專利名稱:一種食用菌液體培養方法
一種食用菌液體培養方法。
本發明涉及一種好氣菌液體培養方法，特別是一種改進了通氣發酵方法的食用菌液體培養方法。
目前多種好氣菌生產，特別是食用菌生產栽培用菌種的獲得，普遍采用多級固體擴大培養方法，但該方法操作繁瑣，勞動強度大，培養時間長達20-25天，菌齡不一致且易衰老，生產成本也相當高昂。近年來已開始將工業發酵液體培養好氣菌的方法，使用到食用菌栽培播種用菌種的獲得。用液體菌種栽培平菇、鳳尾菇、金頂蘑等已能使出菇時間大為縮短。與固體菌種相比，液體菌種具有接種方便、菌齡較一致以及生長較快等優點。但是，培養液體菌種需設備投資多，技術要求高。用量不太大的液體菌種可以用搖床來生產，瓶中液體菌種量只能占容量的五分之一。若要獲得大量液體菌種，還必須使用發酵罐，對比文獻甲提供了這種食用菌培養方法的工藝流程和裝置(見附圖一)，投資額都在幾十萬元到幾百萬元以上。廠小不僅產值少，而且效率也低，加之食用菌栽培具季節性，即使大型液體培養菌種工廠，經濟效益也不佳。并且，一罐菌種在幾噸以上，生產一旦不慎，菌種就會污染變質。日本、西歐的食用菌產量都很大，發酵技術也先進，但至今并未建有大規模生產液體食用菌菌種的工廠。對比文獻乙提供了一種小型發酵裝置，全套裝置包括無油氣體壓縮機、氣水分離器、空氣過濾器和發酵瓶等部件組成。空氣過濾介質選用新型的特制維尼綸棉花，裝填密度為250公斤每平方米。這種小型發酵裝置價格一千六百至二千元，無需蒸汽鍋爐和攪拌機，每天動力消耗僅三、四度電。本發明介紹了一種更為小型方便、效率高、造價低的食用菌液體培養方法及裝置。
本發明的目的是改進食用菌液體培養中的通氣發酵方法，簡化培養裝置，有效地避免雜菌污染和提高產量，從而大為降低生產成本。
本發明的技術特征是1，通氣過濾發酵裝置和注入發酵瓶內的培養液經常規滅菌處理后，進行無菌操作而聯結成多級密封管道系統;2，采用滅菌棉花球過濾的小氣量深層通氣攪拌。
下面結合附圖詳細敘述本發明的實施技術方案附圖二為合乎發明主題的工藝流程示意圖;
附圖三為合乎發明主題的裝置示意圖。
參照附圖三，按已知配方配制好培養液，并灌注入發酵用玻璃瓶〔1〕、〔2〕、〔3〕(容量可以為0.5、5、10、15升)，使培養液占據發酵瓶容積的五分之一以上，最佳為十分之七。瓶口安上打有穿過進、排氣及采樣玻璃管用孔的橡皮塞〔4〕、〔5〕、〔6〕。帶有球形膨大內腔的進、排氣用玻璃管〔7〕、〔8〕、〔9〕、〔10〕、〔11〕、〔12〕、〔13〕、〔14〕，并在球形內腔內以1.2-1.5克/立方厘米的密度，均勻充填滿普通未脫脂的潔凈棉花。供抽樣檢驗和擴大培養時級間密封連通的玻璃或金屬質分叉多通管〔14〕、〔15〕、〔16〕、〔17〕和優質橡皮管及必要時起啟閉作用的管夾〔18〕、〔19〕、〔20〕、〔21〕、〔22〕、〔23〕、〔24〕、〔25〕、〔26〕、〔27〕、〔28〕。將上述〔1〕-〔28〕裝置及培養液作常規滅菌處理，然后在火焰上作無菌操作至少應關閉〔22〕、〔24〕、〔28〕處的前提下，聯結成如附圖三所示的多級密封管道系統。
為了使培養液中的菌種處于所要求的最佳生長溫度，將盛有培養液的發酵瓶置于能進行溫度控制的環境中進行培養，本實施方案中具體采用了一個能調溫的發酵箱。該發酵箱為夾層中充填有類似于干木屑等保溫材料的雙層箱或外表面粘貼有類似于發泡硬塑料板等保溫層的單層箱，箱的內表面鋪墊有均勻縫固于織物中的電熱絲作熱源，箱內裝有控溫用雙金屬片和氖泡等實施溫度的調節控制。
