提高黨參耐鹽性的方法
【專利摘要】本發明公開了一種提高黨參耐鹽性的方法，其是在黨參播種前用有益土壤細菌枯草芽孢桿菌GB03菌液對其進行浸泡處理，浸泡處理后分離出種子進行播種。采用上述方案在播種前對黨參種子進行處理，其可有效地提高黨參的耐鹽性，顯著提高黨參種子在鹽堿化土壤中播種的出苗率、生長勢，提高黨參根系的生長，從而提高了產量。同時，枯草芽孢桿菌具有對人畜無毒無害、不污染環境、非致病性和抗逆性強等特點。本發明對黨參種子處理的方法簡單，可廣泛應用于在輕度和中度鹽堿化土地上栽培黨參，具有重要的經濟、社會和生態價值。
【專利說明】提高黨參耐鹽性的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及中藥材種植領域，具體涉及一種提高黨參耐鹽性的方法。
【背景技術】
[0002]黨參，又名黃參，產于我國山西、甘肅、陜西、四川和湖北等地，目前，黨參主要采用人工栽培種植，少量為野生，其中，甘肅是黨參的最大產區。近年來，黨參在治療冠心病、高血脂癥、低血壓病等方面取得了新的進展，使其用量速增；同時，隨著中藥現代化的實施以及中國在世界經濟中地位的提升，中藥材的生產和出口均穩步的增長，黨參藥材供不應求已經成為中藥生產中的一大難題。黨參耐鹽性弱，對鹽潰化土壤敏感，而我國大部分耕地土壤鹽堿化嚴重，使得黨參難以被大范圍的推廣栽培種植。
【發明內容】
[0003]本發明的目的在于提供一種提高黨參耐鹽性的方法，使得黨參的耐鹽性增強，擴大黨參的種植區域，解決目前市場上黨參供不應求的難題。
[0004]為實現上述目的，本發明采用如下技術方案進行實施:
[0005]一種提高黨參耐鹽性的方法，其是在黨參播種前用有益土壤細菌枯草芽孢桿菌GB03菌液對其進行浸泡處理，浸泡處理后分離出種子進行播種。
[0006]具體操作步驟為:
[0007]S1:對黨參種子進行消毒處理；
[0008]S2:配制枯草芽孢桿菌GB03菌液；
[0009]S3:對黨參種子進行浸泡處理；
[0010]S4:將浸泡處理后的黨參種子與農田土混合，然后進行播種。
[0011]詳細的操作為:
[0012]有益土壤細菌枯草芽孢桿菌GB03菌液中OD6tltl為0.8~1.0，浸泡處理的時間為
5~IOmin0
[0013]步驟SI中黨參種子先用酒精浸泡8~10s，然后用次氯酸鈉浸泡10~12min，最后用滅菌的蒸餾水沖洗，放置于2~4°C的冰箱中過夜待用。所用的酒精濃度為75%，次氯酸鈉濃度為5%，蒸餾水沖洗6~8次。
[0014]配制枯草芽孢桿菌GB03菌液的具體操作為:配制LB液體培養基，滅菌冷卻后在每IOOmL的LB液體培養基中加入50~100 μ L的枯草芽孢桿菌GB03菌液，然后進行菌株培養，當菌液濃度0D_為0.8~1.0時，取出備用。LB液體培養基中氯化鈉、胰蛋白胨和酵母粉的重量比為1:2:1，溶 劑為蒸餾水；調pH至7.2，115~132°C滅菌，然后冷卻至20~35°C備用。菌株培養在恒溫培養搖床上進行，控制轉速為180~250r/min，溫度為25~30°C。
[0015]采用上述方案在播種前對黨參種子進行處理，其可有效的提高黨參的耐鹽性，可顯著提高黨參種子在鹽堿化土壤中播種的出苗率、生長勢，提高黨參根系的生長，從而提高了產量。同時，枯草芽孢桿菌具有對人畜無毒無害、不污染環境、非致病性和抗逆性強等特點。本發明對黨參種子處理的方法簡單，可廣泛應用于在輕度和中度鹽堿化土地上栽培黨參，具有重要的經濟、社會和生態價值。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0016]圖1為枯草芽孢桿菌GB03對不同鹽濃度土壤中黨參根長(Root length)的影響；
[0017]圖2為枯草芽孢桿菌GB03對不同鹽濃度土壤中黨參根鮮重(Root fresh weight)的影響；
[0018]圖3為枯草芽孢桿菌GB03對不同鹽濃度土壤中黨參根干重(Root dry weight)的影響。
【具體實施方式】
[0019]為了使本發明的目的及優點更加清楚明白，以下結合實施例對本發明進行進一步的詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。以下所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本【技術領域】的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以作出若干的同等的替換和潤飾，這些同等的替換和潤飾也應視為本發明權利要求請求的保護范圍。
[0020]實施例1
[0021]黨參種子消毒處理:黨參種子用75%的酒精浸泡IOs后，使用5%次氯酸鈉浸泡lOmin，用滅菌的蒸餾水沖洗7次，于2~4°C冰箱過夜；
[0022]枯草芽孢桿菌GB03菌液制備:先配制溶菌肉湯LB液體培養基:按照氯化鈉、胰蛋白胨和酵母粉的比例為1:2:1配制，溶劑為蒸餾水；調？!1到7.2，高溫為132°C滅菌，待冷卻溫度為20°C后，每IOOmL的LB液體培養基加入50 μ L的枯草芽孢桿菌GB03菌液，在轉速為250r/min下，溫度為25°C的恒溫培養搖床上培養過夜后，測定菌液濃度為OD6tltl為0.8~1.0時，取出備用；
