黃果銀樺的離體培養(yǎng)再生植株方法

黃果銀樺的離體培養(yǎng)再生植株方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種黃果銀樺的離體培養(yǎng)再生植株方法，該方法是采集生長健壯，無病蟲害的黃果銀樺樹冠頂端的半木質(zhì)化的枝條，清洗后切取2~3厘米的帶1~2個腋芽的莖段，將莖段經(jīng)過消毒、無菌水沖洗，在人為控制條件下誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)，切取萌發(fā)的無菌芽，接種于增值培養(yǎng)基，誘導(dǎo)叢生芽生長，擴(kuò)大繁殖數(shù)量；將叢生芽切成單芽誘導(dǎo)生根，獲得完整的組培生根瓶苗，然后將生根的組培瓶苗移入基質(zhì)中培養(yǎng)，待長出新芽新根后，移植到花盆中培育大苗。本發(fā)明方法可克服黃果銀樺組培繁殖技術(shù)中存在的污染率高、褐化嚴(yán)重、誘導(dǎo)率低、移植成活率低的問題，實(shí)現(xiàn)黃果銀樺的快速繁殖培育，對山龍眼科銀樺屬植物在中國園林綠化中的廣泛推廣有著重要意義。
【專利說明】黃果銀樺的離體培養(yǎng)再生植株方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種離體培養(yǎng)再生植株方法，具體是一種黃果銀樺的離體培養(yǎng)再生植 株方法，屬于生物離體組織培養(yǎng)育苗【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 銀樺，別名絹柏，絲樹，銀橡樹，原產(chǎn)大洋洲，常綠，樹干筆直，樹形美觀，尤其在開 花季節(jié)，萬綠叢中襯以橙黃色的花朵，為風(fēng)景樹和行道樹，中國廣東、廣西、云南各城鎮(zhèn)均引 種，為城市主要綠化樹種之一。本種樹干通直，高大偉岸，樹冠整齊，宜作行道樹、庭蔭樹；亦 適合農(nóng)村"四旁"綠化，宜低山營造速生風(fēng)景林、用材林。在較冷地區(qū)也有作為室內(nèi)觀賞植物 栽培的。木材粗糙而堅硬，色淡紅，斷面上現(xiàn)有美麗斑紋，髓線排列甚密，彈力和耐朽力強(qiáng)， 施工容易，可供家具，雕刻，裝飾和車輛制造等用途。
[0003] 黃果銀樺（Grevillea orange marmalade)是山龍眼科銀樺屬常綠中型屏風(fēng)型灌 木，高1~4米，圓形樹冠，枝葉茂盛；葉片灰綠色，長披針形；花橙色或金黃色，三腳架花型， 富含蜜糖，花期為春秋冬。原產(chǎn)澳大利亞，全陽性植物，適應(yīng)于排水良好、肥沃的酸性沙土， 中度耐霜凍、耐旱、耐高溫，抗污染。黃果銀樺是具有澳洲風(fēng)情、地中海風(fēng)情、海濱風(fēng)情和熱 帶風(fēng)情的樹種。澳大利亞廣泛應(yīng)用于路邊街景、庭園綠化、綠籬和盆栽，是具有擋風(fēng)，吸引食 蜜動物的重要植物。
[0004] 常用于培育銀樺苗木的傳統(tǒng)方法為播種繁殖，效率較低，苗木成活率也較低，無 法滿足大批量供應(yīng)的需求?，F(xiàn)有技術(shù)中已有關(guān)于銀樺的培育和快速繁殖技術(shù)如下：CN 102301909A公開了一種橙黃銀樺高效快速繁殖的方法，它通過選擇合適的插條，對插條進(jìn) 行適當(dāng)?shù)奶幚?，在適宜的扦插繁殖時期，扦插在裝有營養(yǎng)土的營養(yǎng)杯中，放置于扦插蔭棚內(nèi) 進(jìn)行繁殖保育管理，再經(jīng)適當(dāng)?shù)脑耘喙芾砑夹g(shù)，而獲得優(yōu)質(zhì)橙黃銀樺種苗；此類扦插的方法 往往存在獲得的扦插苗根系較差，不能形成主根、生根較少、扦插后成活率較低的不足。CN 200910214053. 2公開了一種快速繁育紅花銀樺的方法，主要包括材料的選擇和消毒、愈傷 組織的培養(yǎng)、愈傷組織的增殖、不定芽的誘導(dǎo)及擴(kuò)繁、不定芽的生根培養(yǎng)、移栽和煉苗等步 驟。
[0005] 現(xiàn)有山龍眼科銀樺屬植物組織培養(yǎng)技術(shù)存在污染率高、褐化嚴(yán)重、誘導(dǎo)率低、移植 成活率低、生產(chǎn)成本高，難于適應(yīng)大量苗木需求的發(fā)展。未見一種黃果銀樺的離體培養(yǎng)再生 植株方法的報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種黃果銀樺的離體培養(yǎng)再生植株方法，該方法可克服黃果 銀樺組培繁殖技術(shù)中存在的污染率高、褐化嚴(yán)重、誘導(dǎo)率低、移植成活率低的問題，實(shí)現(xiàn)黃 果銀樺的快速繁殖培育，對山龍眼科銀樺屬植物在中國園林綠化中的廣泛推廣有著重要意 義，對研究山龍眼科銀樺屬植物組織培養(yǎng)，克服具有極其寶貴的學(xué)術(shù)研究價值。
[0007] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下：一種黃果銀樺的離體培養(yǎng)再生植株方法，包括以下步 驟： (1) 采集外植體及其材料處理：采集生長健壯，無病蟲害的5年生黃果銀樺樹冠頂端的 半木質(zhì)化的枝條，剪去枝條上的葉片，保留葉柄，裝入密封袋里帶回試驗(yàn)室；所述材料處理 是先將枝條用洗潔精溶液泡洗15~20分鐘，泡洗過程中不斷搖動瓶子，用流水沖洗干凈，再 用濃度為95%的酒精浸泡10秒鐘，然后用流水沖洗3次，洗凈后切成2~3厘米的帶1~2個 腋芽的莖段； (2) 建立無菌繁殖體：將步驟（1)獲得的莖段在無菌實(shí)驗(yàn)室里用75%酒精滅菌廣2分 鐘，再用0. 1%氯化汞溶液滅菌ΚΓ15分鐘，然后用無菌水清洗3~4次，一瓶一個莖段接種于 MSI培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)；所述培養(yǎng)條件為：室溫2(T30°C，每日 光照8~12小時，光照強(qiáng)度80(T2000LX，培養(yǎng)3(Γ32天；當(dāng)從葉腋萌發(fā)出綠芽，經(jīng)分割、轉(zhuǎn)接 并能夠使綠芽連續(xù)生長繁殖，完成無菌繁殖體的建立； (3) 增殖培養(yǎng)：將步驟（2)獲得的無菌繁殖體接種于MS2的增殖培養(yǎng)基中，放置在人為 控制室溫為3(T32°C，每日光照8?12小時，光照強(qiáng)度80(T2000LX的條件下培養(yǎng)3(Γ32天，從 葉腋萌發(fā)出無菌綠芽，剪取綠芽接種于增殖培養(yǎng)基MS2上，芽叢增殖，培養(yǎng)30天后，芽叢增 殖倍數(shù)5飛倍，在無菌條件下再將其分割轉(zhuǎn)接，經(jīng)過反復(fù)繼代培養(yǎng)擴(kuò)大繁殖； (4) 生根培養(yǎng)：當(dāng)步驟（3)的增殖培養(yǎng)過程中，叢生芽高20毫米以上時，將叢生芽從基 部切下，分割成單株接種于MS3生根培養(yǎng)基中，放置在室溫2(T30°C左右，每日光照8~12小 時，光照強(qiáng)度在80(T2000LX的條件下培養(yǎng)2(Γ25天，苗開始出根，再放置到75%遮蔭條件下 