一種快速繁殖蘋果砧木SH6的方法與流程

本發明屬于植物的組織培養領域，具體涉及一種快速繁殖蘋果砧木SH6的方法。
背景技術：
：蘋果矮砧栽培方式長期以來受到國際上高度重視，歐美等大多數國家90％以上蘋果栽培采用矮砧栽培方式，矮砧栽培也是今后我國蘋果生產的發展方向。SH6是我國培育出的蘋果矮化砧木，具有抗逆性強、結果早、產量高和品質優等特點，由于它自生根難等問題，在包括北京在內的我國主要蘋果產區仍以矮化中間砧方式種植。采用植物組織培養技術可以在短時間內獲得大量的組培苗，目前在花卉等物種已獲得較多的實際應用成功案例，由于其具有不受時間和外界環境條件控制、節約土地、快捷高效的優點，已成為廣泛應用的一種育苗手段，有助于實現規模化生產。但現有技術中，蘋果矮化砧木品種SH6組培苗繼代培養增殖系數低，不定根發生困難，大田移栽成活率較低，限制了其在組培工廠化育苗中的應用。技術實現要素：針對蘋果矮化砧木品種SH6組培中存在的增殖系數低、不定根發生困難、大田移栽成活率低的現狀，本發明提供一種快速繁殖蘋果砧木SH6的方法，包括如下步驟：1)初代和繼代培養：將蘋果砧木SH6經滅菌消毒的含單個的葉芽莖段以初代培養基和繼代培養基先后進行初代培養和擴繁繼代培養；2)生根培養：切取步驟1)培養后的含單芽的莖段，接種到生根培養基上進行生根培養；3)煉苗和大田移栽：生根培養的組培苗根長達到2～3厘米時，進行煉苗和大田移栽；所述初代培養基是以MS固體培養基為基本培養基，含有6-芐氨基嘌呤的濃度為0.1～0.8mg/L、吲哚丁酸的濃度為0.1～0.6mg/L、聚乙烯吡咯烷酮濃度為200～400mg/L、蔗糖的濃度為25～30g/L、瓊脂糖的濃度為5～7g/L的培養基；所述繼代培養基是以MS固體培養基為基本培養基，含有6-芐氨基嘌呤的濃度為0.1～0.8mg/L、吲哚丁酸的濃度為0.1～0.6mg/L、蔗糖的濃度為25～30g/L、瓊脂糖的濃度為5～7g/L的培養基；所述生根培養基是以1/2MS固體培養基為基本培養基，含有吲哚丁酸的濃度為0.1～1.2mg/L、蔗糖的濃度為15～25g/L、瓊脂糖的濃度為5～7g/L的培養基。其中，所述初代培養基，聚乙烯吡咯烷酮濃度優選為400mg/L。其中，所述生根培養基，吲哚丁酸的濃度優選為0.5～1.0mg/L，更優選為0.7～0.9mg/L，進一步優選為0.7～0.8mg/L，最優選為0.8mg/L。其中，步驟1)所述滅菌消毒，具體方法為：以水沖洗30分鐘，體積百分濃度70％的酒精消毒10～60秒，無菌水沖洗2～4次，質量百分濃度0.1％的升汞消毒3～10分鐘，無菌水沖洗2～4次。其中，所述初代培養和擴繁繼代培養，培養條件為，溫度20-28℃，濕度55-75％，光照14～18小時/天，光照強度1800-2200Lx。其中，所述生根培養，分為兩個階段：暗培養階段：6～12天，溫度18-26℃，濕度55-75％；光培養階段：6～10天，溫度18-26℃，濕度55-75％，光照16～20小時/天，光照強度1800-2200Lx。其中，所述煉苗，為在溫室大棚內閉瓶煉苗3天，開瓶煉苗3天。其中，所述大田移栽，為洗去生根組培苗的培養基，采用質量百 分濃度0.2％的多菌靈進行根部消毒，移栽入泥炭：珍珠巖：蛭石體積比為1：1：1的基質中，待根系發育完全后移栽到大田。本發明還提供所述的快速繁殖蘋果砧木SH6的方法，在蘋果繁育中的應用。本發明的有益效果在于：本發明可以實現蘋果矮化砧木SH6的組培快速繁殖，繼代培養周期25天時，增值系數達到8～10倍，生根時間不長于15天，生根率達到90％以上，煉苗馴化后大田移栽成活率大于85％，為蘋果矮化砧木品種SH6組培工廠化繁育提供簡單快捷高效的技術方法。附圖說明圖1是實施例1中蘋果矮化砧木SH6繼代培養照片；圖2是實施例1中蘋果矮化砧木SH6生根培養瓶底照片；圖3是實施例1中蘋果矮化砧木SH6生根苗照片；圖4是實施例1中蘋果矮化砧木SH6組培生根苗穴盤生長照片。具體實施方式以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。在不背離本發明精神和實質的情況下，對本發明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發明的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段。