液中從而使整個混合物形成均勻糊狀。在步驟(iii)中，將從步驟(ii)中所的均勻糊(共220克)和260克生玉米淀粉的細粉(作為上述的β-淀粉)混合。在步驟(iv)中，將從上述步驟(iii)中獲得的混合物(共420克)在室溫中充分攪拌直到混合物捏和成一均勻的面團狀塊，其中的硫酸粘菌素微粒和生玉米淀粉微粒(作為β-淀粉)均勻分散在含水的糊狀的且由塊中存在的α-淀粉所構成的連續相中。在步驟(v)中，將上述捏和步驟(iv)中所得的面團塊用擠壓機和切割機分割成大約為5毫米×5毫米×10毫米的合適尺寸的小塊。在步驟(vi)中，將上述步驟(v)所得的小塊于減壓干燥器中80℃干燥至水含量為5％到9％的干燥塊。在步驟(vii)中，將上述步驟(vi)中獲得的干燥塊在研磨器中室溫研磨成含有所形成的具有不同大小的分散復合顆粒的磨碎物。這些復合顆粒都是由硫酸粘菌素微粒，生玉米淀粉(作為β-淀粉)的微粒以及α-淀粉的連續相的混合物或結合物所構成，并且都具有這樣的內部結構或安排，即硫酸粘菌素和生玉米淀粉(作為β-淀粉)的微粒均勻地分散在存在于每一復合顆粒中的α-淀粉所構成的連續相中。在步驟(viii)中，將從步驟(vii)中獲得的含有復合顆粒的研碎物用若干具有合適大小的網孔的篩子篩選。從而，可以回收那些大小在250微米到300微米的復合顆粒作為所需的粉狀組合物。該所需的含有大小在250微米到300微米范圍內復合顆粒的組合物是一按照本發明第一方面的含有硫酸粘菌素的新的穩定組合物的典型的配方，并且它將在下文作為試驗配方1。(2)待測配方的制備測定并計算出上述試驗配方1中硫酸粘菌素的濃度約為20％重量，將試驗配方1當合適數量的脫脂米糠按1∶1的重量比率混合從而使所得混合物中硫酸粘菌素的濃度稀釋成10％重量。這個試驗配方1和米糠的混合物作為試驗配方2。將40克的上述試驗配方2進一步和10千克市售的通常稱為“實驗用標準豬催肥劑(starter)(干混型)”的混合飼料混和，該混合飼料是由玉米粉，小麥粉，小麥麩，脫脂大豆粉，魚粉以及奶渣等作為必需組分而以維生素，鐵化合物，鎂化合物以及其它礦物質，氨基酸和調味劑作添加劑而構成的。這個由試驗配方2和該混合飼料一起簡單混合成的混合物中硫酸粘菌素濃度為40ppm且呈碎粉狀，它將作為下文中的試驗配方3。將此碎粉狀的試驗配方3用市售造粒機在120℃的蒸汽下壓制成顆粒狀從而使所得的顆粒狀混合飼料呈直徑為3毫米長為2-4毫米的柱形顆粒。該包含有與此相關聯的試驗配方1的顆粒狀飼料將在下文中作為試驗配方4。為了對比，通過將市售的硫酸粘菌素和脫脂米糠混合且用流化床使混合物成粒等制成含有40％重量的硫酸粘菌素的顆粒，制備一普通市售的含有硫酸粘菌素作為活性組份的顆粒狀組合物。該普通的硫酸粘菌素顆粒狀組合物只是簡單地和一合適量的米糠混合以便使所得混合物中硫酸粘菌素含量為10％重量，該所得混合物將在下文中作為試驗配方5(對比)。將40克試驗配方5(對比)進一步和10千克市售的與所謂的“實驗用標準豬催肥劑(干混型)”相同的混合飼料混合。所得的混合產物為粉漿狀且其中的硫酸粘菌素濃度為40ppm，它也將在下文中作為試驗配方6(對比)。用上述的同樣制粒方法將該粉漿狀的試驗配方6(對比)制成顆粒。