溫室中煉苗疒14天，生根瓶苗葉片展開，莖芽生長健壯，形成完整植株； (5) 移植：將培養(yǎng)得到的根系生長良好的瓶苗移入溫室馴化，瓶苗從人為控制培養(yǎng)條件 并給予營養(yǎng)元素到適應(yīng)自然環(huán)境條件，并自我吸取養(yǎng)份的馴化過程后，將其移植到裝有育 苗營養(yǎng)基質(zhì)的育苗杯中；移植方法是：將瓶中的幼苗小心取出，洗凈黏在幼苗上的培養(yǎng)基， 將幼苗移植到填滿營養(yǎng)基質(zhì)的育苗杯中，每一杯種植一株苗，移植覆土深度剛好蓋住根系， 一般不超過1厘米，壓緊基質(zhì)，使苗根和基質(zhì)緊密接觸，移植完成后淋透定苗水； (6) 幼苗培育：移植后的幼苗在一個月內(nèi)要加強(qiáng)水肥管理及病防蟲防治，并適當(dāng)遮蔭， 保證幼苗成活，當(dāng)幼苗生長穩(wěn)定，長出新芽和新根后，逐步增加光照強(qiáng)度，直到進(jìn)行全光照 常規(guī)管理，幼苗培育至15厘米高時，可移上大一號花盆培育大苗。
[0008] 所述MSI培養(yǎng)基為初代培養(yǎng)基，其制備是將卡拉膠7000mg/L加500ml蒸餾水， 加熱至卡拉膠完全溶解，然后加入已經(jīng)預(yù)先溶解于水中的培養(yǎng)基配方中的營養(yǎng)元素成分， 加水至1000ml，攪拌均勻，pH調(diào)至5.8,裝瓶、滅菌，備用；所述培養(yǎng)基配方中的營養(yǎng)元 素成分及其質(zhì)量配比如下：6?芐基腺嘌呤0.05?5.0mg/L、萘乙酸0.01?0. 5mg/L、NH4N03 990?1650mg/L、KN03 114(Tl900mg/L、CaCl22H20 24(T400mg/L、MgS047H20 74?370mg/L、 ΚΗ2Ρ04 102?170mg/L、ΚΙ 0· 5?0· 83mg/L、H3B03 3· 72?6. 2mg/L、MnS044H20 13. 38?22. 3mg/ L、ZnS047H20 5.16?8.6mg/L、NaM〇022H20 0.15?0.25mg/L、CuS045H20 0.015?0.025mg/L、 C〇C126H20 0· 015?0· 025mg/L、Na2EDTA 22. 38?37. 3mg/L、FeS047H20 16. 68?27. 8mg/L、肌醇 6(Tl00mg/L、煙酸0· 3?0· 5mg/L、鹽酸吡哆醇0· 3?0· 5mg/L、煙酸硫胺素0· 06?0· lmg/L、甘 氨酸 1. 2?2. Omg/L、鹿糖 30000mg/L。
[0009] 所述MS2培養(yǎng)基為增殖培養(yǎng)基，其制備是將卡拉膠7000mg/L加500ml蒸餾水，力口 熱至卡拉膠完全溶解，然后加入已經(jīng)預(yù)先溶解于水中的培養(yǎng)基配方中的營養(yǎng)元素成分，力口 水至1000ml，攪拌均勻，pH調(diào)至5. 8,裝瓶、滅菌，備用；所述培養(yǎng)基配方中的營養(yǎng)元素成分 及其質(zhì)量配比如下：6?芐基腺嘌呤0· 05?0· 2mg/L、萘乙酸0· 1?0· 3mg/L、活性炭1. (Γ3. 0g/ L、NH4N03 990?1650mg/L、KN03 1140?1900mg/L、CaCl22H20 240?400mg/L、MgS047H20 222?370mg/L、KH 2P04 102?170mg/L、KI 0· 5?0· 83mg/L、H3B〇3 3. 72?6. 2mg/L、MnS044H20 13. 38?22. 3mg/L、ZnS047H20 5. 16?8. 6mg/L、NaMo022H20 0· 15?0· 25mg/L、CuS045H20 0. 015?0. 025mg/L、CoC126H20 0. 015?0. 025mg/L、Na2EDTA 22. 38?37. 3mg/L、FeS047H20 16.68?27.811^/1、肌醇60?10011^/1、煙酸0.3?0.511^/1、鹽酸吡哆醇0.3?0.511^/1、煙酸硫 胺素 0.06?0.1mg/L、甘氨酸 1.2?2.0mg/L、鹿糖 30000mg/L。
[0010] 所述MS3培養(yǎng)基為誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基，其制備是將卡拉膠7000mg/L加500ml蒸餾 水，加熱至卡拉膠完全溶解，然后加入已經(jīng)預(yù)先溶解于水中的培養(yǎng)基配方中的營養(yǎng)元素成 分，加水至l〇〇〇ml，攪拌均勻，pH調(diào)至5. 8,裝瓶、滅菌，備用；所述配方中的營養(yǎng)元素成分 及其質(zhì)量配比如下：萘乙酸 (Γ4. Omg/L、活性炭 L (Γ3. Og/L、NH4N03 20(T800mg/L、KN03 250?900mg/L、CaCl22H20 50?200mg/L、MgS047H20 222?370mg/L、Ca(N03)2 200?400mg/L、 KH2P04 102?170mg/L、KI 0· 5?0· 83mg/L、H3B03 3. 72?6. 2mg/L、MnS044H20 13. 38?22. 3mg/ L、ZnS047H20 516?8.6mg/L、NaM〇022H20 0.15?0.25mg/L、CuS045H20 0.015?0.025mg/L、 C〇C126H20 0· 015?0· 025mg/L、Na2EDTA 22. 38?37. 3mg/L、FeS047H20 16. 68?27. 8mg/L、肌醇 5(Tl00mg/L、煙酸 0.25?0.5mg/L、鹽酸吡哆醇 0.5?l.Omg/L、煙酸硫胺素 0.1 ?0.25mg/L、 甘氨酸 l.〇?2.0mg/L、蔗糖 1500(T30000mg/L。
[0011] 優(yōu)選的，MS1、MS2、MS3培養(yǎng)基配方中的營養(yǎng)元素成分及其質(zhì)量配比分別如下： (1)MS1 培養(yǎng)基：6?芐基腺嘌呤 2.5mg/L、萘乙酸 0.25mg/L、NH4N03 1650mg/L、KN03 1900mg/L、CaCl22H20 400mg/L、MgS047H20 370mg/L、KH2P04 170mg/L、ΚΙ 0· 83mg/L、H3B〇3 6. 2mg/L、MnS044H20 22. 3mg/L、ZnS047H20 8. 6mg/L、NaMo022H20 0· 25mg/L、CuS045H20 0· 025mg/L、CoC126H20 0· 025mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeS047H20 27. 8mg/L、肌醇 100mg/ L、煙酸0.5mg/L、鹽酸批咳醇0.5mg/L、煙酸硫胺素0.1mg/L、甘氨酸2.0mg/L、鹿糖 30000mg/L〇
