一種牛樟菌的液態碳氮源培養基及培養方法
【專利摘要】本發明涉及一種牛樟菌的液態碳氮源培養基。所述的培養基包含以下重量份的組分：牛樟木萃取的營養液5%-10%，葡萄糖10%-20%，可溶性淀粉0.5%-2%，酵母0.1%-5%，麥芽糖0.1%-20%，蛋白5%-10%，蔬菜汁2%-6%，固化劑0.5-5%，水余量。采用該培養基進行牛樟菌培養的方法為先將菌種活化，再將活化的菌種進行搖瓶培養獲得牛樟菌體，再將牛樟菌體烘干制得牛樟干燥菌塊，最后將干燥菌塊進行休眠。采用本發明所述的培養基進行牛樟菌培養時，可提高牛樟菌的產量，也提高了其三萜類的含量，還避免傳統的液態培養基培養時其他微生物的污染。
【專利說明】一種牛樟菌的液態碳氮源培養基及培養方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種真菌培養基，具體涉及一種牛樟菌的液態碳氮源培養基及培養方法。
【背景技術】
[0002]牛樟芝(Taiwanofungus camphorates),又名牛樟燕或樟芝，屬于真菌界中的擔子菌門(Basid1mycota)、擔子菌亞(Basid1mycotina)、同擔子菌綱(Homobasid1mycetes)、無折菌目(Aphyllophorales)、多孔菌科(Polyporaceae)、薄孔菌屬(Antrodia)。牛樟芝自身富含的麥角固醇三萜類化合物和多醣體具有顯著的生理活性，可迅速有效地找到癌細胞，并侵入癌細胞誘導其凋亡，同時大幅度提升人體自身免疫系統，以達到抗癌強體的目的，因此，抗癌效果顯著。牛樟芝的生長經歷了菌絲體、類子實體菌包及子實體的過程，研究證實 ，無論是野生的還是人工栽培的子實體均含有麥角固醇三萜類化合物，而無論是野生的還是人工栽培的的菌絲體都不含麥角固醇三萜類化合物。
[0003]牛樟芝只生長在臺灣的保育樹種牛樟木上，為臺灣特有菇類，也是目前世界是最珍貴的真菌。但野生牛樟芝子實體取得不易，且價格昂貴，且野生牛樟芝子實體三萜類不易萃取出，且萃取成本高。因此，目前業者希望通過實驗室人工培養的方式來培養產生大量牛樟菌，以萃取其三萜類成分。目前多數采用固態培養方式以培養出大量牛樟菌菌絲體，但牛樟菌菌絲體生長布滿在固態培養基表面后，其生長速度就會開始減慢，因此，如何提高人工培養的牛樟菌的生長速度，提高牛樟菌的產量是值得探討的研究的問題。
【發明內容】
[0004]針對上述現有技術的不足，本發明提供牛樟菌的液態碳氮源培養基。
[0005]本發明的技術方案如下:
一種牛樟菌的液態碳氮源培養基，所述的培養基包含以下重量份的組分:
牛樟木萃取的營養液 5%-10%，
葡萄糖10%-20%，
可溶性淀粉0.5%-2%，
酵母0.1%-5%，
麥芽糖0.1%-20%，
蛋白胨5%-10%，
蔬菜汁2%-6%，
固化劑0.5-5%，
水余量。
[0006]優選的，所述的葡萄糖、可溶性淀粉、酵母及麥芽糖的重量百分比為(5-12):(0.8-3):(1.2-3.5):((6-12)。
[0007]優選的，所述的水為二次蒸餾水。
[0008]優選的，所述的蔬菜汁為胡蘿卜汁。
[0009]優選的，所述的固化劑為瓊脂。
[0010]所述的培養基配制步驟為:將重量百分比為5%_10%的牛樟木萃取的營養液、10%-20%的葡萄糖、0.5%-2%的可溶性淀粉、0.1%-5%的酵母、0.1%-20%的麥芽糖、5%_10%的蛋白胨、2%_6%的蔬菜汁、0.5-5%的固化劑、加水配制成混合溶液，煮沸溶解，加熱至50-60°C濃縮 0.5-lh。
[0011]采用如上所述的培養基進行牛樟菌培養的方法，包括以下步驟:
(1)菌種活化:從斜面試管將菌種接種于培養皿中，培養,得活化的菌種；
(2)取步驟(1)中培養后的活化的菌種0.5-2cm2置入裝有50_100ml培養基的三角瓶中培養獲得牛樟菌體；
(3)將步驟(2)中的獲得的牛樟菌體干燥，獲得牛樟干燥菌塊；
(4)將牛樟干燥菌塊密封于培養環境，避光，停止供氧，將溫度調低至休眠溫度，使牛樟菌進入休眠期并維持4-12個月；
優選的，步驟(1)中所述的培養溫度為25-28°C，所述的培養時間為5-7d。