進行無菌操作，將選定的固體斜面菌種接種到第一級發酵瓶〔1〕的培養液中，關閉〔19〕、〔20〕、〔22〕、〔23〕處，開通〔18〕、〔21〕處，調節發酵箱內的溫度，使培養液中的菌種處于要求的最佳生長溫度下，靜止培養1-2天后，啟動小氣量通氣裝置〔29〕，這種裝置可以是利用電磁作用、根據機械原理來實現吸、排氣功能的電磁泵，以發酵瓶中每升培養液獲得0.1-0.3升/分的小氣流量，使空氣沿進氣管〔7〕、〔8〕，經滅菌處理的棉花球過濾后、送入培養液底部不超過1厘米處，進行小氣量通氣攪拌培養5-7天，見瓶內培養液中出現0.5-1毫米直徑的菌絲球時，并根據需要從取樣口〔22〕處取樣檢驗，證實符合要求時，即告完成了一級培養。若需第二級擴大培養時，關閉〔21〕、〔22〕及〔26〕，開通〔23〕，然后啟動〔29〕將第一級已培養好的菌種沿封密管道壓流至第二級發酵瓶〔2〕中，接著關閉〔18〕，開通〔19〕，啟動〔29〕用上述相同的通氣發酵方法通氣培養1-2天，即可完成二級液體菌種的培養。若所得的數量仍不夠的話，可依上述方法，使逐級發酵瓶中培養液的數量，后級比前級增多，最佳為1∶10地擴大數量，進行多級擴大培養，直至生產或科研所需的液體菌種量得到滿足為止。
本發明成功地應用于江蘇省丹陽食用菌研究所提供的香菇2株、蘑菇1株、平菇5株、銀耳1株、靈芝1株、猴頭1株、滑菇1株、金針菇1株、鳳尾菇1株、榆黃菇1株、黑木耳1株等17株菌種的液體菌種培養，均獲得了具有豐富菌絲球的液體菌種，并使用于生、熟料生產栽培，大多數培育出健壯的子實體;本發明還完成了蘇云金桿菌等藥用菌的液體菌種培養試驗。由于本發明簡便易行，所需裝置小型便攜，也適合在野外采集、分離蟲草、竹蓀、松茸等野生菌種，進行培養栽培。因此，本發明名為一種食用菌液體培養方法，實際上也可以使用于蘇云金桿菌等藥用好氣菌和蟲草、竹蓀、松茸等野生菌的菌種培養和分離。由于本發明革除了通常好氣菌、特別是食用菌液體培養方法中必須的搖瓶培養工序，因此一方面省去了對比文獻甲中價格可觀的搖床等裝置，從而大為降低了成本;另一方面，本發明中注入培養液數量占所盛發酵瓶容量的五分之一以上，可以增加至十分之七，從而使發酵瓶等設備利用率提高三倍以上。還由于本發明中采用了小氣量通氣裝置，具體裝置可以是電磁泵為主的一套通氣方法及裝置，與對比文獻乙中的小型發酵裝置相比，替代了價格高得多的無油氣體壓縮機、氣水分離器等通氣裝置，每日電耗也由3-4度降至0.1-0.3度。這一方面進一步降低了成本，使合乎本發明主題的裝置造價在一百多元，約合對比文獻乙中小型發酵裝置造價的十五分之一還低;另一方面是使本發明更為小型方便，從而便于推廣實用。若配套采用小型壓力消毒鍋、塑料薄膜折疊活動無菌操作箱，則可根據使用目的不同，做成專業戶用簡易型、野外科研用便攜型、醫藥科研用精密型等商品化液體菌種培養裝置。
本發明的實施例之一昆研平一841少孢子平菇液體菌種的培養。菌種由丹陽縣食用菌研究所從昆明食用菌研究所引入。實施裝置(1)。發酵瓶0.5升1只、5升1只、10升或15升4只;上述玻璃發酵瓶相應地配有打好3個直徑1厘米圓孔的橡皮塞子;(2).發酵箱內箱體積為40厘米×40厘米×50厘米，內壁鋪墊縫固于布上的長10米、線徑0.1毫米、電阻率100歐姆/米的電熱絲，內、外箱壁均用普通市售纖維板裁成，并用鉸鏈聯結，內外箱塑間充填數厘米厚的干木屑，采用市售雙金屬片和氖泡作控溫元件及指示燈;(3).小氣量通氣裝置采用空載氣流量大于1.5升/分的、市售電磁泵;(4).通氣過濾管道帶有球徑1.5厘米或2.3厘米球形內腔的、外管徑1厘米的玻璃管16根，并在球形內腔中以約1.4克/立方厘米的密度充填普通未脫脂潔凈棉花;(5).聯結用管徑均為1厘米的三叉多通玻璃管5根、六叉多通玻璃管2根、長度合適的玻璃管5根;(6).連接并作啟閉作用的管徑1厘米的優質膠皮管12段，與之相配用的金屬質管夾12只。實施方法(一).配制培養液40公斤，灌注入各發酵瓶，約占容積的十分之七;(二).將上述實施裝置(1)、(4)、(5)、(6)及已灌入的培養液，置于72厘米×72厘米×110厘米的臥式圓形高壓蒸氣消毒鍋內，經1.2公斤/平方厘米、30分鐘的滅菌處理;(三).參照圖三，將上述滅菌處理的裝置和裝置(3)，在高約10厘米，圓徑約2厘米的酒精火焰上部，聯結成密閉的連續式培養裝置;(四).在塑料薄膜折疊活動無菌操作箱內，從試管固體斜面母種中接種0.5厘米×1厘米的菌種4塊于第一級0.5升的發酵瓶內的培養液中;(五).