[0012] (2)MS2培養(yǎng)基：6?芐基腺嘌呤0· lmg/L、萘乙酸0.2mg/L、活性炭2.0 g/L、 NH4N〇3 1650mg/L、KN〇3 1900mg/L、CaCl22H20 400mg/L、MgS047H20 370mg/L、KH2P04 170mg/ L、KI 0· 83mg/L、H3B03 6. 2mg/L、MnS044H20 22. 3mg/L、ZnS047H20 8. 6mg/L、NaMo022H20 0· 25mg/L、CuS045H20 0· 025mg/L、C〇C126H20 0· 025mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeS047H20 27.8mg/L、肌醇100mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸批卩多醇0.5mg/L、煙酸硫胺素0.1mg/L、甘氨 酸 2. 0mg/L、鹿糖 30000mg/L。
[0013] (3)MS3 培養(yǎng)基：萘乙酸 3. 0mg/L、活性炭 2. 0g/L、NH4N03 8 00mg/L、KN03 9 00mg/L、 CaCl22H20 200mg/L、MgS047H20 370mg/L、Ca(N03)2 400mg/L、KH2P04 170mg/L、KI 0.83mg/L、 H3B03 6. 2mg/L、MnS044H20 22. 3mg/L、ZnS047H20 8. 6mg/L、NaMo022H20 0· 25mg/L、CuS045H20 0· 025mg/L、CoC126H20 0· 025mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeS047H20 27. 8mg/L、肌醇 100mg/ L、煙酸0.5mg/L、鹽酸批咳醇lmg/L、煙酸硫胺素0.25mg/L、甘氨酸2.0mg/L、鹿糖 30000mg/L〇
[0014] 步驟（5)所述的育苗營養(yǎng)基質(zhì)優(yōu)選采用泥炭土、黃心土和珍珠巖按2:3:1的比例 充分混合得到。
[0015] 步驟（6)所述幼苗在移植后的水肥管理方法優(yōu)選如下：保持基質(zhì)濕潤，空氣相對 濕度在95%以上，防止植株失水，培養(yǎng)溫度25~28°C，蔭棚用75%的遮光網(wǎng)遮光；移植15天 后逐步控制基質(zhì)水分，相對濕度控制在6(Γ80%，促進(jìn)新根新芽發(fā)生。
[0016] 步驟（6)所述幼苗在移植后的病防蟲防治方法優(yōu)選如下：幼苗移植后第三天采用 0. 1%百菌清噴霧消毒滅菌，之后每隔1(Γ15天噴霧一次；當(dāng)有新芽萌發(fā)，新根長出時，噴施 1200~1800倍營養(yǎng)液，根據(jù)幼苗生長狀況，每隔半個月噴施一次。
[0017] 所述營養(yǎng)液由以下質(zhì)量配比的藥品配制而成：NH4N03 70(T900mg/L、ΚΝ03 800?1000mg/L、CaCl22H20 150?250mg/L、MgS047H20 280?400mg/L、Ca(N03)2 300?500mg/ L、KH2P04 120?220mg/L、KI 0.6?1.0mg/L、H3B03 5?8mg/L、MnS044H20 20?25mg/L、 ZnS047H20 6. 5?10mg/L、NaMo022H20 0· 1 ?0· 5mg/L、CuS045H20 0· 01 ?0· 05mg/L、C〇C126H20 0. 01^0. 05mg/L〇
[0018] 所述營養(yǎng)液優(yōu)選由以下質(zhì)量配比的藥品配制而成：NH4N03 8 00mg/L、KN03 9 00mg/ L、CaCl22H20 200mg/L、MgS047H20 370mg/L、Ca(N03)2 400mg/L、KH2P04 170mg/L、KI 0.83mg/ L、H3B03 6. 2mg/L、MnS044H20 22. 3mg/L、ZnS047H20 8. 6mg/L、NaMo022H20 0· 25mg/L、 CuS045H20 0. 025mg/L, CoC126H20 0. 025mg/L〇
[0019] 本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)的有益效果如下：本發(fā)明為原產(chǎn)澳大利亞的黃果銀樺提 供了一種快速繁殖的方法，對山龍眼科銀樺屬植物在中國園林綠化中廣泛推廣有著重要意 義；對研究山龍眼科銀樺屬植物組織培養(yǎng)，克服污染率高、褐化嚴(yán)重、誘導(dǎo)率低、移植成活率 低等組培繁殖技術(shù)具有極其寶貴的學(xué)術(shù)研究價值。

【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面通過實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明，這些實(shí)施例僅用來說明本發(fā)明，并 不限制本發(fā)明的范圍。
[0021] 實(shí)施例1采用以下步驟實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。
[0022] 1、采集外植體及材料處理：在廣東省佛山市三水區(qū)愛嘉農(nóng)場里，采集生長健壯，無 病蟲害的5年生黃果銀樺樹冠頂端的半木質(zhì)化的枝條，剪去枝條上的葉片，保留葉柄，裝入 密封袋里帶回試驗(yàn)室；先將枝條用洗潔精溶液泡洗15分鐘，泡洗過程中不斷搖動瓶子，用 流水沖洗干凈，再用濃度為95%的酒精浸泡10秒鐘，然后用流水沖洗3次，洗凈后切成2~3 厘米的帶1~2個腋芽的莖段。
[0023] 2、建立無菌繁殖體： (1)初代培養(yǎng)基的制備：MSI培養(yǎng)基為初代培養(yǎng)基，其制備是將卡拉膠7000mg/L加 500ml蒸餾水，加熱至卡拉膠完全溶解，然后加入已經(jīng)預(yù)先溶解于水中的培養(yǎng)基配方中的營 養(yǎng)元素成分，加水至l〇〇〇ml，攪拌均勻，pH調(diào)至5.8,裝瓶、滅菌，備用；所述配方中的營養(yǎng) 元素成分及其質(zhì)量配比如下：6?芐基腺嘌呤2. 5mg/L、萘乙酸0. 25mg/L、NH4N03 1650mg/ L、KN03 1 900mg/L、CaCl22H20 400mg/L、S047H20 370mg/L、KH2P04 170mg/L、ΚΙ 0· 83mg/L、 H3B03 6. 2mg/L、MnS044H20 22. 3mg/L、ZnS047H20 8. 6mg/L、NaMo022H20 0· 25mg/L、CuS045H20 0· 025mg/L、CoC126H20 0· 025mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeS047H20 27. 8mg/L、肌醇 100mg/ L、煙酸0.5mg/L、鹽酸批咳醇0.5mg/L、煙酸硫胺素0.1mg/L、甘氨酸2.0mg/L、鹿糖 30000mg/L ； (2)將洗凈后的莖段在無菌實(shí)驗(yàn)室里用75%酒精滅菌1分鐘，再用0. 1%氯化汞溶液滅 菌12分鐘，然后用無菌水清洗3~4次，一瓶一個莖段接種于MSI培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行 培養(yǎng)，誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)，當(dāng)從葉腋萌發(fā)出綠芽，經(jīng)分割、轉(zhuǎn)接并能夠使綠芽連續(xù)生長繁殖，完成 無菌繁殖體的建立；培養(yǎng)條件為：室溫2(T30°C，每日光照10小時，光照強(qiáng)度100(Tl500LX， 培養(yǎng)30天。