從而制備出直徑3毫米長2-4毫米的柱形顆粒狀飼料且它也作為下文的試驗配方7(對比)。(3)測定試驗配方中硫酸粘菌素組分的穩定性的試驗步驟分別取100克粉漿狀的試驗配方3和顆粒狀的試驗配方4以及粉漿狀的試驗配方6(對比)和顆粒狀的試驗配方7(對比)置入不透氣的聚乙烯袋中，隨后加熱封口。將裝有試驗配方的密封袋分別放入三層牛皮紙袋中，然后封口。將這些包著裝在聚乙烯袋中的試驗配方的牛皮紙袋在相對濕度為75％且溫度為40℃的空氣中貯存4周。4周后，觀察發現沒有任何水份滲入聚乙烯袋中的試驗配方上。在貯存開始時，1周后，2周后，3周后以及4周后分別從每一聚乙烯袋中的試驗配方各取兩份20克的樣品。通過用吡啶和正己烷的混合液抽提所取的每份樣品從而使全部有活性的硫酸粘菌素從樣品中轉移到有機抽提液中再用高效液相色譜(HPLC)定量測定在有機抽提液中的活性硫酸粘菌素的含量的方法測定樣品中殘留硫酸粘菌素的濃度。如此測定的樣品殘留硫酸粘菌素的濃度的百分率是和試驗配方3和6中硫酸粘菌素的起始濃度(40ppm)比較計算而得的。并且，這樣計算出的百分率稱為硫酸粘菌素的“殘留百分率”且隨著試驗配方貯存時間的變化而記錄下來。對每一試驗配方來說，上述試驗均以雙份進行。如此而得的每一試驗配方的四個數據進行平均。該硫酸粘菌素的殘留百分率的平均值用于評估存在于試驗配方中的硫酸粘菌素的穩定性。(4)試驗結果如上述，測定所貯存的試驗配方中活性的硫酸粘菌素組份的殘留百分率并總結于如下表1a中。表1a參照上述表1a發現試驗配方4是這樣的產品，即是通過將混合飼料與前述試驗配方2混合物造粒生產的，試驗配方2由包含根據本發明第一方面穩定的硫酸粘菌素組份的復合顆粒所構成。還可以看出，試驗配方4在其4周的貯存期內其硫酸粘菌素組分的殘留百分率只出現了從第1周的83.8％到第4周的78.2％的較小的且可以允許的降低，從而表明盡管在試驗配方3于120℃下壓制成顆粒狀的試驗配方4的過程中該硫酸粘菌素組份有不同的降解條件，但在本發明的試驗配方1的復合顆粒中含有的并被混入試驗配方4中的硫酸粘菌素組份在一定的程度上是穩定的。相反，試驗配方7(對比)卻是這樣的產物即是將按照現有技術的含有磨碎硫酸粘菌素的試驗配方6(對比)制成顆粒狀生產的。可以發現經過4周的貯存，試驗配方7(對比)中的硫酸粘菌素殘留百分率出現了從第1周的69.8％到第4周的50.2％的相當大且不能允許的降低，從而表明在將粉漿狀試驗配方6(對比)在120℃下壓成顆粒狀的試驗配方7(對比)過程中及其在貯存過程中，顆粒狀的試驗配方7(對比)中的硫酸粘菌素組分均很可能降解和失活至極不合適的程度。觀察同為粉漿狀的試驗配方3和試驗配方6(對比)發現其中的硫酸粘菌素殘留百分率只是有從起始的100％到4周后97％的稍微降低。這可能是因為在制備這些粉漿狀的試驗配方的工序中以及在這些試驗配方于上述貯存條件下的貯存過程中試驗配方3和6中的硫酸粘菌素組分沒有發生實質性的降解。此外，作為一個參照，前述的作為一按照本發明的硫酸粘菌素的新的穩定組合物的典型范例配方的試驗配方1也在上述同樣的試驗步驟以及貯存條件下試驗以便檢測在該試驗配方1中硫酸粘菌素的穩定性。