一種金針菇菌種的生產方法
【專利摘要】本發明公開了一種金針菇菌種的生產方法，其技術方案的要點是包括以下步驟：選取母體菇種、制備斜面培養基、制備一次性培養基、制備搖瓶培養基、培養液體初培養菌種、菌種培養桶培養菌種。以金針菇為接種菌株，采用無菌培養技術，所得菌種發芽率高，出產的金針菇桿部更直外觀顏色更白，口感更好。
【專利說明】一種金針菇菌種的生產方法
【【技術領域】】
[0001]本發明涉及一種金針菇菌種的生產方法。
【【背景技術】】
[0002]金針菇學名毛柄金錢菌，又稱毛柄小火菇、樸菇、冬菇、凍菌、金菇、智力菇等。因其菌柄細長，似金針菜，故稱金針菇，屬傘菌目白蘑科金針菇屬，是一種菌藻地衣類。金針菇具有很高的藥用食療價值。金針菇是秋冬與早春栽培的食用菌，以其菌蓋滑嫩、柄脆、營養豐富、味美適口而著稱于世，特別是涼拌菜和火鍋的上好食材，其營養豐富，清香撲鼻而且味道鮮美，深受大眾的喜愛。據測定，金針菇氨基酸的含量非常豐富，高于一般菇類，尤其是賴氨酸的含量特別高，賴氨酸具有促進兒童智力發育的功能。金針菇干品中含蛋白質8.87%,碳水化合物60.2%，粗纖維達7.4%，經常食用可防治潰瘍病。有研究又表明，金針菇內所含的一種物質具有很好的抗癌作用。
[0003]金針菇大量生產，常出現雜菌污染等導致減產，特別是大量培養菌種過程中，存在發芽率低的情況，嚴重影響經濟效益。
【
【發明內容】
】
[0004]本發明目的是提供一種金針菇菌種的生產方法，以金針菇為接種菌株，采用無菌培養技術，所得菌種發芽率高，出產的金針菇桿部更直外觀顏色更白，口感更好。
[0005]本發明為了實現上述目的，采用以下技術方案:
[0006]一種金針菇菌種的生產方法，其特征在于包括以下步驟:選取母體菇種、制備斜面培養基、制備一次性培養基、制備搖瓶培養基、培養液體初培養菌種、菌種培養桶培養菌種。
[0007]所述具體步驟如下:
[0008]A:選取母體菇種
[0009]選擇六?八成熟的金針菇，于2?4°C條件存放2天，水分減至40?50%，分離出桿部得母體菇種；
[0010]B:制備斜面培養基
[0011]按照質量百分比將PDA培養基3.5?4 %、磷酸二氫鉀0.05?0.08 %、MgSO4.5Η200.05?0.08%、蛋白胨0.1?0.15%、ΡΗ6.5?7的蒸餾水余量的混合物加入試管中，混勻后于122?123 °C條件，滅菌20?25min，滅菌后降溫至96?98 °C取出試管，擺成斜面，制得斜面培養基；
[0012]C:制備一次性培養基
[0013]按照質量百分比將PDA培養基3.5?4%，PH6.5?7的蒸餾水余量的混合物混合加入三角瓶中混勻，混勻后于122?123°C條件，滅菌30?35min，滅菌后降溫至96?98°C取出三角瓶，將三角瓶放入超凈工作臺中，冷卻至60°C以下，將三角瓶內的培養基，再倒入一次性培養皿中，待降至室溫，制得一次性培養基；
[0014]D:制備搖瓶培養基
[0015]按照質量百分比將白糖2?2.3%、磷酸二氫鉀0.2?0.23%,MgSO4.5Η200.02?0.023%、蛋白胨0.02?0.023%、PH為6.5?7的蒸餾水余量的混合物配置加入三角瓶中，混勻后用錫紙將瓶口塞住，于122?123°C條件，滅菌40?45min，滅菌后將三角瓶降溫至96?98°C取出，再放入超凈工作臺中冷卻至60°C以下，制備得搖瓶培養基；
[0016]E:培養液體初培養菌種
[0017](I)選取的制備好的母體菇種，接種到制備好的斜面培養基培養，條件:20?22°C，5?6天，待斜面菌絲長滿，即得到母種A ；
[0018](2)取用母種A，接種到制備好的一次性培養基培養，條件:20?22°C，6?7天，待菌絲長滿培養皿，即得到母種B ；