[0023]種子菌液處理:將消毒處理完成種子浸泡于枯草芽孢桿菌GB03菌液中lOmin，然后將菌液倒出；取適量的農田土與剛處理完的種子混合均勻，保證土壤顆粒松散待用。
[0024]實施例2
[0025]黨參種子消毒處理:黨參種子用75%的酒精浸泡8s后，使用5%次氯酸鈉浸泡12min，用滅菌的蒸餾水沖洗8次，于2~4°C冰箱過夜；
[0026]枯草芽孢桿菌GB03菌液制備:先配制溶菌肉湯LB液體培養基:按照氯化鈉、胰蛋白胨和酵母粉的比例為1:2:1配制，溶劑為蒸餾水；調？11到7.2，高溫為115°C滅菌，待冷卻溫度為35°C后，每IOOmL的LB液體培養基加入100 μ L的枯草芽孢桿菌GB03菌液，在轉速為180r/min下，溫度為30°C的恒溫培養搖床上培養過夜后，測定菌液濃度為OD6tltl為0.8~1.0時，取出備用；
[0027]種子菌液處理:將消毒處理完成種子浸泡于枯草芽孢桿菌GB03菌液中5min，然后將菌液倒出；取適量的農田土與剛處理完的種子混合均勻，保證土壤顆粒松散待用。
[0028]實施例3
[0029]黨參種子消毒處理:黨參種子用75%的酒精浸泡IOs后，使用5%次氯酸鈉浸泡lOmin，用滅菌的蒸餾水沖洗7次，于2~4°C冰箱過夜；[0030]種子菌液處理:取適量的農田土與消毒處理完的種子混合均勻，保證土壤顆粒松散待用。
[0031]實施例4
[0032]黨參種子消毒處理:黨參種子用75%的酒精浸泡8s后，使用5%次氯酸鈉浸泡12min，用滅菌的蒸餾水沖洗8次，于2~4°C冰箱過夜；
[0033]種子菌液處理:取適量的農田土與消毒處理完的種子混合均勻，保證土壤顆粒松散待用。
[0034]實施例5
[0035]分別配制NaCl濃度為0mM、50mM、IOOmM和150Mm的土壤，然后將實施例1、2中處 理后的黨參種子分別播種于上述各土壤中，標記為GB03 ;將實施例3、4中處理后的黨參種子分別播種于上述各土壤中，標記為對照LB，觀察黨參莖、根的長勢，具體結果如圖1~3所
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[0036](I)、在0、50、100和150mM的NaCl鹽脅迫下，與對照LB相比，GB03分別顯著(P< 0.05)增加黨參根長 9%、12.3%U9.4%和 27.7%。
[0037](2)、在 0、50、100 和 150mM NaCl 鹽脅迫下，較對照 LB, GB03 分別顯著(P < 0.05)增加黨參根部鮮重66.0%、72.7%、8.6%和28.4%，分別顯著(P < 0.05)提高黨參根部干重 117%、69.9%,31.0%和 37.9%。
【權利要求】
1.一種提高黨參耐鹽性的方法，其是在黨參播種前用枯草芽孢桿菌GB03菌液對其進行浸泡處理，浸泡處理后分離出種子進行播種。
2.如權利要求1所述的提高黨參耐鹽性的方法，其特征在于:枯草芽孢桿菌GB03菌液中 OD6tltl 為 0.8 ~1.0。
3.如權利要求1所述的提高黨參耐鹽性的方法，其特征在于:浸泡處理的時間為5~IOmin0
4.如權利要求1或2或3所述的提高黨參耐鹽性的方法，其特征在于，具體操作步驟為: S1:對黨參種子進行消毒處理； S2:配制枯草芽孢桿菌GB03菌液； S3:對黨參種子進行浸泡處理； S4:將浸泡處理后的黨參種子與農田土混合，然后進行播種。
5.如權利要求4所述的提高黨參耐鹽性的方法，其特征在于:步驟SI中黨參種子先用酒精浸泡8~IOs,然后用次氯酸鈉浸泡10~12min,最后用滅菌的蒸懼水沖洗,放置于2~S4°C的冰箱中過夜待用。
6.如權利要求4所述的提高黨參耐鹽性的方法，其特征在于，配制枯草芽孢桿菌GB03菌液的具體操作為:配制LB液體培養基，滅菌冷卻后在每IOOmL的LB液體培養基中加入S50~100 μ L的枯草芽孢桿菌GB03菌液，然后進行菌株培養，當菌液濃度OD6tltl為0.8~1.0時，取出備用。
7.如權利要求5所述的提高黨參耐鹽性的方法，其特征在于:所用的酒精濃度為75%，次氯酸鈉濃度為5%，蒸餾水沖洗6~8次。
8.如權利要求6所述的提高黨參耐鹽性的方法，其特征在于:LB液體培養基中氯化鈉、胰蛋白胨和酵母粉的重量比為1:2:1，溶劑為蒸餾水；調？11至7.2，115~1321:滅菌，然后冷卻至20~35°C備用。
9.如權利要求6所述的提高黨參耐鹽性的方法，其特征在于:菌株培養在恒溫培養搖床上進行，控制轉速為180~250r/min，溫度為25~30°C。
【文檔編號】A01C1/00GK103999595SQ201410246686
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年6月5日 優先權日:2014年6月5日
【發明者】張金林, 吳永娜, 許瑞, 韓慶慶, 呂昕培, 王引權, 王鎖民 申請人:蘭州大學