在其貯存過程中，同樣計算了試驗配方1中的硫酸粘菌素的殘留百分率，但這是基于試驗配方1中硫酸粘菌素的起始濃度(約為20％重量)上的。所得試驗結果總結于如下表1b中。表1b從上述表1b中可以清楚看出試驗配方1中的硫酸粘菌素組分完全穩定且在40℃貯存4周后也沒有實質的降解。實施例2重復實施例1的各步驟作為制備試驗配方并測定它們的穩定性的第二系列，將所獲得的試驗結果總結于如下表2中。表2關于上述表2，可以清楚看出能夠獲得和實施例1的表1a相似的研究結果。實施例3(1)按照本發明的含有硫酸粘菌素的新的穩定組合物的制備進一步的例子是通過下述的稍作改進的步驟(i)到(viii)的方法制造出和實施例1相似的且是按照本發明的硫酸粘菌素的新的穩定組合物在步驟(i)中，將市售的α-淀粉的干粉(20克)和水(100克)混合，攪拌所得混合物至α-淀粉溶于水成為α-淀粉的糊狀水溶液。在步驟(ii)中，將上述步驟(i)所得的α-淀粉的糊狀水溶液(共120克)和100克市售的硫酸粘菌素細粉(由硫酸粘菌素A和硫酸粘菌素B的混合物組成且其中硫酸粘菌素的含量重量為50％)混合，室溫下充分攪拌所得混合物直至硫酸粘菌素分散且有部分溶解于α-淀粉糊狀水溶液中并且整個混合物形成均一糊狀。在步驟(iii)中，將從上述步驟(ii)所得均一糊(共220克)和200克生玉米淀粉細粉(作為前述的β-淀粉)混合。在步驟(iv)中，在室溫下充分攪和從上述步驟(iii)中所得的混合物(共420克)直到該混合物捏和成一均勻的面團狀塊，其中的硫酸粘菌素和生玉米淀粉(作為β-淀粉)微粒均勻分散在該塊中α-淀粉所構成的糊狀、水合的且連續的相中。在步驟(v)中，用擠壓機和切割機將上述攪和步驟(iv)中所得的面團狀塊分割成大約為5毫米×5毫米×10毫米的合適尺寸的小塊。在步驟(vi)中，在干燥器中80℃減壓干燥從上述步驟(v)所得的小塊，使之成含水量為5％到9％的干燥塊。在步驟(vii)中，在研磨器中于室溫下將從步驟(vi)中所得的干燥塊研磨成磨碎物，其中包含所形成的分散復合顆粒且具有不同的顆粒大小。這些復合顆粒各自由硫酸粘菌素微粒，生玉米粉(作為β-淀粉)微粒以及α-淀粉的連續相所構成并且都有這樣的內部結構或排列即硫酸粘菌素和生玉米粉(作為β-淀粉)的微粒均勻分散于每一復合顆粒中α-淀粉所構成的連續相中。在步驟(viii)中，用若干具有合適大小網孔的篩子篩選從步驟(vii)中所得的含有復合顆粒的磨碎物。接著將大小從250微米到300微米范圍內的復合顆粒作為所需粉狀組合物回收。此含有顆粒大小在250微米到300微米范圍內的復合顆粒的所需組合物即是按照本發明的第一方面的含有硫酸粘菌素的新的穩定組合物的一個進一步的典型配方并將作為下文的試驗配方8。可以看出，除了此實施例3的步驟1中將市售的α-淀粉的干粉首先作為起始原料而在實施例1的步驟1中則是將磨碎的生淀粉即β-淀粉作為起始原料并通過水在95℃的水合作用將其膠化成α-淀粉外，上述實施例3中的從步驟(i)到(viii)均分別和前述的實施例1相同。(2)試驗配方的制備。將在實施例3的步驟(viii)中所得的試驗配方3用于制備不同的試驗配方。而這些不同的試驗配方的制備在此是用和前述的實施例1(2)中相同的方式進行。