[0019](3)取用母種B，將母種B外表面的菌絲皮割掉，將下方的接種培養基再次接種到制備好的一次性培養基中培養，條件:20?22°C，6?7天，待菌絲長滿培養皿后，即得到母種C ；
[0020](4)取用母種C，將母種C菌塊去掉表皮，接種到搖瓶培養基中，之后將搖瓶培養基連同三角瓶一同移到搖床中，18?20°C條件，轉速為110-120r/min，培養8?10天，即得液體初培養菌種；
[0021]F:菌種培養桶培養菌種
[0022](I)菌種培養桶的配置，按照質量百分比將白糖3?3.5 %、磷酸二氫鉀0.3?0.35%、MgSO4.5Η200.05 ?0.06%、消泡劑 0.02 ?0.025%、PH 為 6.5 ?7 的軟化過濾水余量的混合物加入菌種培養桶，混勻后將菌種培養桶密封并移入菌包滅菌柜中滅菌，100C保溫60min，123°C滅菌120min，再密閉放置30min，冷卻至96?98 °C打開滅菌柜門，將菌種培養桶移至冷卻室冷卻，冷卻時菌種培養桶內通入0.075?0.08mpa無菌的空氣，菌種培養桶的桶壁用循環水冷卻，直至菌種培養桶冷卻到18?20°C ；
[0023](2)將三角瓶內的液體初培養菌種，用自動攪拌器攪拌，攪拌器轉速4000?5000r/min，攪拌停止后，在火焰保護下，由菌種培養桶專用接種口倒入并培養，通入0.075?0.08mpa的無菌空氣，16?18°C，培養5?6天，得金針菇菌種。
[0024]所述培養基自動攪拌器的攪拌棒為不銹鋼圓柱狀的可拆卸式結構，在攪拌使用前需在滅菌鍋中滅菌處理，滅菌條件為122?123°C，50min，后放入超凈工作臺冷卻到18?20°C，滅菌期間需用錫紙包裹攪拌棒，待滅菌完成后裝入攪拌器前拆下錫紙包裝，攪拌作業時將攪拌棒直接插入三角瓶中進行攪拌，攪拌的過程時間控制為:a、攪拌:4S，b、停止:2S，
C、攪拌:15S, d、停止:2S, e、攪拌:2S后停止。
[0025]所述培養液體初培養菌種時取用母種C，一次取用母種C的菌塊4?6塊，大小為4?6mm2的圓柱形。
[0026]所述制備一次性培養基時，所使用的一次性培養皿降至室溫步驟:將一次性培養皿上蓋掀開，經超凈工作臺的上吹風冷卻，待上蓋完全無水霧時，將上蓋蓋上，從培養皿的正反兩面觀察目視為透明的，無任何其他的雜物存在即可。
[0027]所述搖瓶培養基接種到菌種培養桶后，在培養過程中的第三天與第五天，分別需用LB培養基檢查培養測試其發育狀況。
[0028]所述LB培養基的配置，是按照質量百分比將LB瓊脂培養基3.5?4%，PH為
6.5?7的蒸懼水余量混合加入三角瓶,于122?123°C,滅菌30?35min,滅菌降溫至96?98°C取出三角瓶，再放入超凈工作臺中冷卻至60°C以下，后將三角瓶內的培養基，倒入一次性培養皿中，待一次性培養皿降至室溫，即得LB培養基。
[0029]本發明與現有技術相比，有如下優點:
[0030]本發明提供一種金針菇菌種的生產方法，采用獨特的培養基配比組合，且菌種培養過程中經過斜面培養基，一次性培養基和搖瓶培養基的多次無菌培養，所得菌種無污染，發芽率高。
[0031]所用的培養基自動攪拌器，采用可拆卸式攪拌棒，短時高速攪拌，攪拌混合效果好，且因時間短菌種不易污染。
[0032]采用大容量的菌種培養桶進行擴大培養，效率更高，提高了發芽率的同時，提高了產能，有效控制成本。使用本菌種，一般條件下發芽率保證在90%以上，所培育出的金針菇產品，單瓶(IlOOml)單產高出同類菌種單產30?50克，產能效率極大提高。
【【具體實施方式】】
[0033]以下實施例中的金針菇，是選用本公司自產菌種發芽得的金針菇。