[0024] 3、增殖培養(yǎng)： (1) 增殖培養(yǎng)基的制備：MS2培養(yǎng)基為增殖培養(yǎng)基，其制備是將卡拉膠7000mg/L加 500ml蒸餾水，加熱至卡拉膠完全溶解，然后加入已經(jīng)預(yù)先溶解于水中的培養(yǎng)基配方中的營 養(yǎng)元素成分，加水至l〇〇〇ml，攪拌均勻，pH調(diào)至5.8,裝瓶、滅菌，備用；所述配方中的營養(yǎng) 元素成分及其質(zhì)量配比如下：6?芐基腺嘌呤0. lmg/L、萘乙酸0.2mg/L、活性炭2.0 g/L、 NH4N〇3 1650mg/L、KN〇3 1900mg/L、CaCl22H20 400mg/L、MgS047H20 370mg/L、KH2P04 170mg/ L、KI 0· 83mg/L、H3B03 6. 2mg/L、MnS044H20 22. 3mg/L、ZnS047H20 8. 6mg/L、NaMo022H20 0· 25mg/L、CuS045H20 0· 025mg/L、C〇C126H20 0· 025mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeS047H20 27.8mg/L、肌醇100mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸批卩多醇0.5mg/L、煙酸硫胺素0.1mg/L、甘氨 酸 2. Omg/L、鹿糖 30000mg/L ; (2) 將獲得的無菌繁殖體接種于配制好的MS2的增殖培養(yǎng)基中，放置在人為控制室溫 為30°C，每日光照10小時，光照強(qiáng)度1600LX的條件下培養(yǎng)32天，從葉腋萌發(fā)出無菌綠芽， 剪取綠芽接種于增殖培養(yǎng)基MS2上，芽叢增殖，培養(yǎng)30天后，芽叢增殖倍數(shù)6倍，在無菌條 件下再將其分割轉(zhuǎn)接，經(jīng)過反復(fù)繼代培養(yǎng)擴(kuò)大繁殖。
[0025] 4、生根培養(yǎng)： (1) 生根培養(yǎng)基的制備：MS3培養(yǎng)基為誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基，其制備是將卡拉膠7000mg/L 加500ml蒸餾水，加熱至卡拉膠完全溶解，然后加入已經(jīng)預(yù)先溶解于水中的培養(yǎng)基配方中 的營養(yǎng)元素成分，加水至l〇〇〇ml，攪拌均勻，pH調(diào)至5. 8,裝瓶、滅菌，備用；所述配方中的 營養(yǎng)元素成分及其質(zhì)量配比如下：萘乙酸3.0mg/L、活性炭2.0g/L、NH4N0 3 8 00mg/L、KN03 900mg/L、CaCl22H20 200mg/L、MgS047H20 370mg/L、Ca(N03)2 400mg/L、KH2P04 170mg/L、KI 0. 83mg/L> H3BO3 6. 2mg/L> MnS044H20 22. 3mg/L> ZnS047H20 8. 6mg/L> NaMo022H20 0. 25mg/L> CuS045H20 0.025mg/L、CoCl26H20 0.025mg/L、Na2EDTA 37.3mg/L、FeS047H20 27.8mg/L、肌醇 100mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸批卩多醇lmg/L、煙酸硫胺素0.25mg/L、甘氨酸2.0mg/L、鹿糖 30000mg/L ； (2) 增殖培養(yǎng)過程中，叢生芽高22毫米以上時，將叢生芽從基部切下，分割成單株接種 于MS3生根培養(yǎng)基中，放置在室溫2(T30°C左右，每日光照10小時，光照強(qiáng)度在1800LX的條 件下培養(yǎng)22天，苗開始出根，再放置到75%遮蔭條件下溫室中煉苗10天，生根瓶苗葉片展 開，莖芽生長健壯，形成完整植株。
[0026] 5、移植： (1) 馴化：將培養(yǎng)得到的根系生長良好的瓶苗移入溫室馴化，使瓶苗從人為控制培養(yǎng)條 件并給予營養(yǎng)元素到適應(yīng)自然環(huán)境條件，并自我吸取養(yǎng)份； (2) 移植：用泥炭土、黃心土和珍珠巖按2:3:1的比例充分混合制得營養(yǎng)基質(zhì)，填滿到 育苗杯中，將瓶中的幼苗小心取出，洗凈黏在幼苗上的培養(yǎng)基，將幼苗移植到填滿營養(yǎng)基質(zhì) 的育苗杯，每一杯種植一株苗，移植覆土深度剛好蓋住根系，一般不超過1厘米，壓緊基質(zhì)， 使苗根和基質(zhì)緊密接觸，移植完成后淋透定苗水。
[0027] 6、幼苗培育：移植后的幼苗在一個月內(nèi)要加強(qiáng)水肥管理及病防蟲防治，并適當(dāng)遮 蔭，保證幼苗成活，當(dāng)幼苗生長穩(wěn)定，長出新芽和新根后，逐步增加光照強(qiáng)度，直到進(jìn)行全光 照常規(guī)管理，幼苗培育至15厘米高時，可移上大一號花盆培育大苗。
[0028] 水肥管理的方法：保持基質(zhì)濕潤，空氣相對濕度在95%以上，防止植株失水，培養(yǎng) 溫度25~28°C，蔭棚用75%的遮光網(wǎng)遮光；移植15天之后逐步控制基質(zhì)水分，相對濕度控制 在75?80%，促進(jìn)新根新芽發(fā)生。
[0029] 病蟲防治方法：幼苗移植后第三天采用0. 1%百菌清噴霧消毒滅菌，之后每隔12 天噴霧一次；當(dāng)有新芽萌發(fā)，新根長出時，噴施1500倍營養(yǎng)液，根據(jù)幼苗生長狀況，每隔 半個月噴施一次；所噴施的營養(yǎng)液是由以下配比的藥品配制得到：NH 4N03 8 00mg/L、ΚΝ03 900mg/L、CaCl22H20 200mg/L、MgS047H20 370mg/L、Ca(N03)2 400mg/L、KH2P04 170mg/L、KI 0. 83mg/L> H3BO3 6. 2mg/L> MnS044H20 22. 3mg/L> ZnS047H20 8. 6mg/L> NaMo022H20 0. 25mg/L> CuS045H20 0. 025mg/L, CoC126H20 0. 025mg/L〇
[0030] 實(shí)施例2采用以下步驟實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。
[0031] 1、采集外植體及材料處理：在廣東省佛山市三水區(qū)愛嘉農(nóng)場里，采集生長健壯，無 病蟲害的5年生黃果銀樺樹冠頂端的半木質(zhì)化的枝條，剪去枝條上的葉片，保留葉柄，裝入 密封袋里帶回試驗(yàn)室；先將枝條用洗潔精溶液泡洗18分鐘，泡洗過程中不斷搖動瓶子，用 流水沖洗干凈，再用濃度為95%的酒精浸泡10秒鐘，然后用流水沖洗3次，洗凈后切成2~3 厘米的帶1~2個腋芽的莖段。