如此，測量并計算出試驗配方8中硫酸粘菌素濃度約為20％重量，并將該試驗配方8和一定量的脫脂米糠按重量比率約為1∶1混合從而使該所得混合物中硫酸粘菌素的濃度稀釋為10％重量。該試驗配方8和米糠的混合物將作為試驗配方9。將40克上述的試驗配方9的物質進一步和10千克市售的與實施例1(2)中相同的被稱為“實驗用標準豬催肥劑”(干粉型)的混合飼料混合。該通過將試驗配方9和所說的混合飼料簡單混合而成的產物混合物中的硫酸粘菌素濃度為40ppm且呈碎粉型，也將作為試驗配方10。然后將該碎粉狀的試驗配方10用市售的造粒機在120℃蒸汽壓下壓制成顆粒并使該顆粒狀的混合飼料呈直徑為3毫米，長為2-4毫米的柱形顆粒。這種含有與其相關聯的試驗配方8的顆粒狀混合飼料將在下文中作為試驗配方11。為了對比，制備并提供分別和實施例1(2)中試驗配方6(對比)及試驗配方7(對比)相同的粉漿狀試驗配方6及顆粒狀試驗配方7。(3)測定試驗配方中硫酸粘菌素穩定性的實驗步驟使用和實施例1(3)所述的相同的實驗步驟測試上述制備的各試驗配方中硫酸粘菌素的穩定性。如此，各取100克糊狀試驗配方10和顆粒狀試驗配方11以及糊狀試驗配方6(對比)和顆粒狀試驗配方7(對比)裝入不透氣的聚乙烯袋中，隨后熱封口。再分別將這密封袋包入和實施例1(3)中相同的牛皮紙袋內。在和實施例1(3)所述的相同的貯存條件下于40℃將如此包裝的試驗配方貯存4周。每隔一周從貯存的每一試驗配方中各取20克樣品。用和實施例1(3)中相同的方法測定所取的每一樣品的硫酸粘菌素殘留濃度。用和實施例1(3)中相同的方法計算并記錄在貯存期內試驗配方中硫酸粘菌素的“殘留百分率”。將所得試驗結果總結于下述表3中。表3從上述表3試驗結果可以看出和含有硫酸粘菌素微粒的試驗配方8的復合顆粒相關聯的顆粒狀試驗配方11中硫酸粘菌表的殘留百分率從貯在第1周的94.4％下降到第4周的76.9％。在40℃的4周貯存期該試驗配方11中硫酸粘菌素含量下降大約14％是可以允許的，這表明試驗配方11中硫酸粘菌素組分穩定到了一相當好的水準。相反，按照現有技術的顆粒狀試驗配方7(對比)中硫酸粘菌素的殘留百分率從貯存第1周的73.7％降到了第4周的48.5％。這個硫酸粘菌素的殘留百分率的值在4周貯存期后降低到48.5％表明該硫酸粘菌素組分降解和失活到了大約為起始硫酸粘菌濃度的一半的不能允許的程度。實施例4該實施例4闡明了組合在本發明的新的穩定組合物中的復合顆粒內的硫酸粘菌素，α-淀粉以及β-淀粉的相對比例如何影響按照本發明的含有硫酸粘菌素的新的穩定組合物中的硫酸粘菌素組分的穩定性。(1)按照本發明的含有硫酸粘菌素的穩定組合物的制備通過完成和實施例3(1)相似的步驟(i)到步驟(viii)制備出按照本發明的硫酸粘菌素的新的穩定組合物的進一步的幾個實例。然后在此實施例4中，改進步驟(i)，(iii)和(viii)，使在步驟(i)中將不同量(20克，50克，100克或200克)的市售α-淀粉的干粉溶解于100克水中，在步驟(iii)是將不同量(200克，150克，100克或0克)的粉碎的生玉米淀粉(作為β-淀粉)和一糊狀的α-淀粉的水溶液與100克市售的硫酸粘菌素(與實施例1所用相同)的混合物混合，而在步驟(viii)是從研碎物中回收顆粒大小在300微米到500微米范圍內的復合顆粒所構成的四種不同的粉末。