一種地椒快速增殖的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種地椒快速增殖的方法，包括取單核靠邊期的花藥進(jìn)行消毒處理；接種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)獲得愈傷組織；繼代增殖培養(yǎng)，將不污染的愈傷組織轉(zhuǎn)入第一繼代培養(yǎng)基中使芽增殖，繼代4次，轉(zhuǎn)入第二繼代培養(yǎng)基或不添加任何激素的空白培養(yǎng)基中繼代一次，然后再轉(zhuǎn)入第一繼代培養(yǎng)基中繼續(xù)增殖，根據(jù)需苗量重復(fù)上述步驟；接種生根培養(yǎng)基，篩選獲得單體植株。本發(fā)明的培養(yǎng)結(jié)果為：愈傷組織的誘導(dǎo)率達(dá)到89％，生根率達(dá)到85％，移栽成活率達(dá)到80％，10代變異率在6％以下。
【專利說明】一種地椒快速增殖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及組織培養(yǎng)技術(shù)，具體涉及一種地椒快速增殖的方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 地椒，又名地花椒（《海上名方》），百里香（《植物學(xué)大辭典》），山椒（《中國藥植 圖鑒》），山胡椒（《遼寧經(jīng)濟(jì)植物志》）。為唇形科植物。主要分布于內(nèi)蒙、寧夏、青海、山西 等地。在中藥應(yīng)用中可以祛風(fēng)解表，行氣止痛，用于感冒、頭痛、牙痛、腹脹冷痛。
[0003] 地椒全株具有濃郁香味，采幾片葉子，在手中揉搓，就可發(fā)出淡淡的芳香，香氣溫 和可人。芳香油占莖梢和葉的3%，主要成分有芳香樟醇、龍腦、對一聚傘花素、麝香草酚、胺 油醇、單寧蒜、皂角苷、苦味物質(zhì)和各種礦物質(zhì)，其中鉀、鈣含量較高。具有良好的美容、保僵 防腐、殺菌、幫助消化、解酒、利尿、抗風(fēng)濕等作用，其特別之處是可強(qiáng)化免疫系統(tǒng)。因此地椒 具有十分重要的藥用價值。地椒的藥用價值早在《本草綱目》中就有記載。在前蘇聯(lián)的醫(yī) 學(xué)研究中，對其葉花的防腐殺菌特性也有記載。近年來，已將百里香屬植物的化學(xué)成分用 于醫(yī)療、保健、化妝、食品，其開發(fā)利用的潛在價值日趨明顯。目前，地椒大多是野生的， 未得到充分利用。
[0004] 地椒可以播種、扦插、壓條、分株法繁殖，除了夏季之外，都很適合繁殖。但是這 些繁殖方法速度較慢，難以達(dá)到快速增殖的目的。為發(fā)掘其藥用價值，用組培快速繁殖 方法于短期內(nèi)獲得大量無菌苗以供提取有效藥用成分的前景是可能的。"地椒的組織培 養(yǎng)及植株再生"（趙慶臻，植物生理學(xué)通訊，第38卷第4期，2002年8月）一文中公開 了用帶腋芽的嫩莖段作為無性繁殖的材料進(jìn)行組織培養(yǎng)來快速獲得地椒植株的方法， "地椒組織培養(yǎng)及防止玻璃化研究"（徐美隆，安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，Journal of Anhui Agri. Sci. 2009, 37(1) :114-116) -文中也公開了帶腋芽的莖段作為無性繁殖的材料進(jìn)行組織培 養(yǎng)并對其培養(yǎng)條件進(jìn)行了篩選，雖然繁殖率也較高，但是發(fā)明人在長期的操作過程中發(fā)現(xiàn) 連續(xù)繼代培養(yǎng)4代以后容易出現(xiàn)變異，因此，需要不斷接種培養(yǎng)獲得愈傷組織才能繁殖更 多植株，對快速繁殖不利。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005] 針對目前存在的問題，本發(fā)明提供一種地椒快速增殖的方法，可以快速有效的繁 殖地椒，并且解決其繼代培養(yǎng)變異的問題，成活率較高，不受季節(jié)的影響，大幅度降低增殖 成本,滿足規(guī)?；a(chǎn)需要。
[0006] 為了解決上述問題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
[0007] -種地椒快速增殖的方法，包括
[0008] 1)取單核靠邊期的花藥進(jìn)行消毒處理；
[0009] 2)接種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)獲得愈傷組織；
[0010] 3)繼代增殖培養(yǎng)，將不污染的愈傷組織轉(zhuǎn)入第一繼代培養(yǎng)基中使芽增殖，繼代4 次，轉(zhuǎn)入第二繼代培養(yǎng)基或不添加任何激素的空白培養(yǎng)基中繼代一次，然后再轉(zhuǎn)入第一繼 代培養(yǎng)基中繼續(xù)增殖，根據(jù)需苗量重復(fù)上述步驟；
[0011] 4)接種生根培養(yǎng)基，篩選獲得單體植株。
[0012] 所述的消毒處理是將花藥用無菌紗布包裹浸入70-75 %濃度的酒精中消毒 8-16s，快速取出立即浸入漂白粉中浸泡IOmin,最后用無菌水沖洗4?6次。
[0013] 所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：l/2MS+6-BA I. 2mg/L+NAA0. 12mg/L+蔗糖50g/L ; 培養(yǎng)基的PH6. 6,培養(yǎng)溫度為25±1°C，12h/d的光周期，光照強(qiáng)度1700Lx左右。
[0014] 所述的第一繼代培養(yǎng)基為 1/2MS+6-BA1. Omg/L+2,4-DO. 2mg/L+NAA 0? 3 ?0? 5mg/ L+瓊脂3g/L+蔗糖15g/L ;所述第二繼代培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA 2mg/L+NAA 0? lmg/L+白 砂糖35g/L+瓊脂粉7. 3g/L ;所述空白培養(yǎng)基為1/2MS+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白 500mg/L+蔗糖30g/L，繼代培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基的PH6. 5,培養(yǎng)溫度為25 ± I °C，16h/d的光周 期，光照強(qiáng)度1200Lx左右。