[0032] 2、建立無菌繁殖體： (1) 初代培養(yǎng)基的制備：MSI培養(yǎng)基為初代培養(yǎng)基，其制備是將卡拉膠7000mg/L加 500ml蒸餾水，加熱至卡拉膠完全溶解，然后加入已經(jīng)預(yù)先溶解于水中的培養(yǎng)基配方中的 營養(yǎng)元素成分，加水至l〇〇〇ml，攪拌均勻，pH調(diào)至5. 8,裝瓶、滅菌，備用；所述配方中的營 養(yǎng)元素成分及其質(zhì)量配比如下：6?芐基腺嘌呤3. Omg/L、萘乙酸0. 2mg/L、NH4N03 9 90mg/ L、KN03 1140mg/L、CaCl22H20 240mg/L、MgS047H20 222mg/L、KH2P04 102mg/L、KI 0.5mg/L、 H3B03 3.7mg/L、MnS044H20 13.38mg/L、ZnS047H20 5.2mg/L、NaMo022H20 0.15mg/L、CuS045H20 0· 015mg/L、C〇C126H20 0· 015mg/L、Na2EDTA 22. 38mg/L、FeS047H20 16. 68mg/L、肌醇 60mg/ L、煙酸0.3mg/L、鹽酸批卩多醇(X3mg/L、煙酸硫胺素0.06mg/L、甘氨酸L2mg/L、鹿糖 30000mg/L ； (2) 將洗凈后的莖段在無菌實(shí)驗(yàn)室里用75%酒精滅菌1分鐘，再用0. 1%氯化汞溶液滅 菌10分鐘，然后用無菌水清洗3~4次，一瓶一個莖段接種于MSI培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行 培養(yǎng)，誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)，當(dāng)從葉腋萌發(fā)出綠芽，經(jīng)分割、轉(zhuǎn)接并能夠使綠芽連續(xù)生長繁殖，完成 無菌繁殖體的建立；培養(yǎng)條件為：室溫2(T30°C，每日光照8小時，光照強(qiáng)度180(T2000LX， 培養(yǎng)31天。
[0033] 3、增殖培養(yǎng)： (1)增殖培養(yǎng)基的制備：MS2培養(yǎng)基為增殖培養(yǎng)基，其制備是將卡拉膠7000mg/L加 500ml蒸餾水，加熱至卡拉膠完全溶解，然后加入已經(jīng)預(yù)先溶解于水中的培養(yǎng)基配方中的 營養(yǎng)元素成分，加水至l〇〇〇ml，攪拌均勻，pH調(diào)至5. 8,裝瓶、滅菌，備用；所述配方中的營 養(yǎng)元素成分及其質(zhì)量配比如下：6?芐基腺嘌呤0.05mg/L、萘乙酸0.3mg/L、活性炭l.Og/ L、NH4N03 9 90mg/L、KN03 1140mg/L、CaCl22H20 240mg/L、MgS047H20 222mg/L、KH2P04 102mg/ L、KI 0· 5mg/L、H3B03 3. 7mg/L、MnS044H20 13. 38mg/L、ZnS047H20 5. 2mg/L、NaMo022H20 0.15mg/L、CuS045H 20 0.015mg/L、CoCl26H20 0.015mg/L、Na2EDTA 22.38mg/L、FeS047H20 16.68mg/L、肌醇60mg/L、煙酸0.3mg/L、鹽酸批卩多醇0.3mg/L、煙酸硫胺素0.06mg/L、甘氨 酸 1. 2mg/L、鹿糖 30000mg/L ; (2)將獲得的無菌繁殖體接種于配制好的MS2的增殖培養(yǎng)基中，放置在人為控制室溫 為31°C，每日光照12小時，光照強(qiáng)度1200LX的條件下培養(yǎng)31天，從葉腋萌發(fā)出無菌綠芽， 剪取綠芽接種于增殖培養(yǎng)基MS2上，芽叢增殖，培養(yǎng)30天后，芽叢增殖倍數(shù)5倍，在無菌條 件下再將其分割轉(zhuǎn)接，經(jīng)過反復(fù)繼代培養(yǎng)擴(kuò)大繁殖。
[0034] 4、生根培養(yǎng)： (1) 生根培養(yǎng)基的制備：MS3培養(yǎng)基為誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基，其制備是將卡拉膠7000mg/ L加500ml蒸餾水，加熱至卡拉膠完全溶解，然后加入已經(jīng)預(yù)先溶解于水中的培養(yǎng)基配 方中的營養(yǎng)元素成分，加水至l〇〇〇ml，攪拌均勻，pH調(diào)至5. 8,裝瓶、滅菌，備用；所述配 方中的營養(yǎng)元素成分及其質(zhì)量配比如下：2. Omg/L、活性炭1. Og/L、NH4N03 6 00mg/L、ΚΝ03 800mg/L、CaCl22H20 150mg/L、MgS047H20 222mg/L、Ca(N03)2 300mg/L、KH2P04 102mg/L、KI 0.5mg/L、H3B03 3.7mg/L、MnS044H20 13.38mg/L、ZnS047H20 5.2mg/L、NaMo022H20 0.15mg/L、 CuS045H20 0.015mg/L、CoCl26H20 0.015mg/L、Na2EDTA 22.38mg/L、FeS047H20 16.68mg/L、肌 醇80mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸批卩多醇lmg/L、煙酸硫胺素0.25mg/L、甘氨酸2.0mg/L、鹿 糖 28000mg/L ; (2) 增殖培養(yǎng)過程中，叢生芽高25毫米以上時，將叢生芽從基部切下，分割成單株接種 于MS3生根培養(yǎng)基中，放置在室溫2(T30°C左右，每日光照11小時，光照強(qiáng)度在1400LX的 條件下培養(yǎng)25天，苗開始出根，再放置到75%遮蔭條件下溫室中煉苗7天，生根瓶苗葉片展 開，莖芽生長健壯，形成完整植株。
[0035] 5、移植： (1) 馴化：將培養(yǎng)得到的根系生長良好的瓶苗移入溫室馴化，使瓶苗從人為控制培養(yǎng)條 件并給予營養(yǎng)元素到適應(yīng)自然環(huán)境條件，并自我吸取養(yǎng)份； (2) 移植：用泥炭土、黃心土和珍珠巖按2:3:1的比例充分混合制得營養(yǎng)基質(zhì)，填滿到 育苗杯中，將瓶中的幼苗小心取出，洗凈黏在幼苗上的培養(yǎng)基，將幼苗移植到填滿營養(yǎng)基質(zhì) 的育苗杯，每一杯種植一株苗，移植覆土深度剛好蓋住根系，一般不超過1厘米，壓緊基質(zhì)， 使苗根和基質(zhì)緊密接觸，移植完成后淋透定苗水。
[0036] 6、幼苗培育：移植后的幼苗在一個月內(nèi)要加強(qiáng)水肥管理及病防蟲防治，并適當(dāng)遮 蔭，保證幼苗成活，當(dāng)幼苗生長穩(wěn)定，長出新芽和新根后，逐步增加光照強(qiáng)度，直到進(jìn)行全光 照常規(guī)管理，幼苗培育至15厘米高時，可移上大一號花盆培育大苗。