[0012]優選的，步驟(2)中所述的培養為搖床培養，所述的搖床培養的速度為100_150r/min，所述的培養溫度為25-28°C，培養時間為5_7d。
[0013]優選的，步驟(3)中的干燥溫度為30-40°C，干燥時間為l_3h ;步驟(3)中所述的干燥方式為烘干，所述的牛樟干燥菌塊的含水量低于2% ;步驟(4)中所述的休眠溫度為15-25。。。
[0014]本發明與現有技術相比，有益效果體現在以下幾點:
1.研究顯示，適宜樟芝菌絲體生物的碳氮源為葡萄糖、可溶性淀粉、酵母粉及麥芽糖，而以麥芽糖最為適宜，可提高三萜含量，根據牛樟菌的適宜生長環境，本發明將培養基的成分限定為牛樟木萃取的營養液、葡萄糖、可溶性淀粉、酵母、麥芽糖、蛋白胨、蔬菜汁、固化劑、水，且將各個成分按一定比例配制，尤其適合牛樟菌的培養，從而提高牛樟菌的產量，也提高了其三萜類的含量。
[0015]2.本發明在采用所述的培養基進行牛樟菌培養時，先進行菌種活化，再進行搖瓶培養，可使牛樟菌迅速繁殖，避免了傳統的液態培養基培養時其他微生物污染的情形。
【具體實施方式】
[0016]下面結合實施例對本發明做進一步說明。
[0017]實施例1
一種牛樟菌的液態碳氮源培養基，所述的培養基包含以下重量份的組分:
牛樟木萃取的營養液 5%,
葡萄糖10%，
可溶性淀粉0.5%，
酵母0.1%，
麥芽糖0.1%，
蛋白胨5%，
胡蘿卜汁2%，瓊脂0.5，
二次蒸餾水余量。
[0018]所述的培養基配制步驟為:將重量百分比為5%的牛樟木萃取的營養液、10%的葡萄糖、0.5%的可溶性淀粉、0.1%的酵母、0.1%的麥芽糖、5%的蛋白胨、2%的胡蘿卜汁、
0.5%的瓊脂、加水配制成混合溶液，煮沸溶解，加熱至50°C濃縮0.5h。
[0019]采用如上所述的培養基進行牛樟菌培養的方法，包括以下步驟:
(1)菌種活化:從斜面試管將菌種接種于培養皿中，培養，培養溫度為25°C,培養時間為5d，得活化的菌種；
(2)取步驟(1)中培養后的活化的菌種0.5cm2置入裝有50ml培養基的三角瓶中進行搖床培養獲得牛樟菌體，搖床培養的速度為100r/min，培養溫度為25°C，培養時間為5d ；
(3)將步驟(2)中的獲得的牛樟菌體烘干，干燥溫度為30°C，干燥時間為lh，獲得含水量低于2%的牛樟干燥菌塊；
(4)將牛樟干燥菌塊密封于培養環境，避光，停止供氧，將溫度調低至休眠溫度15°C，使牛樟菌進入休眠期并維持4個月。
[0020]實施例2
一種牛樟菌的液態碳氮源培養基，所述的培養基包含以下重量份的組分:
牛樟木萃取的營養液10%,
葡萄糖20%，
可溶性淀粉2%，
酵母5%，
麥芽糖20%，
蛋白胨10%，
胡蘿卜汁6%，
瓊脂5%，
二次蒸餾水余量。
[0021]所述的培養基配制步驟為:將重量百分比為10%的牛樟木萃取的營養液、20%的葡萄糖、2%的可溶性淀粉、5%的酵母、20%的麥芽糖、10%的蛋白胨、6%的胡蘿卜汁、5%的瓊脂、加水配制成混合溶液，煮沸溶解，加熱至60°C濃縮lh。
[0022]采用如上所述的培養基進行牛樟菌培養的方法，包括以下步驟:
(1)菌種活化:從斜面試管將菌種接種于培養皿中，培養，培養溫度為28°C,培養時間為7d，得活化的菌種；
(2)取步驟(1)中培養后的活化的菌種2cm2置入裝有10ml培養基的三角瓶中進行搖床培養獲得牛樟菌體，搖床培養的速度為150r/min，培養溫度為28°C，培養時間為7d ；
(3)將步驟(2)中的獲得的牛樟菌體烘干，干燥溫度為40°C，干燥時間為3h，獲得含水量低于2%的牛樟干燥菌塊；
(4)將牛樟干燥菌塊密封于培養環境，避光，停止供氧，將溫度調低至休眠溫度25°C，使牛樟菌進入休眠期并維持4-12個月。
[0023]實施例3
一種牛樟菌的液態碳氮源培養基，所述的培養基包含以下組分:牛樟木萃取的營養液、葡萄糖、可溶性淀粉、酵母、麥芽糖、蛋白胨、胡蘿卜汁、瓊脂、二次蒸餾水。
[0024]所述的葡萄糖、可溶性淀粉、酵母及麥芽糖的重量份之比為5:0.8:1.2:6。
