一種抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種水稻秧苗立枯病的微生物肥料及其制備方法。本發明首先通過鶴羽田戴爾福特菌、側孢芽胞桿菌、多粘類芽胞桿菌、解淀粉芽孢桿菌和肺炎克雷伯氏菌菌種分別發酵制得菌液，然后將其混合制得混合發酵菌液；最后在有機物料中加入混合肥料、混合發酵菌液和無菌水，發酵，發酵結束后，將發酵后肥料與腐殖酸、草炭混勻，經對輥擠壓式造粒機制備抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料。本發明的抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料能有效降低水稻旱育秧立枯病的發生，還能降低病原菌對水稻秧苗生長的抑制作用，顯著地促進水稻秧苗的生長。
【專利說明】一種抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物肥料領域，尤其涉及的是一種抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料及其制備方法。
【背景技術】
[0002]水稻立枯病是水稻旱育秧最主要的病害之一，從種子出苗到插秧的整個育秧過程中均可發生，但在離乳期發病最為嚴重。病苗表現為葉片無露珠，心葉或上葉片打綹，根少暗黃色無新根，莖基部逐漸黃枯，軟化至腐爛。一旦發病很難防治，近幾年，早稻旱育秧發生較重，輕者成撮成片發生，重者幼苗全部死亡。因此需要一種有效防治水稻秧苗立枯病的微生物有機肥料，既能促進秧苗生長，又能減輕病害的發生，同時有利于機械化插秧的開展。目前，盡管生產上關于微生物有機肥料的產品很多，但針對于防治水稻秧苗立枯病的微生物有機肥料較少。
【發明內容】
[0003]本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的不足，提供了一種抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料及其制備方法。
[0004]本發明的技術方案如下:
[0005]一種抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料的制備方法，其步驟如下:
[0006](I)鶴羽田戴爾福特菌的發酵
[0007]將在LB固體培養基上活化的鶴羽田戴爾福特菌菌株單菌落，在超凈工作臺上轉接到裝有IOmL牛肉膏蛋白胨液體培養基的容積為50mL的三角瓶中，于30°C、180rpm條件下振蕩培養20h ;將培養后得到的培養液接種于裝有400mL牛肉膏蛋白胨培養基的容積為1000mL的三角瓶中，180rpm、30°C條件下振蕩培養20h后接種于裝有20L發酵培養基的機械攪拌式發酵罐中，發酵條件設定為:溶氧100%，攪拌速度350rpm，發酵溫度30°C，發酵時間48h，pH6.8-7.2 ;發酵到達終點后，取樣檢測活芽孢濃度，確保活芽孢濃度≥1.0X108cfu/mL ；
[0008](2)側孢芽胞桿菌、多粘類芽胞桿菌、解淀粉芽孢桿菌和肺炎克雷伯氏菌的發酵
[0009]將在LB固體培養基上分別活化的側孢芽胞桿菌、多粘類芽胞桿菌(保藏編號為ACCC10369)、解淀粉芽孢桿菌或肺炎克雷伯氏菌菌株單菌落，在超凈工作臺上轉接到裝有IOmLLB液體培養基的容積為50mL的三角瓶中，于30°C、180rpm條件下振蕩培養20h ;將培養后得到的培養液接種于裝有400mL牛肉膏蛋白胨培養基的容積為1000mL的三角瓶中，180rpm、30°C條件下振蕩培養20h后接種于裝有20L發酵培養基的機械攪拌式發酵罐中，發酵條件設定為:溶氧100%，攪拌速度350rpm，發酵溫度30°C，發酵時間48h，pH6.8-7.2 ;發酵到達終點后，取樣檢測活芽孢濃度，確保活芽孢濃度≥ 1.0X108cfu/mL ；
[0010](3)混合發酵菌液的制備
[0011] 將(I)、(2)中發酵得到的鶴羽田戴爾福特菌、側孢芽胞桿菌、多粘類芽胞桿菌、解淀粉芽孢桿菌和肺炎克雷伯氏菌按照體積比2:1:1:1:1混合，制得混合發酵菌液；
[0012](4)微生物肥料的制備
[0013]將菜籽餅、大豆餅按照重量比1:1混勻作為有機物料，添加氮磷鉀肥按照純氮:純磷:純鉀重量比為3:1:1混勻作為混合肥料，將有機物料中加入混合肥料，混勻后添加混合發酵菌液，同時添加無菌水，在發酵罐中發酵I周；發酵結束后，將發酵后的肥料與腐殖酸、草炭混勻，經對輥擠壓式造粒機制備抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料，并檢測微生物肥料的活芽孢、有機質和水分含量，使活芽孢含量> 1.0X108cfu/g，有機質含量> 60%，水份含量控制在8-10%之間，檢驗合格后包裝。
[0014]所述的發酵培養基的配方為:大豆粉5g/L，玉米粉5g/L，酵母提取物5g/L，紅糖50g/L,碳酸鈣 lg/L, MnS045mg/L, pH7.0-7.2,用蒸懼水配制。
[0015]所述的制備方法，步驟(4)中，每kg有機物料加12_15g混合肥料；每噸有機肥料添加50L混合發酵菌液；每kg有機物料添加200ml的無菌水。