[0037] 水肥管理的方法：保持基質(zhì)濕潤，空氣相對濕度在95%以上，防止植株失水，培養(yǎng) 溫度25~28°C，蔭棚用75%的遮光網(wǎng)遮光；移植15天之后逐步控制基質(zhì)水分，相對濕度控制 在6(Γ65%，促進(jìn)新根新芽發(fā)生。
[0038] 病蟲防治方法：幼苗移植后第三天采用0. 1%百菌清噴霧消毒滅菌，之后每隔15天 噴霧一次；當(dāng)有新芽萌發(fā)，新根長出時，噴施1200倍營養(yǎng)液，根據(jù)幼苗生長狀況，每隔半個 月噴施一次；所噴施的營養(yǎng)液是由以下配比的藥品配制得到：NH 4N03 9 00mg/L、KN03 8 00mg/ L、CaCl22H20 150mg/L、MgS047H20 280mg/L、Ca(N03)2 300mg/L、KH2P04 220mg/L、KI l.Omg/ L、H3B03 8mg/L、MnS044H20 20mg/L、ZnS047H20 6. 5mg/L、NaMo022H20 0· lmg/L、CuS045H20 0· Olmg/L、CoC126H20 0· Olmg/L。
[0039] 實(shí)施例3采用以下步驟實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。
[0040] 1、采集外植體及材料處理：在廣東省佛山市三水區(qū)愛嘉農(nóng)場里，采集生長健壯，無 病蟲害的5年生黃果銀樺樹冠頂端的半木質(zhì)化的枝條，剪去枝條上的葉片，保留葉柄，裝入 密封袋里帶回試驗(yàn)室；先將枝條用洗潔精溶液泡洗20分鐘，泡洗過程中不斷搖動瓶子，用 流水沖洗干凈，再用濃度為95%的酒精浸泡10秒鐘，然后用流水沖洗3次，洗凈后切成2~3 厘米的帶1~2個腋芽的莖段。
[0041] 2、建立無菌繁殖體： (1) 初代培養(yǎng)基的制備：MSI培養(yǎng)基為初代培養(yǎng)基，其制備是將卡拉膠7000mg/L加 500ml蒸餾水，加熱至卡拉膠完全溶解，然后加入已經(jīng)預(yù)先溶解于水中的培養(yǎng)基配方中的 營養(yǎng)元素成分，加水至1000ml，攪拌均勻，pH調(diào)至5. 8,裝瓶、滅菌，備用；所述配方中的營 養(yǎng)元素成分及其質(zhì)量配比如下：6?芐基腺嘌呤5.0mg/L、萘乙酸0. 5mg/L、NH4N03 1250mg/ L、KN03 1 450mg/L、CaCl22H20 320mg/L、MgS047H20 290mg/L、KH2P04 1 40mg/L、ΚΙ 0· 65mg/ L、H3B03 4. 82mg/L、MnS044H20 18. 55mg/L、ZnS047H20 6. 52mg/L、NaMo022H20 0· 2mg/L、 CuS045H20 0· 02mg/L、C〇C126H20 0· 02mg/L、Na2EDTA 28. 5mg/L、FeS047H20 21. 5mg/L、肌醇 80mg/L、煙酸0.4mg/L、鹽酸批卩多醇0.4mg/L、煙酸硫胺素0.08mg/L、甘氨酸1.6mg/L、鹿糖 30000mg/L ； (2) 將洗凈后的莖段在無菌實(shí)驗(yàn)室里用75%酒精滅菌2分鐘，再用0. 1%氯化汞溶液滅 菌15分鐘，然后用無菌水清洗3~4次，一瓶一個莖段接種于MSI培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行 培養(yǎng)，誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)，當(dāng)從葉腋萌發(fā)出綠芽，經(jīng)分割、轉(zhuǎn)接并能夠使綠芽連續(xù)生長繁殖，完成 無菌繁殖體的建立；培養(yǎng)條件為：室溫2(T30°C，每日光照12小時，光照強(qiáng)度800LX，培養(yǎng)32 天。
[0042] 3、增殖培養(yǎng)： (1) 增殖培養(yǎng)基的制備：MS2培養(yǎng)基為增殖培養(yǎng)基，其制備是將卡拉膠7000mg/L加 500ml蒸餾水，加熱至卡拉膠完全溶解，然后加入已經(jīng)預(yù)先溶解于水中的培養(yǎng)基配方中的營 養(yǎng)元素成分，加水至l〇〇〇ml，攪拌均勻，pH調(diào)至5.8,裝瓶、滅菌，備用；所述配方中的營養(yǎng) 元素成分及其質(zhì)量配比如下：6?芐基腺嘌呤0.2mg/L、萘乙酸0. lmg/L、活性炭3.0 g/L、 NH4N〇3 1250mg/L、KN〇3 1450mg/L、CaCl22H20 320mg/L、MgS047H20 290mg/L、KH2P04 1 40mg/ L、KI 0· 65mg/L、H3B03 4. 82mg/L、MnS044H20 18. 55mg/L、ZnS047H20 6. 52mg/L、NaMo022H20 0. 2mg/L、CuS045H20 0.02mg/L、CoCl26H20 0.02mg/L、Na2EDTA 28.5mg/L、FeS047H20 21.5mg/ L、肌醇80mg/L、煙酸0.4mg/L、鹽酸批卩多醇0.4mg/L、煙酸硫胺素0.08mg/L、甘氨酸 1. 6mg/L、鹿糖 30000mg/L ; (2) 將獲得的無菌繁殖體接種于配制好的MS2的增殖培養(yǎng)基中，放置在人為控制室溫 為32°C，每日光照8小時，光照強(qiáng)度2000LX的條件下培養(yǎng)30天，從葉腋萌發(fā)出無菌綠芽，剪 取綠芽接種于增殖培養(yǎng)基MS2上，芽叢增殖，培養(yǎng)30天后，芽叢增殖倍數(shù)5. 5倍，在無菌條 件下再將其分割轉(zhuǎn)接，經(jīng)過反復(fù)繼代培養(yǎng)擴(kuò)大繁殖。
[0043] 4、生根培養(yǎng)： (1) 生根培養(yǎng)基的制備：MS3培養(yǎng)基為誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基，其制備是將卡拉膠7000mg/L 加500ml蒸餾水，加熱至卡拉膠完全溶解，然后加入已經(jīng)預(yù)先溶解于水中的培養(yǎng)基配方中 的營養(yǎng)元素成分，加水至l〇〇〇ml，攪拌均勻，pH調(diào)至5. 8,裝瓶、滅菌，備用；所述配方中的 營養(yǎng)元素成分及其質(zhì)量配比如下：4.0mg/L、活性炭3.0g/L、NH4N0 3 200mg/L、KN03 250mg/ L、CaCl22H20 100mg/L、MgS047H20 320mg/L、Ca(N03)2 200mg/L、KH2P04 1 40mg/L、KI 0.65mg/ L、H3B03 4. 82mg/L、MnS044H20 18. 85mg/L、ZnS047H20 6. 52mg/L、NaMo022H20 0· 2mg/L、 CuS045H20 0· 02mg/L、C〇C126H20 0· 02mg/L、Na2EDTA 28. 5mg/L、FeS047H20 21. 5mg/L、肌醇 50mg/L、煙酸0.25mg/L、鹽酸批卩多醇0.5mg/L、煙酸硫胺素0.1mg/L、甘氨酸l.Omg/L、鹿 糖 15000mg/L; (2) 增殖培養(yǎng)過程中，叢生芽高20毫米以上時，將叢生芽從基部切下，分割成單株接種 于MS3生根培養(yǎng)基中，放置在室溫2(T30°C左右，每日光照9小時，光照強(qiáng)度在1700LX的條 件下培養(yǎng)20天，苗開始出根，再放置到75%遮蔭條件下溫室中煉苗14天，生根瓶苗葉片展 開，莖芽生長健壯，形成完整植株。