[0025]所述的培養基配制步驟為:將重量百分比為8%的牛樟木萃取的營養液、8%的蛋白胨、4%的胡蘿卜汁、3%的瓊脂、重量份之比為為5:0.8:1.2:6葡萄糖、可溶性淀粉、酵母及麥芽糖、加水配制成混合溶液，煮沸溶解，加熱至55°C濃縮0.8h。
[0026]采用如上所述的培養基進行牛樟菌培養的方法，包括以下步驟:
(1)菌種活化:從斜面試管將菌種接種于培養皿中，培養，培養溫度為26°C,培養時間為6d，得活化的菌種；
(2)取步驟(1)中培養后的活化的菌種lcm2置入裝有70ml培養基的三角瓶中進行搖床培養獲得牛樟菌體，搖床培養的速度為120r/min，培養溫度為26°C，培養時間為6d ；
(3)將步驟(2)中的獲得的牛樟菌體烘干，干燥溫度為35°C，干燥時間為2h，獲得含水量低于2%的牛樟干燥菌塊；
(4)將牛樟干燥菌塊密封于培養環境，避光，停止供氧，將溫度調低至休眠溫度20°C，使牛樟菌進入休眠期并維持10個月。
[0027]上述實施例僅為本發明的優選實施方式，并不應理解為對本發明的限定，本領域技術人員根據本發明的揭示，不脫離本發明范疇所做出的改進和修改都應該在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種牛樟菌的液態碳氮源培養基，其特征在于，所述的培養基包含以下重量份的組分: 牛樟木萃取的營養液 5%-10%， 葡萄糖10%-20%， 可溶性淀粉0.5%-2%， 酵母0.1%-5%， 麥芽糖0.1%-20%， 蛋白胨5%-10%， 蔬菜汁2%-6%， 固化劑0.5-5%，水 余量。
2.根據權利要求1所述的牛樟菌的液態碳氮源培養基，其特征在于，所述的所述的葡萄糖、可溶性淀粉、酵母及麥芽糖的重量百分比為(5-12):(0.8-3):(1.2-3.5): ((6-12)。
3.根據權利要求1所述的牛樟菌的液態碳氮源培養基，其特征在于，所述的水為二次蒸餾水。
4.根據權利要求1所述的牛樟菌的液態碳氮源培養基，其特征在于，所述的蔬菜汁為胡蘿卜汁。
5.根據權利要求1所述的牛樟菌的液態碳氮源培養基，其特征在于，所述的固化劑為瓊脂。
6.根據權利要求1所述的牛樟菌的液態碳氮源培養基，其特征在于，所述的培養基配制步驟為:將重量百分比為5%-10%的牛樟木萃取的營養液、10%-20%的葡萄糖、0.5%-2%的可溶性淀粉、0.1%-5%的酵母、0.1%-20%的麥芽糖、5%-10%的蛋白胨、2%-6%的蔬菜汁、0.5-5%的固化劑、加水配制成混合溶液，煮沸溶解，加熱至50-60°C濃縮0.5-lh。
7.采用如權利要求1-6任一所述的培養基進行牛樟菌培養的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)菌種活化:從斜面試管將菌種接種于培養皿中，培養,得活化的菌種； (2)取步驟(1)中培養后的活化的菌種0.5-2cm2置入裝有50_100ml培養基的三角瓶中培養獲得牛樟菌體； (3)將步驟(2)中的獲得的牛樟菌體干燥，獲得牛樟干燥菌塊； (4)將牛樟干燥菌塊密封于培養環境，避光，停止供氧，將溫度調低至休眠溫度，使牛樟菌進入休眠期并維持4-12個月。
8.根據權利要求7所述的牛樟菌培養的方法，其特征在于，步驟(1)中所述的培養溫度為25-28°C，所述的培養時間為5-7d。
9.根據權利要求7所述的牛樟菌培養的方法，其特征在于，步驟(2)中所述的培養為搖床培養，所述的搖床培養的速度為100-150r/min，所述的培養溫度為25_28°C，培養時間為5-7d。
10.根據權利要求7所述的牛樟菌培養的方法，其特征在于，步驟(3)中的干燥溫度為30-40°C，干燥時間為l_3h ;步驟(3)中所述的干燥方式為烘干，所述的牛樟干燥菌塊的含水量低于2% ;步驟(4)中所述的休眠溫度為15-25°C。
【文檔編號】A01G1/04GK104130074SQ201410396724
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2014年8月13日 優先權日:2014年8月13日
【發明者】劉巴寧, 鄭安喬 申請人:中山安蕎生物科技有限公司