這樣，從篩選步驟(viii)中獲得了本發明的新的穩定硫酸粘菌素組合物的試驗配方12，13及14三個進一步的實例。從這步驟(viii)中還獲得了“對比”試驗配方15。這四個試驗配方12-15是這樣的分別含有如下表4所示的不同比例的組成的產品。表4</tables>(2)試驗配方的制備將在上述的步驟(viii)中所得的試驗配方12到配方15分別和一定量的米糠以大約為1∶1或1∶1左右的重量比率混合從而使所得四種混合物中含有10％重量的硫酸粘菌素。以上所獲得的這四種混合物將分別作為16，17，18以及作為對比配方19。從試驗配方16-19中分別取40克并和10千克的市售混合飼料即實施例1(2)中所述的實驗用標準豬催肥劑作進一步的混合，然后用和實施例1(2)中相同的方法將漿狀的四種混合產物(硫酸粘菌素40ppm)制成顆粒狀。從而這便分別制成了均為顆粒狀的試驗配方20，21，22以及對比配方23。當然，上述的試驗配方20，21以及22是這樣的產物即是分別含有來源于表4的試驗配方12，13以及14的復合顆粒的產物。而所制的“對比”試驗配方23卻是含有來源于表4的試驗配方15(對比)的顆粒的產品。(3)檢測各試驗配方中硫酸粘菌素組分穩定性的實驗步驟。使用和實施例1(3)中相同的步驟檢測上述制備的試驗配方20-23中硫酸粘菌素組份的穩定性。如此，分別將100克顆粒狀的試驗配方20，21，22以及試驗配方23(對比)的組成物裝入不透氣的聚乙烯袋中，隨后熱封口。再將這些密封袋分別裝入和實施例1(3)中相同的牛皮紙袋中。在如實施例1(3)所述的相同的條件下于40℃將所包裝的試驗配方貯存2周。在2周貯存期內，每隔1周從該每一試驗配方中各取兩份各20克樣品。用如實施例1(3)的同樣方法檢測每一樣品中保留的硫酸粘菌素的殘留濃度。為了對比，也用上述同樣方法再次檢測了實施例1(2)中所提到的顆粒狀試驗配方7。用如實施例1(3)的同樣方法計算并記錄貯存期內試驗配方中硫酸粘菌素的“殘留百分率”。所得的試驗結果總結于下述表5中。表5</tables>從上述表5的結果中可以看出，使用表4中試驗配方15(對比)制備的試驗配方23(對比)在40℃貯存2周后，其中的硫酸粘菌素殘留百分率已經降到了65.4％的不能接受的水平，其中省去β-淀粉微粒而不加入到所用的硫酸粘菌素的試驗配方中。還可以發現，試驗配方20，21，22中的硫酸粘菌素組分成功地穩定在一切實可行的有益的程度。這意謂著按照本發明的硫酸粘菌素的穩定組合物優選地是那些硫酸粘菌素，α-淀粉及β-淀粉間的重量比率在1.0∶0.2-1.0∶1.0-2.0范圍內的組合物，這一點已在上述的表4的試驗配方12，13以及14得以證實。實施例5此例闡明了包含在硫酸粘菌素的穩定組合物中的復合顆粒的顆粒大小的不同分布如何影響按照發明的新的穩定硫酸粘菌素組合物中的硫酸粘菌素組分的穩定性。