[0034]實施例1:
[0035]A:選取母體菇種
[0036]選擇八成熟的金針菇，于2°C條件存放2天，水分減至40%，抽真空后分離出桿部得母體菇種；(抽真空后更易分離)；
[0037]B:制備斜面培養基
[0038]按照質量百分比將PDA培養基3.5 %、磷酸二氫鉀0.05 %、MgSO4.5H200.05 %、蛋白胨0.1%、PH6.5的蒸餾水余量的混合物加入試管中，保持混合物PH為6.1，混勻后于122°C條件，滅菌20min，滅菌后降溫至96°C取出試管，擺成斜面，制得斜面培養基；制得的培養基需做無菌檢驗，將制得的培養基轉移至30°C的培養箱中10h，無菌落長出可備用；
[0039]C:制備一次性培養基
[0040]按照質量百分比將PDA培養基3.5%，PH6.5的蒸餾水余量的混合物混合加入三角瓶中混勻，保持混合物PH為6.1，混勻后于122°C條件，滅菌30min，滅菌后降溫至96°C取出三角瓶，將三角瓶放入超凈工作臺中，冷卻至60°C以下，將三角瓶內的培養基，再倒入一次性培養皿中，每個倒入15ml，所使用的一次性培養皿降至室溫步驟:將一次性培養皿上蓋掀開，經超凈工作臺的上吹風冷卻，待上蓋完全無水霧時，將上蓋蓋上，從培養皿的正反兩面觀察目視為透明的，無任何其他的雜物存在即可，制得一次性培養基；制得的培養基需做無菌檢驗，將制得的培養基轉移至30°C的培養箱中10h，無菌落長出可備用；
[0041]D:制備搖瓶培養基
[0042]按照質量百分比將白糖2 %、磷酸二氫鉀0.2 %、MgSO4.5H200.02 %、蛋白胨0.02%、PH為6.5的蒸餾水余量的混合物配置加入三角瓶中，保持混合物PH為5.8，混勻后用錫紙將瓶口塞住，于122°C條件，滅菌40min，滅菌后將三角瓶降溫至96°C取出，再放入超凈工作臺中冷卻至60°C以下，制備得搖瓶培養基；制得的培養基需做無菌檢驗，將制得的培養基轉移至30°C的培養箱中10h，無菌落長出可備用；
[0043]E:培養液體初培養菌種
[0044](I)將選取的母體菇種0.3克，接種到制備好的斜面培養基培養，條件:20°C，5天，待斜面菌絲長滿，即得到母種A ；
[0045](2)取用母種A，接種到制備好的一次性培養基培養，條件:20°C，6天，待菌絲長滿培養皿，即得到母種B;
[0046](3)取用母種B，將母種B外表面的菌絲皮割掉，將下方的接種培養基再次接種到制備好的一次性培養基中培養，條件:20°C，6天，待菌絲長滿培養皿后，即得到母種C ；
[0047](4) 一次取用母種C大小為4_2的圓柱形的菌塊6塊，去掉表皮，接種到搖瓶培養基中，之后將搖瓶培養基連同三角瓶一同移到搖床中，18°C條件，轉速為110r/min，培養8天，即得液體初培養菌種；
[0048]F:菌種培養桶培養菌種
[0049](I)菌種培養桶的配置，按照質量百分比將白糖3 %、磷酸二氫鉀0.3 %、MgSO4.5H200.05%、消泡劑0.02%、PH為6.5的軟化過濾水余量的混合物加入菌種培養桶，保持混合物PH為6.5，混勻后將菌種培養桶密封并移入菌包滅菌柜中滅菌，100°C保溫60min，123°C滅菌120min，再密閉放置30min，冷卻至96°C打開滅菌柜門，將菌種培養桶移至冷卻室冷卻，冷卻時菌種培養桶內通入0.075mpa無菌的空氣，菌種培養桶的桶壁用循環水冷卻，直至菌種培養桶冷卻到18°C ；