[0016]所述的制備方法，步驟⑷中，發酵后的肥料與腐殖酸、草炭的重量比為10:1:2。
[0017]所述的制備方法制得的抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料。
[0018]本發明的抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料能有效降低水稻旱育秧立枯病的發生，還能降低病原菌對水稻 秧苗生長的抑制作用，顯著地促進水稻秧苗的生長。
【具體實施方式】
[0019]以下結合具體實施例，對本發明進行詳細說明。
[0020]所用菌種購自中國工業微生物菌種保藏中心和中國農業微生物菌種保藏中心。
[0021]實施例1
[0022]1、鶴羽田戴爾福特菌的發酵
[0023]將在LB固體培養基上活化的鶴羽田戴爾福特菌菌株單菌落，在超凈工作臺上轉接到裝有IOmL牛肉膏蛋白胨液體培養基的容積為50mL的三角瓶中，于30°C、180rpm條件下振蕩培養20h。將培養后得到的培養液接種于裝有400mL牛肉膏蛋白胨培養基的容積為1000mL的三角瓶中，180rpm、30°C條件下振蕩培養20h后接種于裝有20L發酵培養基的機械攪拌式發酵罐中，發酵條件設定為:溶氧100%，攪拌速度350rpm，發酵溫度30°C，發酵時間48h，pH6.8-7.2。其中，所述發酵培養基的配方為:大豆粉5g/L，玉米粉5g/L，酵母提取物5g/L，紅糖50g/L，碳酸鈣lg/L，MnS045mg/L, pH7.0-7.2，用蒸餾水配制。發酵到達終點后，取樣檢測活芽孢濃度，確保活芽孢濃度> 1.0X 108cfu/mL。
[0024]2、側孢芽胞桿菌、多粘類芽胞桿菌、解淀粉芽孢桿菌和肺炎克雷伯氏菌的發酵
[0025]將在LB固體培養基上分別活化的側孢芽胞桿菌、多粘類芽胞桿菌、解淀粉芽孢桿菌或肺炎克雷伯氏菌菌株單菌落，在超凈工作臺上轉接到裝有IOmLLB液體培養基的容積為50mL的三角瓶中，于30°C、180rpm條件下振蕩培養20h。將培養后得到的培養液接種于裝有400mL牛肉膏蛋白胨培養基的容積為1000mL的三角瓶中，180rpm、30°C條件下振蕩培養20h后接種于裝有20L發酵培養基(同I)的機械攪拌式發酵罐中，發酵條件設定為:溶氧100%，攪拌速度350rpm，發酵溫度30°C，發酵時間48h，pH6.8-7.2。發酵到達終點后，取樣檢測活芽孢濃度，確保活芽孢濃度> 1.0X 108cfu/mL。
[0026]將上述發酵得到的鶴羽田戴爾福特菌、側孢芽胞桿菌、多粘類芽胞桿菌、解淀粉芽孢桿菌和肺炎克雷伯氏菌按照2:1:1:1:1 (體積比)混合，制得混合發酵菌液。
[0027] 3、微生物肥料的制備
[0028]將菜籽餅、大豆餅按照重量比1:1混勻作為有機物料，添加氮磷鉀肥按照純氮(尿素):純磷(過磷酸鈣):純鉀(硫酸鉀)=3:1:1 (重量比)混勻作為混合肥料，每kg有機物料加Hg混合肥料，混勻后添加混合發酵菌液，每噸有機肥料添加50L混合發酵菌液，同時每kg有機物料添加200ml的無菌水，在發酵罐中發酵I周。發酵結束后，將發酵后的肥料與腐殖酸、草炭按照重量比為10:1:2混勻，經對輥擠壓式造粒機制備抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料，并檢測微生物肥料的活芽孢、有機質和水分含量，使活芽孢含量> LOXlO8Cfu/g，有機質含量> 60%，水份含量控制在8-10%之間，檢驗合格后包裝。
[0029]實施例2盆栽試驗
[0030]在中國水稻研究所浙江省富陽基地溫室進行水稻對比試驗，所選用的土壤為含有立枯病菌的發病稻田土，試驗設3個處理，CK:化肥對照，即為微生物肥料中的混合肥料；F:為實施例1中的有機物料一菜籽餅、大豆餅按照重量1:1混勻的混合物；A:施用實施例1制備的抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料。抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料用量:水稻育秧時按土重的10%施用，常規管理。20天之后觀察水稻秧苗生長情況，確認抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料是否有防治水稻立枯病的效果。經觀察發現，隨著水稻秧苗生長時間的延長，施用抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料處理(A)，其長勢遠好于施用化肥(CK)和有機物料(F)的水稻秧苗(表1)，發病明顯減輕。
[0031]表1施用抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料對水稻秧苗生長的影響
[0032]
All發病牛.地h部子承(g/30株)根系總長度(Cm)
CK75%0.57471
F52%0,935X7
A26%1.62834
[0033]
