一種蘋果砧木mm116組培快繁的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種蘋果砧木MM116組培快繁的方法，該蘋果砧木MM116組培快繁的方法，通過采用培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.1mg+PVP500mg/L的培養(yǎng)基初代培養(yǎng)、采用MS+6-BA0.6mg/L+IBA0.1mg/L處理的繼代培養(yǎng)、采用生根培養(yǎng)基1/2MS+IBA0.9mg/L的生根培養(yǎng)、用純鋸末的煉苗移栽；實現(xiàn)了蘋果砧木MM116快速的繁殖，不僅保證了較高的成活率，而且也保留了砧木的優(yōu)良特性，為蘋果產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和進(jìn)一步擴(kuò)大提供了便捷的方法和途徑。
【專利說明】一種蘋果砧木MM116組培快繁的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于蘋果苗木栽培【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種蘋果砧木MM116組培快繁的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蘋果產(chǎn)業(yè)在中國農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)中占有非常重要的地位，2013年中國蘋果種植面積225.3萬公頃，產(chǎn)量為3170萬噸，占世界總產(chǎn)量的1/2。與世界蘋果先進(jìn)生產(chǎn)國家相比，我國的蘋果生產(chǎn)還存在較大差距，主要表現(xiàn)為單位面積產(chǎn)量低、果品質(zhì)量差、經(jīng)濟(jì)效益不高、在國際鮮果市場上的占有份額少，與我國蘋果生產(chǎn)大國的地位極不相稱，其中蘋果苗木質(zhì)量差是造成這種局面的重要原因之一。目前，我國的蘋果生產(chǎn)模式由傳統(tǒng)低效郁閉果園模式逐步的轉(zhuǎn)變?yōu)楝F(xiàn)代化矮砧密植集約高效生產(chǎn)栽培模式。苗木是蘋果生產(chǎn)栽培的基礎(chǔ)，苗木的質(zhì)量直接影響著蘋果樹體的生長、開花、結(jié)果以及抗逆性、抗病能力和壽命。苗木受到病毒的侵染之后，樹體正常的細(xì)胞增殖，就會受到破壞，嚴(yán)重的話會影響果樹的生長勢、果實品質(zhì)和產(chǎn)量等正常生理機(jī)制，這成為中國蘋果產(chǎn)業(yè)發(fā)展的隱患。今后一段時期是我國蘋果大規(guī)模更新?lián)Q代的關(guān)鍵時期，如何從苗木方面提供支持和保障便成為一個值得高度重視的問題。目前，我國矮化蘋果苗木市場供不應(yīng)求，限制苗木產(chǎn)業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵在于，一方面缺乏適應(yīng)性廣優(yōu)良矮化砧木，另一方面對現(xiàn)有矮化砧木繁育技術(shù)尚未取得突破。MM116是由英國東茂林試驗站利用M9和MM106親本雜交培育而成的半喬化砧木，它兼具M(jìn)9的早果性和MM106的良好抗性，本發(fā)明建立一種蘋果砧木MM116組培快繁的方法，對于生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)矮化無病毒苗木，具有重要意義，發(fā)展前景廣闊。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明實施例的目的在于提供一種蘋果砧木麗116組培快繁的方法，旨在為我國蘋果苗木的栽培提供一種組培快繁的方法，以加快我國蘋果大規(guī)模更新?lián)Q代。
[0004]本發(fā)明實施例是這樣實現(xiàn)的，一種蘋果砧木MM116組培快繁的方法，該蘋果砧木MM116組培快繁的方法包括以下步驟:
[0005]步驟一，以蘋果砧木麗116為材料，選擇生長健壯無病蟲害的母樹，于3月份取I年生枝條,放置25°C的溫室內(nèi)進(jìn)行水培,每升水含有30g蔗糖，每隔3d換一次水并剪掉舊剪口，當(dāng)水培的一年生枝條上的芽抽生為1.5~2.0cm時，剪取嫩芽，去除展開葉片，在自來水下沖洗6~8h,用75%酒精處理8s, 0.1 %升萊處理7min ；