(1)按照本發明的含有硫酸粘菌素的新的穩定組合物的制備除了影響到篩選步驟(viii)從而使之能回收七種不同的如下述表6a所示的具有不同的顆粒大小分布的復合顆粒所構成的粉狀組合物外，可以通過重復上述實施例1(1)中的步驟(i)到(viii)制造出按照本發明的硫酸粘菌素的穩定組合物的幾個進一步的實例。所回收的這七個組合物分別作為試驗配方24，25，26，27，28，29以及30。表6a為了對比，取從實施例1，(2)中所得的通過用更多量的米糠將由流化床研磨碎的硫酸粘菌素粉末和米糠的混合物(含40％硫酸粘菌素)稀釋到硫酸粘菌素的濃度為10％重量而制成的試驗配方5(對比)。研磨并分別篩選此試驗配方5(對比)，得到顆粒大小在從150微米到500微米的粉末部分以及從250微米到710微米范圍內的粉末部分。將它們分別作為試驗配方31(對比)和試驗配方32(對比)。此試驗配方31和配方32具有如下表6b所示的不同顆粒大小分布。表6b(2)試驗配方的制備為了測定存在于其中的硫酸粘菌素的穩定性將上述制備的試驗配方24-32分別制成不同的試驗配方。其制備方法與實施例1(2)中的相同。如此，將每一試驗配方24-32分別和一定量的米糠按約為1∶1或1∶1左右重量比率混合從而使九種不同的混合物中硫酸粘菌素的濃度都稀釋成10％重量。各取40克所得的九種不同的混合物進一步和10千克的和實施例1(2)中使用的實驗用標準豬催肥劑(干混型)相同的混合飼料混合。用這種方法，制備出九種糊狀的含有40ppm硫酸粘菌素的不同飼料的組合物。再按實施例1(2)中方法將它們分別制成顆粒狀從而得到顆粒狀的九種不同的飼料組合物。(3)檢測硫酸粘菌素組分穩定性的實驗步驟通過采用和實施例1(3)中相同的方法測定所包裝并貯存于40℃2周的顆粒狀飼料組合物中硫酸粘菌素殘留百分率，檢測上述制得顆粒狀的九種不同飼料的組合物中硫酸粘菌素組分的穩定性。將所得的試驗結果制成如下的表7。表7從上述表7的試驗結果中可以看出含有由非按照本發明的顆粒大小在150到小于250微米范圍內的復合顆粒所構成的試驗配方25(對比)的顆粒狀飼料組合物中硫酸粘菌素的殘留百分率在貯存期內降到了不能允許的從第1周的79.9％到第2周的59.5％的低水平。實施例6本例闡述了按照本發明可以用大豆粉微粒作為復合顆粒的必需組分，而部分或完全替代β-淀粉組分微粒，并且還可以另外將一定量的羧甲基纖維素(CMC)組合于復合顆粒中。按照本發明的新的穩定硫酸粘菌素組合物的幾個進一步實例可以采用近似于實施例3的方法通過按與實施例3，(1)相同的方式進行實施例3的步驟(i)到(viii)制備，區別是將由在步驟(ii)中得到的硫酸粘菌素(100g)、α-淀粉(20g)和水的混合物構成的均勻糊與生玉米淀粉(作為β-淀粉)細粉和/或大豆粉細粉以表8所示的不同含量，有或沒有下表8中所示一定量的羧甲基纖維素(CMC)一起混合。在步驟(iii)中所得的六種不同的混合物分別在隨后的步驟(iv)中充分攪和成如下述表8所示的六種不同的均一且呈面團狀物。表8</tables>將表8所示的在步驟(iv)中所得的六種不同的面團狀塊物A，B，C，D，E和F分別經過步驟(v)，(vi)，(vii)和(viii)處理。從而獲得了六種不同的粉狀組合物，它們分別由含有5-9％重量水份的如表8所示各組分所組成的顆粒大小約為250微米到300微米的組合顆粒所構成。