一種吳茱萸誘變育種的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種吳茱萸誘變育種的快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得、愈傷組織的誘導(dǎo)、愈傷組織的誘變育種等步驟，本發(fā)明方法所制備的吳茱萸可以提高突變頻率，得到豐富的變異體，繁殖率高，生長周期短，次生代謝物成分含量高。
【專利說明】 一種吳茱萸誘變育種的快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種吳茱萸的快速繁殖方法，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]吳茱萸,蕓香科,別名吳萸、茶辣、漆辣子、臭辣子樹等，Tetradium ruticarpum, /Jn喬木或灌木，產(chǎn)秦嶺以南各地，但海南未見有自然分布，曾引進(jìn)栽培，均生長不良。生于平地至海拔1500米山地疏林或灌木叢中，多見于向陽坡地。各地有小或大量栽種。吳茱萸對土壤要求不嚴(yán)，一般山坡地、平原、房前屋后、路旁均可種植。中性，微堿性或微酸性的土壤都能生長，但作苗床時(shí)尤以土層深厚、較肥沃、排水良好的壤土或砂壤土為佳，低洼積水地不宜種植。是一種藥用植物，治吞酸，陰毒腹痛，疝氣，血痢，喉舌口瘡，現(xiàn)代研究表明對中樞神經(jīng)系統(tǒng)，消化系統(tǒng)，心血管系統(tǒng)皆有很好的療效。常用的繁殖方式有根插繁殖，枝插繁殖，分蘗繁殖，但繁殖效果不理想，現(xiàn)代組培技術(shù)應(yīng)用于吳茱萸的繁殖尚無人研究，利用組培技術(shù)結(jié)合誘變劑處理可以提高繁殖效率，提高吳茱萸的品質(zhì)。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，由該方法所制備可以提高突變頻率，得到豐富的變異體，繁殖率高，生長周期短，次生代謝物成分含量聞。
[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下方案來實(shí)現(xiàn)的:
取吳茱萸葉片，在流水沖洗3min，毛刷去除便面污垢，超凈工作臺上次氯酸鈉處理14min,無菌水沖洗5遍，吸水紙吸去表面水分，滅菌處理過的吳茱萸葉片接入培養(yǎng)基配方為DCR+NAA0.2mg/L+6-BA0.5mg/L誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，暗室培養(yǎng)，溫度25 °C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織30天后轉(zhuǎn)入附加了乙基半氨酸的培養(yǎng)基中進(jìn)行右邊處理，誘變后的愈傷組織加入改良DCR+NAA4.8-5.4Mm/L+TDZ0.2-0.4Mm/L+氯化鈷0.01-0.05Mm/L+半乳糖60g/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織分化植株再生。
[0005]采用本發(fā)明試管苗長勢好，誘導(dǎo)率高，周期短，操作可控，可進(jìn)行工業(yè)擴(kuò)大化生產(chǎn)。
[0006]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
【具體實(shí)施方式】
[0007]實(shí)施例1
取吳茱萸葉片，在流水沖洗3min，毛刷去除便面污垢，超凈工作臺上次氯酸鈉處理14min,無菌水沖洗5遍，吸水紙吸去表面水分，滅菌處理過的吳茱萸葉片接入培養(yǎng)基配方為DCR+NAA0.2mg/L+6-BA0.5mg/L誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，暗室培養(yǎng)，溫度25°C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織30天后轉(zhuǎn)入附加了乙基半氨酸的培養(yǎng)基中進(jìn)行右邊處理，誘變后的愈傷組織加入改良DCR+NAA4.8Mm/L+TDZ0.2Mm/L+氯化鈷0.0lMm/L+半乳糖60g/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織分化植株再生，誘導(dǎo)率90%。
[0008]實(shí)施例2
取吳茱萸葉片，在流水沖洗3min，毛刷去除便面污垢，超凈工作臺上次氯酸鈉處理14min,無菌水沖洗5遍，吸水紙吸去表面水分，滅菌處理過的吳茱萸葉片接入培養(yǎng)基配方為DCR+NAA0.2mg/L+6-BA0.5mg/L誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，暗室培養(yǎng)，溫度25°C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織30天后轉(zhuǎn)入附加了乙基半氨酸的培養(yǎng)基中進(jìn)行右邊處理，誘變后的愈傷組織加入改良DCR+NAA5.4Mm/L+TDZ0.4Mm/L+氯化鈷0.05Mm/L+半乳糖60g/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織分化植株再生，誘導(dǎo)率91%。
[0009]實(shí)施例3
取吳茱萸葉片，在流水沖洗3min，毛刷去除便面污垢，超凈工作臺上次氯酸鈉處理14min,無菌水沖洗5遍，吸水紙吸去表面水分，滅菌處理過的吳茱萸葉片接入培養(yǎng)基配方為DCR+NAA0.2mg/L+6-BA0.5mg/L誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，暗室培養(yǎng)，溫度25°C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織30天后轉(zhuǎn)入附加了乙基半氨酸的培養(yǎng)基中進(jìn)行右邊處理，誘變后的愈傷組織加入改良DCR+NAA5Mm/L+TDZ0.4Mm/L+氯化鈷0.0lMm/L+半乳糖60g/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織分化植株再生，誘導(dǎo)率92%。
【權(quán)利要求】
1.一種吳茱萸誘變育種的快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得、愈傷組織的誘導(dǎo)、愈傷組織的誘變育種、生根誘導(dǎo)，其主要步驟如下: (1)取吳茱萸的葉片，在超凈工作臺上進(jìn)行消毒處理； (2)取步驟(I)滅菌處理過的吳茱萸葉片接入培養(yǎng)基配方為DCR+NAA0.2mg/L+6-BA0.5mg/L誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，PH5.8，暗室培養(yǎng)，溫度25 0C ； (3)取步驟(2)誘導(dǎo)出來的愈傷組織30天后轉(zhuǎn)入附加了乙基半氨酸的培養(yǎng)基中進(jìn)行右邊處理； (4)取步驟(3)誘變后的愈傷組織加入改良DCR+NAA4.8-5.4Mm/L+TDZ0.2-0.4Mm/L+氯化鈷0.01-0.05Mm/L+半乳糖60g/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織分化植株再生。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種吳茱萸誘變育種的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(I)吳茱萸葉片，在流水沖洗3min，毛刷去除便面污垢，超凈工作臺上次氯酸鈉處理14min，無菌水沖洗5遍，吸水紙吸去表面水分。
3.按照權(quán)利要求1所述的一種吳茱萸誘變育種的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(3 )誘變育種選擇乙基半氨酸能提高誘變率，篩選出優(yōu)良品種。
4.按照權(quán)利要求1所述的一種吳茱萸誘變育種的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(4)中添加了氯化鈷，可以提高其次生代謝物質(zhì)的含量。
【文檔編號】A01H4/00GK104255470SQ201410463159
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月12日
【發(fā)明者】楊存 申請人:南京通澤農(nóng)業(yè)科技有限公司