[0050](2)將三角瓶內培養好的液體初培養菌種，用自動攪拌器攪拌，攪拌器轉速4000r/min，攪拌的過程時間控制為:a、攪拌:4S，b、停止:2S，c、攪拌:15S，d、停止:2S，e、攪拌:2S，攪拌停止后，在火焰保護下，由菌種培養桶專用接種口倒入并培養，通入0.075mpa的無菌空氣，16°C，培養5天，在培養過程中的第三天與第五天，分別需用LB培養基檢查培養測試其發育狀況，得金針菇菌種。
[0051 ] LB培養基的配置，是按照質量百分比將LB瓊脂培養基3.5%，PH為6.5的蒸餾水余量混合加入三角瓶，保持混合物PH為6.5，于122°C，滅菌30min，滅菌降溫至96°C取出三角瓶，再放入超凈工作臺中冷卻至60°C以下，后將三角瓶內的培養基，倒入一次性培養皿中，每個倒入10ml，待一次性培養皿降至室溫，即得LB培養基。
[0052]實施例2:
[0053]A:選取母體菇種
[0054]選擇七成熟的金針菇，于3°C條件存放2天，水分減至45%，抽真空后分離出桿部得母體菇種；(抽真空后更易分離)；
[0055]B:制備斜面培養基
[0056]按照質量百分比將PDA培養基3.8%、磷酸二氫鉀0.06 %、MgSO4.5H200.06 %、蛋白胨0.13%、PH6.8的蒸餾水余量的混合物加入試管中，保持混合物PH為6.2，混勻后于122°C條件，滅菌22min，滅菌后降溫至97°C取出試管，擺成斜面，制得斜面培養基；制得的培養基需做無菌檢驗，將制得的培養基轉移至32°C的培養箱中llh，無菌落長出可備用；
[0057]C:制備一次性培養基
[0058]按照質量百分比將PDA培養基3.8%，PH6.7的蒸餾水余量的混合物混合加入三角瓶中混勻，保持混合物PH為6.2，混勻后于122 °C條件，滅菌33min，滅菌后降溫至97°C取出三角瓶，將三角瓶放入超凈工作臺中，冷卻至60°C以下，將三角瓶內的培養基，再倒入一次性培養皿中，每個倒入18ml，所使用的一次性培養皿降至室溫步驟:將一次性培養皿上蓋掀開，經超凈工作臺的上吹風冷卻，待上蓋完全無水霧時，將上蓋蓋上，從培養皿的正反兩面觀察目視為透明的，無任何其他的雜物存在即可，制得一次性培養基；制得的培養基需做無菌檢驗，將制得的培養基轉移至32°C的培養箱中llh，無菌落長出可備用；
[0059]D:制備搖瓶培養基
[0060]按照質量百分比將白糖2.2%、磷酸二氫鉀0.21%, MgSO4.5H200.021 %、蛋白胨
0.021 %、PH為6.7的蒸餾水余量的混合物配置加入三角瓶中，保持混合物PH為5.9，混勻后用錫紙將瓶口塞住，于122°C條件，滅菌40min，滅菌后將三角瓶降溫至96°C取出，再放入超凈工作臺中冷卻至60°C以下，制備得搖瓶培養基；制得的培養基需做無菌檢驗，將制得的培養基轉移至32°C的培養箱中llh，無菌落長出可備用；
[0061]E:培養液體初培養菌種
[0062](I)將選取的母體菇0.5克，接種到制備好的斜面培養基培養，條件:21°C，5天，待斜面菌絲長滿，即得到母種A ;
[0063](2)取用母種A，接種到制備好的一次性培養基培養，條件:21°C，6天，待菌絲長滿培養皿，即得到母種B;
[0064](3)取用母種B，將母種B外表面的菌絲皮割掉，將下方的接種培養基再次接種到制備好的一次性培養基中培養，條件:21°C，7天，待菌絲長滿培養皿后，即得到母種C ；
[0065](4) 一次取用母種C大小為5mm2的圓柱形的菌塊5塊,去掉表皮,接種到搖瓶培養基中，之后將搖瓶培養基連同三角瓶一同移到搖床中，19°C條件，轉速為115r/min，培養9天，即得液體初培養菌種；
[0066]F:菌種培養桶培養菌種