實施例1在北京市順義區楊鎮蘋果組織培養實驗室試驗了本發明的方法，建立蘋果矮化砧木無菌系，進行繼代培養和生根培養，生根組培苗經馴化后進行了大田移栽，具體如下：1)蘋果矮化砧木SH6無菌系的建立選擇蘋果矮化砧木SH6的單株營養枝，剪取帶頂芽或側芽的莖段，外植體消毒用自來水沖洗30分鐘，70％酒精消毒10～60s，無菌 水沖洗2～4次，0.1％升汞消毒3～10分鐘，無菌水沖洗2～4次。進行初代培養，培養條件為：溫度20-28℃，濕度55-75％，光照14～18小時/天，光照強度1800-2200Lx。篩選聚乙烯吡咯烷酮濃度(PVP-40)濃度，在MS+6-BA0.4mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂糖5g/L的培養基上設置PVP-40的濃度為0mg/L、200mg/L、400mg/L、600mg/L、800mg/L、1000mg/L，結果如表1所示：表1PVP-40濃度對褐化率的抑制作用PVP-40濃度(mg/L)污染率(％)褐化率(％)成活率(％)032.65±1.3691.03±1.9426.87±1.5620035.32±2.6536.37±2.8433.18±2.4140034.41±2.0721.68±1.8341.36±2.0460036.85±1.6741.83±2.3730.25±1.9880037.16±1.8363.85±3.0429.41±2.31100033.82±2.1789.73±2.5727.21±2.09由表1可以看到褐化率在PVP-40200～400mg/L時能得到很好的抑制，尤其是PVP-40400mg/L時，褐化率僅為(21.68±1.83)％最終根據篩選結果，初代培養采用的培養基為MS+6-BA0.1～0.8mg/L+IBA0.1～0.6mg/L+PVP-40200～400mg/L+蔗糖25～30g/L+瓊脂糖5～7g/L的培養基(即以MS固體培養基為基本培養基，含有6-芐氨基嘌呤的濃度為0.1～0.8mg/L、吲哚丁酸的濃度為0.1～0.6mg/L、聚乙烯吡咯烷酮濃度為200～400mg/L、蔗糖的濃度為25～30g/L、瓊脂糖的濃度為5～7g/L的培養基)2)蘋果矮化砧木SH6的擴繁繼代培養初代培養后30天進行繼代培養，蘋果矮化砧木SH6的初代培養試驗材料，采用培養基為MS+6-BA0.1～0.8mg/L+IBA0.1～0.6mg/L+蔗糖25～30g/L+瓊脂糖5～7g/L的培養基進行繼代培養(見圖1)，培養條件為：溫度20-28℃，濕度55-75％，光照14～18小時/天，光照強度1800-2200Lx，進行快速增殖；繼代培養30～35天后就可以進行 生根培養；3)蘋果矮化砧木SH6的生根培養篩選吲哚丁酸(IBA)濃度，在1/2MS固體培養基上分別添加0mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L……1.2mg/L的吲哚丁酸，其對生根率的影響如表2所示。表2IBA濃度對生根培養的影響結果表明，在培養基上添加0.1～1.2mg/L的吲哚丁酸相比不添加能提高生根率，尤其是吲哚丁酸的濃度為0.5～1.0mg/L時生根率能達到55％以上，吲哚丁酸的濃度為0.7～0.9mg/L時生根率達到80％以上，吲哚丁酸的濃度為0.7～0.8mg/L時生根率高達85％以上，當吲哚丁酸的濃度為0.8mg/L時生根率最高。因此，蘋果矮化砧木SH6的生根培養的具體步驟為將蘋果矮化砧木SH6的繼代培養材料切分為單芽，采用培養基為1/2MS+IBA0.1～1.2mg/L+蔗糖15～25g/L+瓊脂糖5～7g/L的培養基(即以1/2MS固體培養基為基本培養基，含有吲哚丁酸的濃度為0.1～1.2mg/L、蔗糖的濃度為15～25g/L、瓊脂糖的濃度為5～7g/L的培養基)進行生根 培養(見圖2、圖3)，分為兩個階段，暗培養階段：6～12天，溫度18-26℃，濕度55-75％，光培養階段：6～10天，溫度18-26℃，濕度55-75％，光照16～20小時/天，光照強度1800-2200Lx。4)蘋果矮化砧木SH6生根苗的煉苗和大田移栽生根培養的蘋果矮化砧木SH6組培苗根長達到2～3厘米時，移至溫室大棚閉瓶煉苗3天，開瓶煉苗3天，然后取出瓶內生根組培苗，洗去培養基，采用0.2％多菌靈進行根部消毒處理，移栽入穴盤中(見圖4)，穴盤填充基質為泥炭：珍珠巖：蛭石(1：1：1)混合物，待根系發育完全后移栽到大田。以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本
技術領域：
的普通技術人員來說，在不脫離本發明技術原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。當前第1頁1 2 3