[0006]步驟二，進(jìn)行消毒處理后，用超聲波清洗機(jī)清洗3min，再用無菌水沖洗3~4次，將處理好的嫩芽接種到MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.lmg+PVP (聚乙烯吡咯烷酮)500mg/L的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，每升培養(yǎng)基附加30g蔗糖，8g瓊脂，然后放置在光照16h/d、光照2000lux，26 V條件下進(jìn)行培養(yǎng)；
[0007] 步驟三，將獲得的麗116無菌外植體接種1^+6-840.6mg/L+IBA0.lmg/L瓊脂8g/L，光照20001ux的培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，每升附加30g蔗糖，Sg瓊脂；
[0008]步驟四，選擇繼代培養(yǎng)獲得的生長健壯，高度大于1.5cm,生長時間為20天的芽子，接種于1/2MS+IBA0.9mg/L (蔗糖30g/L，瓊脂8g/L)生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)；
[0009]步驟五，當(dāng)組培苗根長度達(dá)到2cm后，移到室外遮陰煉苗10~12天左右，然后將培養(yǎng)容器瓶口打開，自然光下進(jìn)行開瓶煉苗2~4天后，將生根苗從培養(yǎng)基中取出，放入濃度為0.1 %多菌靈溶液中浸泡5min，并把根部多余的培養(yǎng)基清洗干凈，最后用清水沖洗2~3次，然后用純鋸末移栽到的營養(yǎng)缽中。
[0010]進(jìn)一步，在步驟五中，移栽苗的管理方式為:移栽后將生根苗在遮陰網(wǎng)下進(jìn)行管理，第一周采用濃度為0.1 %多菌靈溶液進(jìn)行噴灌，第二周每天用水噴灌一次，保持基質(zhì)濕潤透氣。待生根苗抽生出新芽之后即可移出遮陰網(wǎng)。
[0011]本發(fā)明提供的蘋果砧木麗116組培快繁的方法，通過采用培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.lmg+PVP500mg/L的培養(yǎng)基初代培養(yǎng)，成活率為41.38 %，有利于麗116組培苗的建立；采用MS+6-BA0.6mg/L+IBA0.lmg/L處理的繼代培養(yǎng)，擴(kuò)繁系數(shù)高達(dá)5.46 ;采用生根培養(yǎng)基1/2MS+IBA0.9mg/L的生根培養(yǎng)且生根率高達(dá)91.0%用純鋸末進(jìn)行煉苗移栽成活率高達(dá)90% ;重復(fù)的對MM116品種進(jìn)行繼代培養(yǎng)，生根培養(yǎng)和移栽能夠在較短的時間內(nèi)實現(xiàn)了蘋果砧木MM116無病毒苗木的組培快繁。通過組織培養(yǎng)技術(shù)不僅保證了較高的成活率，而且也保留了砧木的優(yōu)良特性，為蘋果產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和進(jìn)一步擴(kuò)大提供了便捷的方法和途徑。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0012]圖1是本發(fā)明實施例提供的蘋果砧木MM116組培快繁的方法流程圖。
【具體實施方式】
[0013]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0014]下面結(jié)合附圖及具體實施例對本發(fā)明的應(yīng)用原理作進(jìn)一步描述。
[0015]如圖1所示，本發(fā)明實施例的蘋果砧木MM116組培快繁的方法包括以下步驟:
[0016]SlOl:以蘋果砧木MMl 16為材料，選擇生長健壯無病蟲害的母樹，于3月份取I年生枝條,放置25°C的溫室內(nèi)進(jìn)行水培，每升水含有30g蔗糖，每隔3d換一次水并剪掉舊剪口，當(dāng)水培的一年生枝條上的芽抽生為1.5~2.0cm時，剪取嫩芽，去除展開葉片，在自來水下沖洗6~8h,用75%酒精處理8s, 0.1 %升萊處理7min ；