[0067](I)菌種培養桶的配置，按照質量百分比將白糖3.3 %、磷酸二氫鉀0.33%、MgSO4.5H200.05%、消泡劑0.023%, PH為6.7的軟化過濾水余量的混合物加入菌種培養桶，保持混合物PH為6.7，混勻后將菌種培養桶密封并移入菌包滅菌柜中滅菌，100°C保溫60min, 123°C滅菌120min，再密閉放置30min，冷卻至97°C打開滅菌柜門，將菌種培養桶移至冷卻室冷卻，冷卻時菌種培養桶內通入0.078mpa無菌的空氣，菌種培養桶的桶壁用循環水冷卻，直至菌種培養桶冷卻到19°C ；
[0068](2)將三角瓶內培養好的液體初培養菌種，用自動攪拌器攪拌，攪拌器轉速4500r/min，攪拌的過程時間控制為:a、攪拌:4S，b、停止:2S，c、攪拌:15S，d、停止:2S，e、攪拌:2S，攪拌停止后，在火焰保護下，由菌種培養桶專用接種口倒入并培養，通入0.078mpa的無菌空氣，16°C，培養5天，在培養過程中的第三天與第五天，分別需用LB培養基檢查培養測試其發育狀況，得金針菇菌種。
[0069]LB培養基的配置，是按照質量百分比將LB瓊脂培養基3.7%，PH為6.7的蒸餾水余量混合加入三角瓶，保持混合物PH為6.7，于123°C，滅菌33min，滅菌降溫至97°C取出三角瓶，再放入超凈工作臺中冷卻至60°C以下，后將三角瓶內的培養基，倒入一次性培養皿中，每個倒入13ml，待一次性培養皿降至室溫，即得LB培養基。
[0070]實施例3:
[0071]A:選取母體菇種
[0072]選擇六成熟的金針菇，于4°C條件存放2天，水分減至50%，抽真空后分離出桿部得母體菇種；(抽真空后更易分離)；
[0073]B:制備斜面培養基
[0074]按照質量百分比將PDA培養基4%、磷酸二氫鉀0.08%、MgSO4.5H200.08%、蛋白胨0.15%、PH7的蒸餾水余量的混合物加入試管中，保持混合物PH為6.3，混勻后于123°C條件，滅菌25min，滅菌后降溫至98°C取出試管，擺成斜面，制得斜面培養基；制得的培養基需做無菌檢驗，將制得的培養基轉移至35°C的培養箱中12h，無菌落長出可備用；
[0075]C:制備一次性培養基
[0076]按照質量百分比將PDA培養基4%，PH7的蒸餾水余量的混合物混合加入三角瓶中混勻，保持混合物PH為6.3，混勻后于123°C條件，滅菌35min，滅菌后降溫至98°C取出三角瓶，將三角瓶放入超凈工作臺中，冷卻至60°C以下，將三角瓶內的培養基，再倒入一次性培養皿中，每個倒入20ml，所使用的一次性培養皿降至室溫步驟:將一次性培養皿上蓋掀開，經超凈工作臺的上吹風冷卻，待上蓋完全無水霧時，將上蓋蓋上，從培養皿的正反兩面觀察目視為透明的，無任何其他的雜物存在即可，制得一次性培養基；制得的培養基需做無菌檢驗，將制得的培養基轉移至35°C的培養箱中12h，無菌落長出可備用；
[0077]D:制備搖瓶培養基
[0078]按照質量百分比將白糖2.3%、磷酸二氫鉀0.23%、MgSO4.5Η200.023%、蛋白胨
0.023%、PH為7的蒸餾水余量的混合物配置加入三角瓶中，保持混合物PH為6.0，混勻后用錫紙將瓶口塞住，于123°C條件，滅菌45min，滅菌后將三角瓶降溫至98°C取出，再放入超凈工作臺中冷卻至60°C以下，制備得搖瓶培養基；制得的培養基需做無菌檢驗，將制得的培養基轉移至35°C的培養箱中12h,無菌落長出可備用；
[0079]E:培養液體初培養菌種
[0080](I)將選取的母體菇種截取0.6克，接種到制備好的斜面培養基培養，條件:22°C，6天，待斜面菌絲長滿，即得到母種A ；
[0081](2)取用母種A，接種到制備好的一次性培養基培養，條件:22°C，7天，待菌絲長滿培養皿，即得到母種B;
[0082](3)取用母種B，將母種B外表面的菌絲皮割掉，將下方的接種培養基再次接種到制備好的一次性培養基中培養，條件:22°C，7天，待菌絲長滿培養皿后，即得到母種C ；
