一種吳茱萸的組培快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，包括無菌帶芽莖段的獲得、芽誘導(dǎo)培養(yǎng)、叢生芽增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗等步驟。采用本發(fā)明所提供的組培技術(shù)方法對(duì)吳茱萸進(jìn)行組培微繁，解決了吳茱萸遺傳穩(wěn)定性差，繁殖率低等技術(shù)難題，達(dá)到了增殖系數(shù)高，成活率高的要求，可以為吳茱萸的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供一種周期短、繁殖率高的人工培育方法。
【專利說明】一種吳茱萸的組培快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002] 吳茱萸，蕓香科，別名吳萸、茶辣、漆辣子、臭辣子樹等，小 喬木或灌木，產(chǎn)秦嶺以南各地，但海南未見有自然分布，曾引進(jìn)栽培，均生長(zhǎng)不良。生于平地 至海拔1500米山地疏林或灌木叢中，多見于向陽坡地。各地有小或大量栽種。吳茱萸對(duì)土 壤要求不嚴(yán)，一般山坡地、平原、房前屋后、路旁均可種植。中性，微堿性或微酸性的土壤都 能生長(zhǎng)，但作苗床時(shí)尤以土層深厚、較肥沃、排水良好的壤土或砂壤土為佳，低洼積水地不 宜種植。是一種藥用植物，治吞酸，蹶陰痰涎頭痛，陰毒腹痛，疝氣，血痢，喉舌口瘡，現(xiàn)代研 究表明對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)，消化系統(tǒng)，心血管系統(tǒng)皆有很好的療效。常用的繁殖方式有根插繁 殖，枝插繁殖，分蘗繁殖，但繁殖效果不理想，現(xiàn)代組培技術(shù)應(yīng)用于吳茱萸的繁殖尚無人研 究，利用組培技術(shù)可以提高繁殖效率，增加吳茱萸的利用率。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，由該方法所 制備得到的吳茱萸組培幼苗生長(zhǎng)周期短，增殖系數(shù)高，生根率高，遺傳性狀穩(wěn)定，病蟲害低， 可以規(guī)模化的進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下方案來實(shí)現(xiàn)的： 取吳茱萸帶芽的莖段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉侵泡3分鐘，流水沖洗1.5小時(shí)，使 用75%酒精處理20s，0. 2%的升汞消毒7min，無菌水沖洗5-7遍，切去切口，獲得的無菌的 帶芽莖段接種入改良DKW+IBAO. 15mg/L+KT0. 3mg/L+0. 1%活性炭中進(jìn)行芽誘導(dǎo)，誘導(dǎo)出來 的吳茱萸叢生芽轉(zhuǎn)接于改良DKW+TDZO. 3mg/L+NAA0. 2mg/L+ABA2mg/L上進(jìn)行叢生芽增殖培 養(yǎng)，增殖的叢生芽處理后接入含1/3改良DKW+NAAO. lmg/L營(yíng)養(yǎng)液的基質(zhì)中進(jìn)行生根誘導(dǎo)， 誘導(dǎo)出來的吳茱萸試管苗栽植于沙壤土：珍珠巖=3 :2的基質(zhì)中，沙壤土和珍珠巖使用高壓 滅菌鍋滅菌，苗床使用前用1000倍的甲基托布津水溶液澆透，栽植后定期澆水，三周后添 加農(nóng)家肥，濕度90%，溫度25°C，遮蓋兩層薄膜，透光率保持在30%左右，45天后觀察生長(zhǎng)情 況，統(tǒng)計(jì)生根率。
[0005] 采用本發(fā)明制備的吳茱萸組培幼苗生產(chǎn)周期短、繁殖率高，生根率92%。
[0006] 下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不 局限于下列實(shí)施方式。
【具體實(shí)施方式】 [0007] 實(shí)施例1 取吳茱萸帶芽的莖段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉侵泡3分鐘，流水沖洗1.5小時(shí)，使 用75%酒精處理20s，0. 2%的升汞消毒7min，無菌水沖洗5-7遍，切去切口，獲得的無菌的 帶芽莖段接種入改良DKW+IBAO. 15mg/L+KT0. 3mg/L+0. 1%活性炭中進(jìn)行芽誘導(dǎo)，誘導(dǎo)出來 的吳茱萸叢生芽轉(zhuǎn)接于改良DKW+TDZO. 2mg/L+NAA0. lmg/L+ABA2mg/L上進(jìn)行叢生芽增殖培 養(yǎng)，增殖的叢生芽處理后接入含1/3改良DKW+NAAO. 05mg/L營(yíng)養(yǎng)液的基質(zhì)中進(jìn)行生根誘導(dǎo)， 誘導(dǎo)出來的吳茱萸試管苗栽植于沙壤土：珍珠巖=3 :2的基質(zhì)中，沙壤土和珍珠巖使用高壓 滅菌鍋滅菌，苗床使用前用1000倍的甲基托布津水溶液澆透，栽植后定期澆水，三周后添 加農(nóng)家肥，濕度90%，溫度25°C，遮蓋兩層薄膜，透光率保持在30%左右，45天后觀察生長(zhǎng)情 況，生根率88%。