此六種含有復合顆粒的不同的組合物將分別作為試驗配方33，34，35，36，37以及38。(2)試驗配方的制備為了測定其中的硫酸粘菌素的穩定性，將如上述所制備的試驗配方33-38制成不同的試驗配方。其制備方法和實施例1，(2)中的相同。如此，將試驗配方33-38分別按約為1∶1或1∶1左右的重量比率和一定量的米糠混合以便使六種不同混合物中硫酸粘菌素的濃度稀釋到10％重量，各取40克所得的該六種不同的混合物和10千克的與實施例1(2)中采用的實驗用標準豬催肥劑(干混型)相同的混合飼料進一步作混合。通過此法，制備出其中硫酸粘菌素濃度為40ppm的六種不同的糊狀飼料組合物。再采用和實施例1(2)中相同的方法將它們分別制成顆粒從而獲得六種不同的顆粒狀飼料組合物。(3)測定硫酸粘菌素組分穩定性的試驗步驟.采用和實施例1(3)中相同的方法通過測定包裝并貯存于40℃2周的顆粒狀飼料組合物中硫酸粘菌劑殘留百分率，測定上述所制的六種不同的顆粒狀飼料組合物中硫酸粘菌素組分的穩定性。將所得的試驗結果總結于下述表9中。表9</tables>從上述表9的試驗結果中可以看出，含有試驗配方36(以表8中的面團塊D制成)的且其硫酸粘菌素復合顆粒中含有大豆粉微粒卻沒有β-淀粉微粒的顆粒狀飼料組合物在貯存2周后其中的硫酸粘菌素殘留百分率保持在79.5％即約為80％的可以接受的水平。這意謂著即使大豆粉微粒完全代替β-淀粉微粒而作為按照本發明的硫酸粘菌素復合顆粒中的成份，硫酸粘菌組分也能穩定在一個有益的程度。而且還可以發現，表8中從上述實施例6(1)的步驟(iv)中所得的含有大豆粉的面團狀塊B，C和D比以β-淀粉代替大豆粉的面團塊A，E和F具有更高的粘度或稠度。在步驟(vi)中，由面團狀塊B，C或D所構成的小塊也比由面團狀塊A，E或F構成的小塊能更快地脫水至5-9％的水重量。在按照本發明的含有硫酸粘菌素作為活性成份的新的穩定組合物中，其硫酸粘菌素組份是穩定的而不降解或失活至一不能接受的低水平。按照本發明的硫酸粘菌素的穩定組合物可用于和將在熱壓下制成顆粒狀的糊狀的混合飼料混合。即使在長期的貯存后，所得的顆粒狀混合飼料組合物仍能維持其抗菌活性。權利要求1.一種粉狀或顆粒狀的含有硫酸粘菌素作為活性組分的穩定組合物，其特征在于所述粉狀形式的組合物是由含有1份重量的硫酸粘菌素，0.1到3份重量的α-淀粉以及0.5到5.0份重量的β-淀粉或者大豆粉或者β-淀粉和大豆粉的混合物的混合物所構成的分散復合顆粒所組成的，且其中含水量為不超過該混合物重量的12％，此外，由該混合物所構成的分散復合顆粒的大小在250微米到750微粒的范圍內且每一分散的復合顆粒均有這樣的內部結構即作為單獨微粒存在的硫酸粘菌素以及β-淀粉和/或者大豆粉都均勻分散在該混合物的單個復合顆粒中的由α-淀粉所構成的連續相或基質中從而使幾乎所有的硫酸粘菌素以及β-淀粉和/或大豆粉微粒均包埋于α-淀粉所構成的連續相或基質中，若需要，可通過將該混合物的分散的復合顆粒壓制成顆粒狀從而使其該穩定組合物呈顆粒狀。2.如權利要求1所要求的穩定組合物，其中組合物中分散復合顆粒是由1份重量的硫酸粘菌素，0.2到2份重量的α-淀粉以及1到2份重量的β-淀粉或大豆粉或β-淀粉和大豆粉的混合物的混合物所構成的，且其含水量為不超過該混合物重量的12％。