[0017]S102:進(jìn)行消毒處理后，用超聲波清洗機(jī)清洗3min，再用無菌水沖洗3~4次，將處理好的嫩芽接種到MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.lmg+PVP (聚乙烯吡咯烷酮)500mg/L的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，每升培養(yǎng)基附加30g蔗糖，8g瓊脂，然后放置在光照16h/d、光照20001UX，26V條件下進(jìn)行培養(yǎng)；
[0018]S103:將獲得的MMl 16無菌外植體接種最優(yōu)培養(yǎng)基處理M14，即MS+6-BA0.6mg/L+IBA0.lmg/L瓊脂8g/L，光照20001ux的培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，每升附加30g蔗糖，8g瓊脂；
[0019]S104:選擇繼代培養(yǎng)獲得的生長健壯，高度大于1.5cm,生長時間為20天的芽子，接種于1/2MS+IBA0.9mg/L (蔗糖30g/L，瓊脂8g/L)生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)；
[0020]S105:當(dāng)組培苗根長度達(dá)到2cm后，移到室外遮陰煉苗10~12天左右，然后將培養(yǎng)容器瓶口打開，自然光下進(jìn)行開瓶煉苗2~4天后，將生根苗從培養(yǎng)基中取出，放入濃度為0.1%多菌靈溶液中浸泡5min，并把根部多余的培養(yǎng)基清洗干凈，最后用清水沖洗2~3次，然后用純鋸末移栽到的營養(yǎng)缽中。
[0021]在步驟S105中，移栽苗的管理方式為:移栽后將生根苗在遮陰網(wǎng)下進(jìn)行管理，第一周采用濃度為0.1 %多菌靈溶液進(jìn)行噴灌，第二周每天用水噴灌一次，保持基質(zhì)濕潤透氣。待生根苗抽生出新芽之后即可移出遮陰網(wǎng)。
[0022]本發(fā)明的具體步驟如下:
[0023]步驟一，初代培養(yǎng)
[0024]蘋果站木MMl 16為材料,選擇生長健壯無病蟲害的母樹,于3月份取I年生枝條，放置25 °C的溫室內(nèi)進(jìn)行水培(每升水含有30g蔗糖)，每隔3d換一次水并剪掉舊剪口，當(dāng)水培的一年生枝條上的芽抽生為1.5~2.0cm時,剪取嫩芽,去除展開葉片,在自來水下沖洗6~8h，用75%酒精處理8s，0.1 %升汞處理7min，進(jìn)行消毒處理后，用超聲波清洗機(jī)清洗3min，再用無菌水沖洗3~4次，將處理好的嫩芽接種到MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.lmg/L+不同濃度處理(0、0.3,0.5,0.7、1.0g/L)的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，每升培養(yǎng)基附加30g蔗糖，Sg瓊脂，每個三角瓶接3個芽，每處理15瓶，然后放置在光照16h/d、光照20001ux，26°C條件下進(jìn)行培養(yǎng)，14d后分別調(diào)查污染率、褐化率、成活率，得出MM116的初代培養(yǎng)是最適宜的培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.lmg+PVP500mg/L (蔗糖30g/L，瓊脂 8g/L)；
[0025]步驟二，繼代培養(yǎng)
[0026]將獲得的無菌外植體接種到含有不同濃度6-BA行繼代培養(yǎng)，每升附加30g蔗糖，8g瓊脂，每瓶3株，每個處理10瓶，重復(fù)3次，麗116的最優(yōu)培養(yǎng)基為，即MS+6-BA0.6mg/L+IBA0.lmg/L (瓊脂 8g/L，光照 20001ux)；
[0027]步驟三，生根培養(yǎng)
[0028]選擇繼代培養(yǎng)獲得的生長健壯，高度大于1.5cm的植株，生長時間為20天的芽子，接種于1/2MS+不同濃度IBA處理(0、0.8、0.9、1.0、1.lmg/L)的生根培養(yǎng)中進(jìn)行生根培養(yǎng)，每瓶接種3個，每個處理10瓶，重復(fù)3次，得到麗116最適宜的生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.9mg/L (蔗糖 30g/L，瓊脂 8g/L)；