[0008] 實(shí)施例2 取吳茱萸帶芽的莖段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉侵泡3分鐘，流水沖洗1.5小時(shí)，使 用75%酒精處理20s，0. 2%的升汞消毒7min，無菌水沖洗5-7遍，切去切口，獲得的無菌的 帶芽莖段接種入改良DKW+IBAO. 15mg/L+KT0. 3mg/L+0. 1%活性炭中進(jìn)行芽誘導(dǎo)，誘導(dǎo)出來 的吳茱萸叢生芽轉(zhuǎn)接于改良DKW+TDZO. 5mg/L+NAA0. 3mg/L+ABA2mg/L上進(jìn)行叢生芽增殖培 養(yǎng)，增殖的叢生芽處理后接入含1/3改良DKW+NAAO. 2mg/L營(yíng)養(yǎng)液的基質(zhì)中進(jìn)行生根誘導(dǎo)， 誘導(dǎo)出來的吳茱萸試管苗栽植于沙壤土：珍珠巖=3 :2的基質(zhì)中，沙壤土和珍珠巖使用高壓 滅菌鍋滅菌，苗床使用前用1000倍的甲基托布津水溶液澆透，栽植后定期澆水，三周后添 加農(nóng)家肥，濕度90%，溫度25°C，遮蓋兩層薄膜，透光率保持在30%左右，45天后觀察生長(zhǎng)情 況，生根率89%。
[0009] 實(shí)施例3 取吳茱萸帶芽的莖段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉侵泡3分鐘，流水沖洗1.5小時(shí)，使 用75%酒精處理20s，0. 2%的升汞消毒7min，無菌水沖洗5-7遍，切去切口，獲得的無菌的 帶芽莖段接種入改良DKW+IBAO. 15mg/L+KT0. 3mg/L+0. 1%活性炭中進(jìn)行芽誘導(dǎo)，誘導(dǎo)出來 的吳茱萸叢生芽轉(zhuǎn)接于改良DKW+TDZO. 3mg/L+NAA0. 3mg/L+ABA2mg/L上進(jìn)行叢生芽增殖培 養(yǎng)，增殖的叢生芽處理后接入含1/3改良DKW+NAAO. lmg/L營(yíng)養(yǎng)液的基質(zhì)中進(jìn)行生根誘導(dǎo)， 誘導(dǎo)出來的吳茱萸試管苗栽植于沙壤土：珍珠巖=3 :2的基質(zhì)中，沙壤土和珍珠巖使用高壓 滅菌鍋滅菌，苗床使用前用1000倍的甲基托布津水溶液澆透，栽植后定期澆水，三周后添 加農(nóng)家肥，濕度90%，溫度25°C，遮蓋兩層薄膜，透光率保持在30%左右，45天后觀察生長(zhǎng)情 況，生根率90%。
【權(quán)利要求】
1. 一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，其步驟如下： (1) 無菌帶芽莖段的獲得：采用常規(guī)的組織培養(yǎng)方法對(duì)吳茱萸帶芽的莖段進(jìn)行消毒處 理； (2) 芽誘導(dǎo)培養(yǎng)：將步驟（1)獲得的無菌的帶芽莖段接種入改良DKW+IBAO. 15mg/ L+KTO. 3mg/L+0. 1%活性炭中進(jìn)行芽誘導(dǎo)； (3) 叢生芽增殖培養(yǎng)：步驟（2)中誘導(dǎo)出來的吳茱萸叢生芽轉(zhuǎn)接于改良 DKW+TDZO. 2-0. 5mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L+ABA2mg/L 上進(jìn)行叢生芽增殖培養(yǎng)； (4) 生根誘導(dǎo)：將步驟（3)增殖的叢生芽處理后接入含1/3改良DKW+NAA0. 05-0. 2mg/L 營(yíng)養(yǎng)液的基質(zhì)中進(jìn)行生根誘導(dǎo)； (5) 煉苗：將生根后的試管苗栽植于含有基質(zhì)的苗床上，一個(gè)月后統(tǒng)計(jì)成活率。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，其特征在于：吳茱萸帶芽 莖段的滅菌方法為取吳茱萸帶芽的莖段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉浸泡3分鐘，流水沖 洗1. 5小時(shí)，使用75%酒精處理20s，0. 2%的升汞消毒7min，無菌水沖洗5-7遍，切去切口。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，其特征在于：培養(yǎng)基中加 入0. 1%活性炭，可以有效防止褐化現(xiàn)象，且可以促進(jìn)吳茱萸芽的分化。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，其特征在于：增殖培養(yǎng)基 中加入ΑΒΑ，ΑΒΑ有利于促進(jìn)不定芽的分化。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，其特征在于：誘導(dǎo)增殖培 養(yǎng)條件采用20001χ光強(qiáng)下培養(yǎng)，蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH值5. 8,溫度25°C，光期12h， 暗期12h，生根培養(yǎng)條件為光照40001x，蔗糖20g/L，瓊脂6. 5g/L，pH值5. 8,溫度27°C，光 期16h，暗期8h。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，其特征在于：煉苗的苗床 基質(zhì)選用沙壤土：珍珠巖=3 :2,沙壤土和珍珠巖使用高壓滅菌鍋滅菌，苗床使用前用1000 倍的甲基托布津水溶液澆透，栽植后定期澆水，三周后添加農(nóng)家肥，濕度90%，溫度25°C，遮 蓋兩層薄膜，透光率保持在30%左右。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104186347SQ201410463276
【公開日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月12日
【發(fā)明者】楊存 申請(qǐng)人:南京通澤農(nóng)業(yè)科技有限公司