3.如權利要求1或者2中所要求的穩定組合物，其中的復合顆粒是由硫酸粘菌素，α-淀粉以及β-淀粉以在1.0∶0.2-2.0∶1.0-2.0，優選地在1.0∶0.2-1.0∶1.0-2.0的范圍的重量比率所組成的混合物構成的。4.如權利要求1所要求的穩定組合物，其中的硫酸粘菌素為硫酸粘菌素A或是由硫酸粘菌素A和硫酸粘菌素B所組成的混合物。5.如權利要求1所要求的穩定組合物，其中每一復合顆粒都含有10-50％重量的硫酸粘菌素。6.如權利要求1所要求的穩定組合物，其中的復合顆粒含水量為構成該復合顆粒的混合物重量的3％到10％。7.如權利要求1所要求的穩定組合物，其中的復合顆粒大小在350微米到500微米范圍內。8.一種制備含有硫酸粘菌素作為活性組份的穩定組合物的方法，該組合物是由作為活性成份的硫酸粘菌素，α-淀粉以及β-淀粉和/或大豆粉所構成的混合物的分散復合顆粒所組成的粉狀，且其中的硫酸粘菌素以及β-淀粉和/或大豆粉微粒均勻分布在該混合物單個復合顆粒中由α-淀粉所構成的連續相或基質中，其特征在于含有如下步驟(a)將1份重量的硫酸粘菌素精細顆粒和0.1-3份重量的α-淀粉的糊狀水溶液混合，攪拌所得混合物直到硫酸粘菌素顆粒良好分散且部分溶解于α-淀粉的糊狀水溶液中從而使所得混合物呈均勻糊狀，(b)將所得的由硫酸粘菌素，α-淀粉和水的混合物所構成的均勻糊和0.5-5份重量的β-淀粉微粒和/或大豆粉微粒混合，(c)攪和所得的硫酸粘菌素，α-淀粉，水以及β-淀粉和/或大豆粉的混合物直到該混合物成一均勻面團狀塊，其中的硫酸粘菌素微粒以及β-淀粉和/或者大豆粉微粒均勻分散在該塊中α-淀粉所構成的水合的連續相或基質中，(d)將所得均勻面團狀物分割成小塊，(e)將所得小塊干燥至水含量為該小塊重量的10％，(f)將所干燥的小塊研磨成含有所形成分散的復合顆粒且具有不同大小的研磨碎物，且每一復合顆粒是用硫酸粘菌素，α-淀粉以及β-淀粉和/或大豆粉的混合物所構成的且都有這樣的內部結構即硫酸粘菌素微粒以及β-淀粉和/或大豆粉微粒均勻分布于該復合顆粒中的α-淀粉所構成的連續相或基質中從而使幾乎所有的硫酸粘菌素以及β-淀粉和/或大豆粉的微粒都包埋于由該不同大小的復合顆粒中的α-淀粉構成的連續相或基質內，(g)篩選并回收上述磨碎物中包含大小在250微米到750微米范圍內的復合顆粒的粉料，(h)若需要，再將步驟(g)中所得的粉料壓制成顆粒狀。全文摘要提供一種含有硫酸粘菌素作為活性成分的新的穩定組合物，是由分散于α-淀粉連續相中的硫酸粘菌素微粒以及β-淀粉和/或大豆粉微粒的混合物構成并以具有特定顆粒尺寸范圍的復合顆粒形式存在。即使將組合物與混合飼料混合，接著在熱水蒸汽下于120℃高溫壓成顆粒狀，組合物中的硫酸粘菌素組分被穩定到不會降解和失活至不可接受的低水平。文檔編號A23K1/17GK1153457SQ94195138公開日1997年7月2日申請日期1994年6月29日優先權日1994年6月29日發明者中田敏行,高岡登,飯冢真基,岡部善明,木下統晴,小松良男,永里敏秋申請人:明治制果株式會社