[0083](4) 一次取用母種C大小為6_2的圓柱形的菌塊4塊，去掉表皮，接種到搖瓶培養基中，之后將搖瓶培養基連同三角瓶一同移到搖床中，20°C條件，轉速為120r/min，培養10天，即得液體初培養菌種；
[0084]F:菌種培養桶培養菌種
[0085](I)菌種培養桶的配置，按照質量百分比將白糖3.5 %、磷酸二氫鉀0.35%、MgSO4.5H200.06%、消泡劑0.025%, PH為7的軟化過濾水余量的混合物加入菌種培養桶，保持混合物PH為7，混勻后將菌種培養桶密封并移入菌包滅菌柜中滅菌，100°C保溫60min，123°C滅菌120min，再密閉放置30min，冷卻至98°C打開滅菌柜門，將菌種培養桶移至冷卻室冷卻，冷卻時菌種培養桶內通入0.08mpa無菌的空氣，菌種培養桶的桶壁用循環水冷卻，直至菌種培養桶冷卻到20°C ；
[0086](2)將三角瓶內培養好的液體初培養菌種，用自動攪拌器攪拌，攪拌器轉速5000r/min，攪拌的過程時間控制為:a、攪拌:4S，b、停止:2S，c、攪拌:15S，d、停止:2S，e、攪拌:2S，攪拌停止后，在火焰保護下，由菌種培養桶專用接種口倒入并培養，通入0.0Smpa的無菌空氣，18 °C，培養6天，在培養過程中的第三天與第五天，分別需用LB培養基檢查培養測試其發育狀況，得金針菇菌種。
[0087]LB培養基的配置，是按照質量百分比將LB瓊脂培養基4%，PH為7的蒸餾水余量混合加入三角瓶，保持混合物PH為7，于123°C，滅菌35min，滅菌降溫至98°C取出三角瓶，再放入超凈工作臺中冷卻至60°C以下，后將三角瓶內的培養基，倒入一次性培養皿中，每個倒入15ml，待一次性培養皿降至室溫，即得LB培養基。
[0088]以上所述僅為本發明優選實施例，并不限于本發明，凡在本發明的范圍內，所做的修改，替換等，均應包含在本發明保護范圍內。
【權利要求】
1.一種金針菇菌種的生產方法，其特征在于包括以下步驟:選取母體菇種、制備斜面培養基、制備一次性培養基、制備搖瓶培養基、培養液體初培養菌種、菌種培養桶培養菌種。
2.根據權利要求1的一種金針菇菌種的生產方法，其特征在于所述具體步驟如下: A:選取母體燕種 選擇六?八成熟的金針菇，于2?4°C條件存放2天，水分減至40?50%，分離出桿部得母體菇種； B:制備斜面培養基 按照質量百分比將PDA培養基3.5?4 %、磷酸二氫鉀0.05?0.08 %、MgSO4.5Η200.05?0.08%、蛋白胨0.1?0.15%、ΡΗ6.5?7的蒸餾水余量的混合物加入試管中，混勻后于122?123 °C條件，滅菌20?25min，滅菌后降溫至96?98 °C取出試管，擺成斜面，制得斜面培養基； C:制備一次性培養基 按照質量百分比將PDA培養基3.5?4%，PH6.5?7的蒸餾水余量的混合物混合加入三角瓶中混勻，混勻后于122?123 °C條件，滅菌30?35min，滅菌后降溫至96?98 °C取出三角瓶，將三角瓶放入超凈工作臺中，冷卻至60°C以下，將三角瓶內的培養基，再倒入一次性培養皿中，待降至室溫，制得一次性培養基； D:制備搖瓶培養基 按照質量百分比將白糖2?2.3 %、磷酸二氫鉀0.2?0.23 %, MgSO4.5H200.02?0.023%、蛋白胨0.02?0.023%、PH為6.5?7的蒸餾水余量的混合物配置加入三角瓶中，混勻后用錫紙將瓶口塞住，于122?123°C條件，滅菌40?45min，滅菌后將三角瓶降溫至96?98°C取出，再放入超凈工作臺中冷卻至60°C以下，制備得搖瓶培養基； E:培養液體初培養菌種 (1)選取的制備好的母體菇種，接種到制備好的斜面培養基培養，條件:20?22°C，5?6天，待斜面菌絲長滿，即得到母種A ； (2)取用母種A，接種到制備好的一次性培養基培養，條件:20?22°C，6?7天，待菌絲長滿培養皿，即得到母種B; (3)取用母種B，將母種B外表面的菌絲皮割掉，將下方的接種培養基再次接種到制備好的一次性培養基中培養，條件:20?22°C，6?7天，待菌絲長滿培養皿后，即得到母種C ; (4)取用母種C，將母種C菌塊去掉表皮，接種到搖瓶培養基中，之后將搖瓶培養基連同三角瓶一同移到搖床中，18?20°C條件，轉速為110-120r/min，培養8?10天，即得液體初培養菌種； F:菌種培養桶培養菌種 (1)菌種培養桶的配置，按照質量百分比將白糖3?3.5%、磷酸二氫鉀0.3?0.35%、MgSO4.5Η200.05?0.06%、消泡劑0.02?0.025%、ΡΗ為6.5?7的軟化過濾水余量的混合物加入菌種培養桶，混勻后將菌種培養桶密封并移入菌包滅菌柜中滅菌，100°C保溫60min，123°C滅菌120min，再密閉放置30min，冷卻至96?98°C打開滅菌柜門，將菌種培養桶移至冷卻室冷卻，冷卻時菌種培養桶內通入0.075?0.08mpa無菌的空氣，菌種培養桶的桶壁用循環水冷卻，直至菌種培養桶冷卻到18?20°C ； (2)將三角瓶內的液體初培養菌種，用自動攪拌器攪拌，攪拌器轉速4000?5000r/min,攪拌停止后，在火焰保護下，由菌種培養桶專用接種口倒入并培養，通入0.075?0.08mpa的無菌空氣，16?18°C，培養5?6天，得金針菇菌種。
3.根據權利要求1所述的一種金針菇菌種的生產方法，其特征在于所述培養基自動攪拌器的攪拌棒為不銹鋼圓柱狀的可拆卸式結構，在攪拌使用前需在滅菌鍋中滅菌處理，滅菌條件為122?123°C，50min，后放入超凈工作臺冷卻到18?20°C，滅菌期間需用錫紙包裹攪拌棒，待滅菌完成后裝入攪拌器前拆下錫紙包裝，攪拌作業時將攪拌棒直接插入三角瓶中進行攪拌，攪拌的過程時間控制為:a、攪拌:4S，b、停止:2S，c、攪拌:15S，d、停止:2S，e、攪拌:2S后停止。
4.根據權利要求1所述的一種金針燕菌種的生產方法，其特征在于所述培養液體初培養菌種時取用母種C, 一次取用母種C的菌塊4?6塊,大小為4?6mm2的圓柱形。
5.根據權利要求1所述的一種金針菇菌種的生產方法，其特征在于所述制備一次性培養基時，所使用的一次性培養皿降至室溫步驟:將一次性培養皿上蓋掀開，經超凈工作臺的上吹風冷卻，待上蓋完全無水霧時，將上蓋蓋上，從培養皿的正反兩面觀察目視為透明的，無任何其他的雜物存在即可。
6.根據權利要求1所述的一種金針菇菌種的生產方法，其特征在于所述搖瓶培養基接種到菌種培養桶后，在培養過程中的第三天與第五天，分別需用LB培養基檢查培養測試其發育狀況。
7.根據權利要求6所述的一種金針燕菌種的生產方法，其特征在于所述LB培養基的配置，是按照質量百分比將LB瓊脂培養基3.5?4%，PH為6.5?7的蒸餾水余量混合加入三角瓶，于122?123°C，滅菌30?35min，滅菌降溫至96?98°C取出三角瓶，再放入超凈工作臺中冷卻至60°C以下，后將三角瓶內的培養基，倒入一次性培養皿中，待一次性培養皿降至室溫，即得LB培養基。
【文檔編號】A01G1/04GK104221709SQ201410436538
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年8月30日 優先權日:2014年8月30日
【發明者】劉太平 申請人:永州市祥瑞生物科技有限公司