[0034]結果表明，含病原菌土壤中水稻秧苗的發病率為75%，并且存活植株長勢矮小，在施用本發明的抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料處理后發病率為26% (表1)(防治率63%)，并且秧苗長勢良好，說明本發明的抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料能有效的抑制水稻旱育秧立枯病的發生。與CK比較，施用抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料后，水稻秧苗地上部干重、根系總長度分別增加了 184%和77%。與F比較，施用抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料后，水稻秧苗地上部干重、根系長度分別增加了 74%和42%。這些結果表明，本發明的抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料除了能有效降低水稻旱育秧立枯病的發生，還能降低病原菌對水稻秧苗生長的抑制作用，顯著地促進水稻秧苗的生長。
[0035]應當理解的是，對本領域普通技術人員來說，可以根據上述說明加以改進或變換，而所有這些改進和變換都應屬于本發明所附權利要求的保護范圍。
【權利要求】
1.一種抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料的制備方法，其特征是，其步驟如下: (1)鶴羽田戴爾福特菌的發酵 將在LB固體培養基上活化的鶴羽田戴爾福特菌菌株單菌落，在超凈工作臺上轉接到裝有IOmL牛肉膏蛋白胨液體培養基的容積為50mL的三角瓶中，于30°C、180rpm條件下振蕩培養20h ;將培養后得到的培養液接種于裝有400mL牛肉膏蛋白胨培養基的容積為1000mL的三角瓶中，180rpm、30°C條件下振蕩培養20h后接種于裝有20L發酵培養基的機械攪拌式發酵罐中，發酵條件設定為:溶氧100%，攪拌速度350rpm，發酵溫度30°C，發酵時間48h，pH6.8-7.2 ;發酵到達終點后，取樣檢測活芽孢濃度，確保活芽孢濃度> 1.0X108cfu/mL ； (2)側孢芽胞桿菌、多粘類芽胞桿菌、解淀粉芽孢桿菌和肺炎克雷伯氏菌的發酵 將在LB固體培養基上分別活化的側孢芽胞桿菌、多粘類芽胞桿菌、解淀粉芽孢桿菌或肺炎克雷伯氏菌菌株單菌落，在超凈工作臺上轉接到裝有IOmLLB液體培養基的容積為50mL的三角瓶中，于30°C、180rpm條件下振蕩培養20h ;將培養后得到的培養液接種于裝有400mL牛肉膏蛋白胨培養基的容積為1000mL的三角瓶中，180rpm、30°C條件下振蕩培養20h后接種于裝有20L發酵培養基的機械攪拌式發酵罐中，發酵條件設定為:溶氧100%，攪拌速度350rpm，發酵溫度30°C，發酵時間48h，pH6.8-7.2 ;發酵到達終點后，取樣檢測活芽孢濃度，確保活芽孢濃度> 1.0X 108cfu/mL ； (3)混合發酵菌液的制備 將(I)、(2)中發酵得到的鶴羽田戴爾福特菌、側孢芽胞桿菌、多粘類芽胞桿菌、解淀粉芽孢桿菌和肺炎克雷伯氏菌按照體積比2:1:1:1:1混合，制得混合發酵菌液； (4)微生物肥料的制備 將菜籽餅、大豆餅按照重量比1:1混勻作為有機物料，添加氮磷鉀肥按照純氮:純磷:純鉀重量比為3:1:1混勻作為混合肥料，將有機物料中加入混合肥料，混勻后添加混合發酵菌液，同時添加無菌水，在發酵罐中發酵I周；發酵結束后，將發酵后的肥料與腐殖酸、草炭混勻，經對輥擠壓式造粒機制備抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料，并檢測微生物肥料的活芽孢、有機質和水分含量，使活芽孢含量> 1.0X 108cfu/g，有機質含量> 60%，水份含量控制在8-10%之間，檢驗合格后包裝。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征是，所述發酵培養基的配方為:大豆粉5g/L，玉米粉5g/L，酵母提取物5g/L，紅糖50g/L，碳酸鈣lg/L，MnS045mg/L，pH7.0-7.2，用蒸餾水配制。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征是，步驟⑷中，每kg有機物料加12-15g混合肥料；每噸有機肥料添加50L混合發酵菌液；每kg有機物料添加200ml的無菌水。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征是，步驟(4)中，發酵后的肥料與腐殖酸、草炭的重量比為10:1:2。
5.根據權利要求1~4任一所述的制備方法制得的抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料。
【文檔編號】A01P3/00GK103980047SQ201410214634
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年5月19日 優先權日:2014年5月19日
【發明者】張義凱, 朱德峰 申請人:中國水稻研究所