[0015] 所述的生根培養(yǎng)基為：1/2MS+IAA 0? 1?0? 3mg/L+蔗糖20?30g/L+瓊脂2?3g/ L+活性炭質(zhì)量比0. 1%?0. 3%;培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基的PH6. 5,培養(yǎng)溫度為25±1°C，12h/d 的光周期，光照強(qiáng)度1600Lx左右。
[0016] 在培養(yǎng)過程中還包括，煉苗移栽：先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗4d，待地 椒苗健壯且有5-7片真葉、6-8cm高時，然后解開封口膜，煉苗6d，煉苗完成后取出小苗洗凈 根部附著的培養(yǎng)基，移栽到經(jīng)消毒的基質(zhì)中，溫度控制在24-26°C，前7d濕度控制在70%左 右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置于自然條件下，煉苗移栽期間適當(dāng)遮光，使光照強(qiáng) 度為自然光的50%。
[0017] 發(fā)明人通過一系列實(shí)驗(yàn)來證明本發(fā)明的有效性。
[0018] (一）外植體的選擇
[0019] 于5、6月份，將采收的花藥、帶腋芽的莖段、莖尖、花瓣分別作為外植體進(jìn)行對比， 其余條件相同，并且按照本發(fā)明的步驟進(jìn)行，見表1，從對比可以看出，采用花藥作為外植 體，不僅愈傷組織的誘導(dǎo)率和生根率最高，分別可以達(dá)到80%、76%，而且經(jīng)過5代繼代培 養(yǎng)變異率最低，可以解決地椒繁殖過程中容易出現(xiàn)變異的難題。
[0020] 表 1
[0021]
【權(quán)利要求】
1. 一種地椒快速增殖的方法，其特征在于，包括 1) 取單核靠邊期的花藥進(jìn)行消毒處理； 2) 接種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)獲得愈傷組織； 3) 繼代增殖培養(yǎng)，將不污染的愈傷組織轉(zhuǎn)入第一繼代培養(yǎng)基中使芽增殖，繼代4次，轉(zhuǎn) 入第二繼代培養(yǎng)基或不添加任何激素的空白培養(yǎng)基中繼代一次，然后再轉(zhuǎn)入第一繼代培養(yǎng) 基中繼續(xù)增殖，根據(jù)需苗量重復(fù)上述步驟； 4) 接種生根培養(yǎng)基，篩選獲得單體植株。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的地椒快速增殖的方法，其特征在于，所述的消毒處理是將花 藥用無菌紗布包裹浸入70-75%濃度的酒精中消毒8-16s，快速取出立即浸入漂白粉中浸 泡lOmin，最后用無菌水沖洗4?6次。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的地椒快速增殖的方法，其特征在于，所述的愈傷組織誘導(dǎo) 培養(yǎng)基為：l/2MS+6-BA L 2mg/L+NAA0. 12mg/L+蔗糖50g/L ;培養(yǎng)基的PH為6. 6,培養(yǎng)溫度 為25±l°C，12h/d的光周期，光照強(qiáng)度1700Lx左右。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的地椒快速增殖的方法，其特征在于，所述的第一繼代培養(yǎng) 基為 1/2MS+6-BA1. 0mg/L+2,4-D 0? 2mg/L+NAA0. 3 ?0? 5mg/L+ 瓊脂 3g/L+ 蔗糖 15g/L ;所 述第二繼代培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA 2mg/L+NAA 0. lmg/L+白砂糖35g/L+瓊脂粉7. 3g/L ;所 述空白培養(yǎng)基為1/2MS+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，繼代培養(yǎng) 過程中，培養(yǎng)基的PH6. 5,培養(yǎng)溫度為25±1°C，16h/d的光周期，光照強(qiáng)度1200Lx左右。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的地椒快速增殖的方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基 為：1/2MS+IAA 0? 1?0? 3mg/L+蔗糖20?30g/L+瓊脂2?3g/L+活性炭質(zhì)量比0? 1%? 0.3% ;培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基的PH6.5,培養(yǎng)溫度為25±l°C，12h/d的光周期，光照強(qiáng)度 1600Lx 左右。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的地椒快速增殖的方法，其特征在于，還包括，煉苗移栽： 先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗4d，待地椒苗健壯且有5-7片真葉、6-8cm高時，然 后解開封口膜，煉苗6d，煉苗完成后取出小苗洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移栽到經(jīng)消毒的基質(zhì) 中，溫度控制在24-26°C，前7d濕度控制在70%左右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置 于自然條件下，煉苗移栽期間適當(dāng)遮光，使光照強(qiáng)度為自然光的50%。
【文檔編號】A01H4/00GK104381134SQ201410745993
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年12月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月8日
【發(fā)明者】邱林 申請人:邱林