[0044] 5、移植： (1) 馴化：將培養(yǎng)得到的根系生長良好的瓶苗移入溫室馴化，使瓶苗從人為控制培養(yǎng)條 件并給予營養(yǎng)元素到適應(yīng)自然環(huán)境條件，并自我吸取養(yǎng)份； (2) 移植：用泥炭土、黃心土和珍珠巖按2:3:1的比例充分混合制得營養(yǎng)基質(zhì)，填滿到 育苗杯中，將瓶中的幼苗小心取出，洗凈黏在幼苗上的培養(yǎng)基，將幼苗移植到填滿營養(yǎng)基質(zhì) 的育苗杯，每一杯種植一株苗，移植覆土深度剛好蓋住根系，一般不超過1厘米，壓緊基質(zhì)， 使苗根和基質(zhì)緊密接觸，移植完成后淋透定苗水。
[0045] 6、幼苗培育：移植后的幼苗在一個月內(nèi)要加強(qiáng)水肥管理及病防蟲防治，并適當(dāng)遮 蔭，保證幼苗成活，當(dāng)幼苗生長穩(wěn)定，長出新芽和新根后，逐步增加光照強(qiáng)度，直到進(jìn)行全光 照常規(guī)管理，幼苗培育至15厘米高時，可移上大一號花盆培育大苗。
[0046] 水肥管理的方法：保持基質(zhì)濕潤，空氣相對濕度在95%以上，防止植株失水，培養(yǎng) 溫度25~28°C，蔭棚用75%的遮光網(wǎng)遮光；移植15天之后逐步控制基質(zhì)水分，相對濕度控制 在65?75%，促進(jìn)新根新芽發(fā)生。
[0047] 病蟲防治方法：幼苗移植后第三天采用0. 1%百菌清噴霧消毒滅菌，之后每隔10 天噴霧一次；當(dāng)有新芽萌發(fā)，新根長出時，噴施1800倍營養(yǎng)液，根據(jù)幼苗生長狀況，每隔 半個月噴施一次；所噴施的營養(yǎng)液是由以下配比的藥品配制得到：NH 4N03 700mg/L、ΚΝ03 1000mg/L、CaCl22H20 250mg/L、MgS047H20 400mg/L、Ca(N03)2 500mg/L、KH2P04 120mg/L、 KI 0· 6mg/L、H3B03 5mg/L、MnS044H20 25mg/L、ZnS047H20 10mg/L、NaMo022H20 0· 5mg/L、 CuS045H20 0. 05mg/L, CoC126H20 0. 05mg/L〇
【權(quán)利要求】
1. 一種黃果銀樺的離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于：包括以下步驟： (1) 采集外植體及其材料處理：采集生長健壯，無病蟲害的5年生黃果銀樺樹冠頂端的 半木質(zhì)化的枝條，剪去枝條上的葉片，保留葉柄，裝入密封袋里帶回試驗(yàn)室；所述材料處理 是先將枝條用洗潔精溶液泡洗15~20分鐘，泡洗過程中不斷搖動瓶子，用流水沖洗干凈，再 用濃度為95%的酒精浸泡10秒鐘，然后用流水沖洗3次，洗凈后切成2~3厘米的帶1~2個 腋芽的莖段； (2) 建立無菌繁殖體：將步驟（1)獲得的莖段在無菌實(shí)驗(yàn)室里用75%酒精滅菌廣2分 鐘，再用0. 1%氯化汞溶液滅菌ΚΓ15分鐘，然后用無菌水清洗3~4次，一瓶一個莖段接種于 MSI培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)；所述培養(yǎng)條件為：室溫2(T30°C，每日 光照8~12小時，光照強(qiáng)度80(T2000LX，培養(yǎng)3(Γ32天；當(dāng)從葉腋萌發(fā)出綠芽，經(jīng)分割、轉(zhuǎn)接 并能夠使綠芽連續(xù)生長繁殖，完成無菌繁殖體的建立； (3) 增殖培養(yǎng)：將步驟（2)獲得的無菌繁殖體接種于MS2的增殖培養(yǎng)基中，放置在人為 控制室溫為3(T32°C，每日光照8?12小時，光照強(qiáng)度80(T2000LX的條件下培養(yǎng)3(Γ32天，從 葉腋萌發(fā)出無菌綠芽，剪取綠芽接種于增殖培養(yǎng)基MS2上，芽叢增殖，培養(yǎng)30天后，芽叢增 殖倍數(shù)5飛倍，在無菌條件下再將其分割轉(zhuǎn)接，經(jīng)過反復(fù)繼代培養(yǎng)擴(kuò)大繁殖； (4) 生根培養(yǎng)：當(dāng)步驟（3)的增殖培養(yǎng)過程中，叢生芽高20毫米以上時，將叢生芽從基 部切下，分割成單株接種于MS3生根培養(yǎng)基中，放置在室溫2(T30°C左右，每日光照8~12小 時，光照強(qiáng)度在80(T2000LX的條件下培養(yǎng)2(Γ25天，苗開始出根，再放置到75%遮蔭條件下 溫室中煉苗疒14天，生根瓶苗葉片展開，莖芽生長健壯，形成完整植株； (5) 移植：將培養(yǎng)得到的根系生長良好的瓶苗移入溫室馴化，瓶苗從人為控制培養(yǎng)條件 并給予營養(yǎng)元素到適應(yīng)自然環(huán)境條件，并自我吸取養(yǎng)份的馴化過程后，將其移植到裝有育 苗營養(yǎng)基質(zhì)的育苗杯中；移植方法是：將瓶中的幼苗小心取出，洗凈黏在幼苗上的培養(yǎng)基， 將幼苗移植到填滿營養(yǎng)基質(zhì)的育苗杯中，每一杯種植一株苗，移植覆土深度剛好蓋住根系， 一般不超過1厘米，壓緊基質(zhì)，使苗根和基質(zhì)緊密接觸，移植完成后淋透定苗水； (6) 幼苗培育：移植后的幼苗在一個月內(nèi)要加強(qiáng)水肥管理及病防蟲防治，并適當(dāng)遮蔭， 保證幼苗成活，當(dāng)幼苗生長穩(wěn)定，長出新芽和新根后，逐步增加光照強(qiáng)度，直到進(jìn)行全光照 常規(guī)管理，幼苗培育至15厘米高時，可移上大一號花盆培育大苗。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃果銀樺的離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于：所述MSI 培養(yǎng)基為初代培養(yǎng)基，其制備是將卡拉膠7〇〇〇mg/L加500ml蒸饋水，加熱至卡拉膠完全 溶解，然后加入已經(jīng)預(yù)先溶解于水中的培養(yǎng)基配方中的營養(yǎng)元素成分，加水至l〇〇〇ml，攪 拌均勻，pH調(diào)至5. 8,裝瓶、滅菌，備用；所述培養(yǎng)基配方中的營養(yǎng)元素成分及其質(zhì)量配比 如下：6?芐基腺嘌呤 0· 05?5. Omg/L、萘乙酸 0· 01?0· 5mg/L、NH4N03 99(Tl650mg/L、ΚΝ03 1140?1900mg/L、CaCl22H20 240?400mg/L、MgS047H20 74?370mg/L、KH2P04 102?170mg/L、KI 0· 5?0· 83mg/L、H3B03 3. 72?6. 2mg/L、MnS044H20 13. 38?22. 3mg/L、ZnS047H20 5. 