一種煙草小苗期快速鑒定黑脛病抗性的方法
【專利摘要】本發明公開了一種煙草小苗期快速鑒定黑脛病抗性的方法，將待鑒定的煙草品種播種到育苗穴盤中育苗，當苗齡達35～45天后，進行人工接種，對所有供試煙株在穴盤的穴孔中埋入預先培養的黑脛病接種材料0.1～1g，分別在接種后3～10天調查病情分級，計算病情指數。本發明采用小苗不移栽/移植的鑒定方法，不人為創造傷口，更加快捷方便，經過多年的常規田間病圃鑒定與本發明方法的同步驗證，本發明鑒定結果與田間鑒定相當，且年度間差異小，鑒定時間短，工作量小。
【專利說明】一種煙草小苗期快速鑒定黑脛病抗性的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于植物抗病性鑒定【技術領域】，具體涉及煙草黑脛病抗性鑒定方法。
【背景技術】
[0002] 煙草黑脛病是煙草生產上最具毀滅性的病害之一，同時也是世界煙草生產中危害 最嚴重的病害之一，該病在我國各產煙省均有不同程度的發生，且危害較為普遍和嚴重。選 用煙草抗黑脛病品種是解決這一病害的重要途徑。
[0003] 目前，現有的煙草品種抗病性鑒定方法主要有田間黑脛病圃鑒定法和苗期鑒定方 法。田間黑脛病圃鑒定法由于受地力、季節，每年的鑒定品種數量受到很大限制，且年份間 鑒定的品種抗性有一定的差異；而現有的苗期鑒定方法都要育苗后移栽到花盆、室內病圃 中或移植到新的盤上，缺點是移栽緩苗后接種，時間長，工作量大。
【發明內容】
[0004] 本發明要解決的技術問題是：針對現有技術中存在的問題，本發明提供了一種小 苗不移栽/移植的鑒定方法，不人為創造傷口，更加快捷方便，經過多年的田間病圃鑒定與 本發明方法的同步對比驗證，本發明鑒定結果與田間鑒定相當，且年度間差異小，鑒定時間 短，工作量少。
[0005] 本發明采用的技術方案：小苗快速鑒定法在溫室中進行，溫度環境25°C。將待鑒 定的各煙草品種播種到54孔育苗穴盤中育苗，每個品種/系1盤，育苗管理措施同常規煙 葉生產。當苗齡達35?45天后（不需剪葉)，進行人工接種。對所有供試煙株在穴盤的穴 孔中埋入預先培養的黑脛病接種材料0. 1?lg。分別在接種后3?10天調查病情分級，計 算病情指數。
[0006] 接種材料的制作：將小米用水煮至6分熟，撈出放到紗布上攤開，浙水10分鐘。裝 入250ml圓形塑料組培瓶中，裝至瓶體的2/3處。用高壓蒸氣滅菌鍋121°C滅菌1小時。冷 卻至室溫后，將分離好的在燕麥培養基上的黑脛病菌絲接種到小米上，在培養箱中28°C下 培養15天，菌絲長滿即可。
[0007] 記載方法執行國家標準"煙草病蟲害分級及調查方法（GB/T 23222-2008)"。病情 指數（D)計算公式： D= Σ (各級病株數X該病級數）X 100/ (調查總株數X最高級數） 病害嚴重度分級標準按國家標準GB/T 23224-2008執行，抗性劃分為6個級別：高抗 或免疫（I):病指為〇 ;抗病（R):抗病（R)沖抗（MR):病指為20. 1?40沖感（MS):病指為 40. 1?60 ;感（S):病指為60. 1?80 ;高感（HS):病指為80. 1?100。
[0008] 本發明達到的有益效果： 本發明采用小苗不移栽/移植的鑒定方法，不人為創造傷口，更加快捷方便。經過多年 的常規田間病圃鑒定與本發明方法的同步驗證，本發明鑒定結果與田間鑒定相當，且年度 間差異小。具體表現如下： (1) 鑒定周期更短，35?45天小苗不剪葉即可用于鑒定，整個鑒定周期僅為45?55 天即可，比現有的其它鑒定方法的鑒定周期更短，說明本發明的方法更高效； (2) 育種方法不同，其它方法均采用漂浮育苗，移栽后鑒定或移植到新盤上再做鑒定。 本方法采用大孔穴盤，有足夠空間在原盤上直接鑒定，盤不在營養液中浸泡，更適合固體接 種病原接種； (3) 病原接種材料的制作不同。常規的菌谷制作是采用帶殼的谷子制作，本方法的采用 脫粒后的小米制作，更方便接種，并有利于發病。