[0029]步驟四，煉苗移栽
[0030]當(dāng)組培苗根長度達(dá)到2cm后，移到室外遮陰煉苗10~12天左右，然后將培養(yǎng)容器瓶口打開，自然光下進(jìn)行開瓶煉苗2~4天后，將生根苗從培養(yǎng)基中取出，放入濃度為0.1%多菌靈溶液中浸泡5min，并把根部多余的培養(yǎng)基清洗干凈，最后用清水沖洗2~3次，然后移栽到容量相同的不同基質(zhì)處理(純鋸末、鋸末+基質(zhì)、純基質(zhì)、基質(zhì)+珍珠巖)的營養(yǎng)缽中，移栽苗的管理方式為:將生根苗在遮陰網(wǎng)下進(jìn)行管理，第一周采用濃度為0.1%多菌靈溶液進(jìn)行噴灌，第二周每天用水噴灌一次，保持基質(zhì)濕潤透氣。于14天后統(tǒng)計煉苗移栽成活率，得出用純鋸末的煉苗移栽成活率最好。
[0031]通過以下的實驗和數(shù)據(jù)對本發(fā)明的原理做進(jìn)一步的說明:
[0032] 1、參考表1不同濃度PVP處理對外植體生長的影響；
[0033]表1不同濃度PVP處理對外植體生長的影響
[0034]
【權(quán)利要求】
1.一種蘋果砧木MMl 16組培快繁的方法，其特征在于，蘋果砧木MMl 16在組培技術(shù)下進(jìn)行組培快繁，該蘋果砧木MM116組培快繁的方法具體方法包括以下步驟: 步驟一，以蘋果砧木MM116為材料，用超聲波清洗機(jī)清洗3min，再用無菌水沖洗3~4次，將處理好的嫩芽接種到MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.lmg+PVP500mg/L的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，每升培養(yǎng)基附加30g蔗糖，Sg瓊脂，然后放置在光照16h/d、光照20001uX，26°C條件下進(jìn)行培養(yǎng)； 步驟二，將獲得的無菌外植體接種到MS+6-BA0.6mg/L+IBA0.lmg/L，光照20001ux的培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，即每升附加30g蔗糖，Sg瓊脂； 步驟三，選擇繼代培養(yǎng)獲得的生長健壯，高度大于1.5cm的植株，生長時間為20天的芽子，接種于1/2MS+IBA0.9mg/L蔗糖30g/L，瓊脂8g/L生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。
2.如權(quán)利要求1所述的蘋果砧木MM116組培快繁的方法，其特征在于，在步驟一中以蘋果砧木MMl 16為材料，選擇生長健壯無病蟲害的母樹，于3月份取I年生枝條，放置25°C的溫室內(nèi)進(jìn)行水培,水培為每升水含有30g蔗糖，每隔3d換一次水并剪掉舊剪口，當(dāng)水培的一年生枝條上的芽抽生為1.5~2.0cm時,剪取嫩芽,去除展開葉片,在自來水下沖洗6~8h，用75%酒精處理8s，0.1 %升汞處理7min ;然后再用超聲波清洗機(jī)清洗。
3.如權(quán)利要求1所述的蘋果砧木麗116組培快繁的方法，其特征在于，在步驟三生根培養(yǎng)中當(dāng)組培苗根長度達(dá)到2cm后，移到室外遮陰煉苗10~12天，然后將培養(yǎng)容器瓶口打開，自然光下進(jìn)行開瓶煉苗2~4天后，將生根苗從培養(yǎng)基中取出，放入濃度為0.1%多菌靈溶液中浸泡5min，并把根部多余的培養(yǎng)基清洗干凈，最后用清水沖洗2~3次，然后用純鋸末移栽到的營養(yǎng)缽中。
4.如權(quán)利要求3所述的蘋果砧木MMl16組培快繁的方法，其特征在于，在步驟五中，移栽苗的管理方式為:移栽后將生根苗在遮陰網(wǎng)下進(jìn)行管理，第一周采用濃度為0.1%多菌靈溶液進(jìn)行噴灌，第二周每天用水噴灌一次，保持基質(zhì)濕潤透氣。待生根苗抽生出新芽之后即移出遮陰網(wǎng)。
【文檔編號】A01H4/00GK104067942SQ201410333345
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年7月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月14日
【發(fā)明者】張東, 韓明玉, 王超, 李有梅, 韓靜, 趙彩平 申請人:西北農(nóng)林科技大學(xué)