16?8. 6mg/ L、NaMo022H20 0· 15?0· 25mg/L、CuS045H20 0· 015?0· 025mg/L、C〇C126H20 0· 015?0· 025mg/ L、Na2EDTA 22. 38?37. 3mg/L、FeS047H20 16. 68?27. 8mg/L、肌醇 6(Tl00mg/L、煙酸 0· 3?0· 5mg/L、鹽酸批咳醇0· 3?0· 5mg/L、煙酸硫胺素0· 06?0· lmg/L、甘氨酸1. 2?2. Omg/L、 鹿糖 30000mg/L。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃果銀樺的離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于：所述MS2 培養(yǎng)基為增殖培養(yǎng)基，其制備是將卡拉膠7〇〇〇mg/L加500ml蒸饋水，加熱至卡拉膠完全 溶解，然后加入已經(jīng)預(yù)先溶解于水中的培養(yǎng)基配方中的營養(yǎng)元素成分，加水至l〇〇〇ml，攪 拌均勻，pH調(diào)至5. 8,裝瓶、滅菌，備用；所述培養(yǎng)基配方中的營養(yǎng)元素成分及其質(zhì)量配 比如下：6?芐基腺嘌呤0· 05?2mg/L、萘乙酸（λ 1?3mg/L、活性炭L (Γ3. Og/L、ΝΗ4Ν03 990?1650mg/L、KN03 114(Tl900mg/L、CaCl22H20 24(T400mg/L、MgS047H20 222?370mg/L、 KH2P04 102?170mg/L、KI 0· 5?0· 83mg/L、H3B03 3. 72?6. 2mg/L、MnS044H20 13. 38?22. 3mg/ L、ZnS047H20 5.16?8.6mg/L、NaM〇022H20 0.15?0.25mg/L、CuS045H20 0.015?0.025mg/L、 C〇C126H20 0· 015?0· 025mg/L、Na2EDTA 22. 38?37. 3mg/L、FeS047H20 16. 68?27. 8mg/L、肌醇 6(Tl00mg/L、煙酸0.3?0.5mg/L、鹽酸吡哆醇0.3?0.5mg/L、煙酸硫胺素0.06?0.1mg/L、甘 氨酸 1. 2?2. Omg/L、鹿糖 30000mg/L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃果銀樺的離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于：所述 MS3培養(yǎng)基為誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基，其制備是將卡拉膠7000mg/L加500ml蒸餾水，加熱至 卡拉膠完全溶解，然后加入已經(jīng)預(yù)先溶解于水中的培養(yǎng)基配方中的營養(yǎng)元素成分，加水 至1000ml，攪拌均勻，pH調(diào)至5.8,裝瓶、滅菌，備用；所述配方中的營養(yǎng)元素成分及其 質(zhì)量配比如下：萘乙酸 (Γ4. Omg/L、活性炭 L (Γ3. Og/L、NH4N03 20(T800mg/L、KN03 250?900mg/L、CaCl22H20 50?200mg/L、MgS047H20 222?370mg/L、Ca(N03)2 200?400mg/L、 KH2P04 102?170mg/L、KI 0· 5?0· 83mg/L、H3B03 3. 72?6. 2mg/L、MnS044H20 13. 38?22. 3mg/ L、ZnS047H20 5.16?8.6mg/L、NaM〇022H20 0.15?0.25mg/L、CuS045H20 0.015?0.025mg/L、 C〇C126H20 0· 015?0· 025mg/L、Na2EDTA 22. 38?37. 3mg/L、FeS047H20 16. 68?27. 8mg/L、肌醇 5(Tl00mg/L、煙酸 0.25?0.5mg/L、鹽酸吡哆醇 0.5?l.Omg/L、煙酸硫胺素 0.1 ?0.25mg/L、 甘氨酸 l.〇?2.0mg/L、蔗糖 1500(T30000mg/L。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述黃果銀樺的離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于：步驟（5)所述 的育苗營養(yǎng)基質(zhì)是泥炭土、黃心土和珍珠巖按2:3:1的比例充分混合得到。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述黃果銀樺的離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于：步驟（6)所 述幼苗在移植后的水肥管理方法是：保持基質(zhì)濕潤，空氣相對濕度在95%以上，防止植株失 水，培養(yǎng)溫度25~28°C，蔭棚用75%的遮光網(wǎng)遮光；移植15天后逐步控制基質(zhì)水分，相對濕 度控制在6(Γ80%，促進(jìn)新根新芽發(fā)生。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述黃果銀樺的離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于：步驟（6)所述 幼苗在移植后的病防蟲防治方法是：幼苗移植后第三天采用〇. 1%百菌清噴霧消毒滅菌，之 后每隔1(Γ15天噴霧一次；當(dāng)有新芽萌發(fā)，新根長出時，噴施120(Γ1800倍營養(yǎng)液，根據(jù)幼苗 生長狀況，每隔半個月噴施一次。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述黃果銀樺的離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于：所述營養(yǎng)液 是由以下質(zhì)量配比的藥品配制而成：ΝΗ4Ν0 3 70(T900mg/L、KN03 80(Tl000mg/L、CaCl22H20 150?250mg/L、MgS0 47H20 280?400mg/L、Ca(N03)2 300?500mg/L、KH2P04 120?220mg/L、KI 0· 6?1. 0mg/L、H3B03 5?8mg/L、MnS044H20 20?25mg/L、ZnS047H20 6. 5?10mg/L、NaMo022H20 0· 1 ?0· 5mg/L、CuS045H20 0· 01 ?0· 05mg/L、C〇C126H20 0· 01 ?0· 05mg/L。
【文檔編號】A01H4/00GK104145821SQ201410420044
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年8月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月25日
【發(fā)明者】韓宙 申請人:深圳市公園管理中心