[0009] (4)黑脛病接種材料所用的小米經過水煮、浙干、消毒、填裝在矩形槽體并進行均 勻分塊，這樣在使用時直接按塊拿取，這樣可以進一步提高試驗速率、提高試驗規范化程 度。
【具體實施方式】
[0010] 實施例1 1、材料與方法 1. 1、試驗材料 貴州省煙草品種/系10份烤煙材料，對照品種革新3號、金星6007、小黃金1025。
[0011] 1.2、試驗方法 1. 2. 1、常規病圃鑒定法 田間病圃鑒定在貴州省煙草科學研究院烤煙品種試驗黑脛病鑒定圃中進行。試驗設4 個重復，每重復1行，栽煙10株。采用漂浮育苗法，育苗方法同常規生產。剪葉兩次，培育 成壯苗后，于5月上旬移栽，密度1X0. 6m2,畝施純氮6公斤。其它栽培管理措施同大田生 產。設革新3號為抗病對照、金星6007為中抗對照，小黃金1025為感病對照。田間鑒定于 移栽后20天，對所有供試煙株進行人工接種，在煙株根部埋入預先培養的黑脛病接種材料 3g。分別在接種后20天、40天、60天調查病情分級，取三次調查平均值計算病情指數。
[0012] 1.2. 2、本發明方法 小苗快速鑒定法在溫室中進行，溫度環境25°C。將待鑒定的各煙草品種播種到54孔育 苗穴盤中育苗，每個品種/系1盤。育苗管理措施同常規煙葉生產。當苗齡達40天后(不 需剪葉)，進行人工接種。對所有供試煙株在穴盤的穴孔中埋入預先培養的黑脛病接種材料 0. 5g。分別在接種后3天、7天、10天調查病情分級，取三次調查平均值計算病情指數。
[0013] 1. 2. 3、接種材料的制作 將小米用水煮至6分熟，撈出放到紗布上攤開，浙水10分鐘。裝入250ml圓形塑料組 培瓶中，裝至瓶體的2/3處。用高壓蒸氣滅菌鍋121°C滅菌1小時。冷卻至室溫后，將滅菌 后的小米均勻填裝在矩形槽體內，按重量〇. 1?lg均勻矩形槽體內的小米切成小塊，將分 離好的在燕麥培養基上的黑脛病菌絲接種到小米上，在培養箱中28°C下培養15天，菌絲長 滿即可，使用時按塊取用即可。
[0014] L 2. 4調查方法及抗性劃分 記載方法執行國家標準"煙草病蟲害分級及調查方法（GB/T 23222-2008)"。
[0015] 病情指數（D)計算公式： D= Σ (各級病株數X該病級數）X 100/ (調查總株數X最高級數） 抗性劃分按國家標準GB/T 23224-2008執行，分為6個級別： 表1 :國家標準抗性劃分表
【權利要求】
1. 一種煙草小苗期快速鑒定黑脛病抗性的方法，其特征在于：將待鑒定的煙草品種播 種到育苗穴盤中育苗，當苗齡達35?45天后，進行人工接種，對所有供試煙株在穴盤的穴 孔中埋入預先培養的黑脛病接種材料0. 1?lg，分別在接種后3?10天調查病情分級，計 算病情指數。
2. 根據權利要求1所述的一種煙草小苗期快速鑒定黑脛病抗性的方法，其特征在于： 當苗齡達35?45天后，不需移栽、剪葉，直接人工接種。
3. 根據權利要求1所述的一種煙草小苗期快速鑒定黑脛病抗性的方法，其特征在于： 預先培養的黑脛病接種材料的制作方法為將小米用水煮至6分熟，撈出放到紗布上攤開， 浙水10分鐘，裝入250ml圓形塑料組培瓶中，裝至瓶體的2/3處，用高壓蒸氣滅菌鍋121°C 滅菌1小時，冷卻至室溫后，將分離好的在燕麥培養基上的黑脛病菌絲接種到小米上，在培 養箱中28°C下培養15天，菌絲長滿即可得黑脛病接種材料。
4. 根據權利要求3所述的一種煙草小苗期快速鑒定黑脛病抗性的方法，其特征在于： 在小米上接種黑脛病菌絲前，將滅菌后的小米均勻填裝在矩形槽體內，按重量〇. 1?lg均 勻矩形槽體內的小米切成小塊，黑脛病菌絲均勻接種在塊狀的小米材料上。
【文檔編號】A01G7/00GK104152533SQ201410386031
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年8月7日 優先權日:2014年8月7日
【發明者】王仁剛, 林世鋒, 王軼, 曾吉凡 申請人:貴州省煙草科學研究院