調節發酵箱中的雙金屬片控溫元件，使箱內溫度恒定在菌種所要求的溫度，以使放入箱中的第一級培養液中液體菌種維持在26±2℃的最佳生長條件下，靜止培養1-2天;(六).啟動電磁泵，以通氣量1升/分的速率向培養液底部不超過1厘米處通氣攪拌培養一周時間，箱內溫度同上，待眼見0.5-1厘米直徑的菌絲球充滿培養液為止;(七).從第一級0.5升發酵瓶的取樣口抽取菌種液，用肉眼平皿稀釋計數法檢驗每毫升見500個以上菌絲球，則認為第一級液體菌種已培養好;(八).啟動電磁泵，利用壓力將第一級發酵瓶內的菌種液沿密封管道壓入第二級5升的發酵瓶，與瓶內的培養液混合，維持箱內溫度26±2℃，以1升/分的通氣速率通氣攪拌培養2天，用上述相同的檢驗方法抽樣檢驗認為符合要求后，即認為第二級3.5升液體菌種已培養好;(九).采用上述同樣的方法，經2天、26±2℃的通氣培養得到第三級4只10或者15升發酵瓶中約30多公斤液體菌種。
實施例之二蘇云金桿菌-以色列變種血清型H-14液體菌種培養。菌種由山東生物制品研究所引入。培養裝置同實施例之一;實施方案除培養時最佳生長溫度為27±2℃外，均同實施例之一;試驗效果經多項生化檢驗均符合該菌各種特性要求。將培養好的菌液噴霧于平菇上滋生的紅色菇蛆蟲體上，20分鐘后90%以上死亡，次日未見存活。
對比文獻甲，淺淡液體菌種 上海市工業微生物研究所 馮立才 《食用菌》雜志 1983年第6期乙，食用菇的深層發酵 上海師范大學 楊慶堯 《中國食用菌》雜志 1985年第4期
權利要求
1.一種在發酵裝置中進行通氣攪拌培養菌種的食用菌液體培養方法，本發明的特征是通氣過濾、發酵裝置和注入發酵瓶內的培養液，經常規滅菌處理后，進行無菌操作聯結成多級密封管道系統，并采用滅菌棉花球過濾的小氣量深層通氣攪拌。
2.按權利要求
1規定的方法，其特征是注入培養液數量占所盛發酵瓶容量的五分之一以上，最佳為十分之七。
3.按權利要求
1、2規定的方法，其特征是逐級發酵瓶中培養液的數量，后級比前級增多，最佳為1∶10地擴大數量。
4.按權利要求
1規定的方法，其特征是按發酵瓶中每升培養液獲得0.1-0.3升/分的小氣流量，向培養液中離瓶底部不超過1厘米處通氣攪拌。
5.按權利要求
1、4規定的方法，其特征是用于小氣量深層通氣攪拌的通氣裝置，可以利用電磁作用，根據機械原理來實現吸、排氣功能的電磁泵。
6.按權利要求
1、4規定的方法，其特征是所說的滅菌棉花球過濾為以1.2-1.5克/立方厘米密度充填于進、排氣管球形膨大內腔的普通未脫脂潔凈棉花。
7.按權利要求
1規定的方法，其特征在于盛有培養液的發酵瓶可置于能進行溫度控制的環境中進行培養，本發明是用一種能調溫的發酵箱來實現。
8.按權利要求
7所述的發酵箱，其特征是夾層中充填有類似于干木屑等保溫材料的雙層箱或外表面粘貼有類似于發泡硬塑料板等保溫層的單層箱，箱內表面鋪墊有均勻縫固于織物中的電熱絲作熱源，箱內裝有控溫用雙金屬片和氖泡等以實現箱內溫度的調節控制。
9.按權利要求
1規定的方法，其特征在于也可以將此方法使用于蘇云金桿菌等藥用好氣菌和蟲草、竹蓀、松茸等野生菌的菌種培養和分離。
專利摘要
本發明涉及一種好氣菌液體培養方法，特別是一種改進了通氣發酵方法的食用菌培養方法。由于本發明采用了多級密封管道系統和滅菌棉花球過濾的小氣量深層通氣攪拌，革除了搖床，替代了空氣壓縮機等，從而大為降低了生產成本和提高了產量。本發明簡便易行，所需裝置小型便攜，不僅適合專業戶培養菌種，也適合科研單位實驗室和野外培養分離菌種使用，也可以應用于其他好氣菌，如醫用菌的液體菌種培養。
文檔編號A01G1/04GK86102421SQ86102421
公開日1987年10月21日 申請日期1986年4月10日
發明者余兆豐 申請人:余兆豐導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan