一種利用根誘導原球莖快速繁殖國蘭的方法及其培養基的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種利用根誘導原球莖快速繁殖國蘭的方法及其培養基，采用改良后含有植物生長調節劑（6-BA+PIC）和水解酪蛋白的MS培養基進行原球莖的誘導，針對國蘭根外植體，采用特定培養方法，使國蘭根誘導原球莖，誘導率達75%以上，培養45天后根外植體原球莖數為15個以上，原球莖成活率為80%以上，植株生長健壯，直接生根。
【專利說明】一種利用根誘導原球莖快速繁殖國蘭的方法及其培養基
【技術領域】
[0001]本發明屬植物細胞工程【技術領域】，涉及一種利用根誘導原球莖快速繁殖國蘭的方法及其培養基。
【背景技術】
[0002]國蘭通常指蘭屬(Cymbidium)植物中的一部分地生種，如春蘭(Cymbidiumgoeringii)、蕙蘭(Cymbidium / aberi)、建蘭(Cymbidium ensijol)、墨蘭(Cymbidiumsinensis)、寒蘭(Cymbidiumkanran)及它們的變種春劍(Cymbidiumlongibracteatym)、蓮瓣蘭(Cymbidiumlianpan)等，是我國十大傳統名花之一，距今已有2500多年的栽培歷史。其昧幽香，花色淡雅，素有“花中君子”美稱，具有很高的觀賞價值和經濟價值。
[0003]大部分國蘭雜交種授粉獲得的種子在播種后，性狀會發生分離，難以保持母株的優良性狀。而傳統的分株繁殖系數低、速度慢、周期長，難以滿足規模化生產的需要，一些雜交種還可能由于高度不育而得不到種子。因此組織培養技術的應用無疑是最有效的繁殖方式。國蘭組織培養是在洋蘭組織培養的技術基礎上進一步發展而成，到20世紀末，春蘭、蕙蘭、建蘭、墨蘭、寒蘭、春劍、蓮瓣蘭和部分原產我國的氣生蘭品種，均用組織培養方法繁殖獲得成功。
[0004]目前國蘭組織培養成功的外植體主要是種子、莖尖和側芽，葉片和花芽成功的很少。理論上，凡是 生長健壯、具有強烈活性的細胞、組織、器官(如種子、側芽、莖尖、根、葉片、花粉、子房、花瓣等)都可以作為外植體，但不同蘭花種類所用的外植體部位也不盡相同。尤其是國蘭的組織培養受技術、母體數量等因素制約，應用的外植體種類相對較少。
[0005]根尖也是分生組織存在的部位，但在組織培養過程中，植物學家們認為從根分生組織轉化成芽分生組織的可能性微乎其微。國蘭根尖組織培養雖然也有人嘗試，但尚未見有成功的報道。李子紅也指出國蘭的根尖組織培養比較困難，需要對許多培養條件進行研究探討。
[0006]國蘭組織培養的一般程序為:外植體——誘導形成中間繁殖體(根狀莖、原球莖、胚狀體)——中間繁殖體擴繁——芽分化——根誘導——壯苗培養——試管苗移栽。
[0007]迄今為止，國蘭組織培養的過程比較繁瑣，成本高，要想提高效率，降低成本并進行快速繁殖，今后的研究重點應該是簡化繁殖過程，盡量避免誘導、繼代、育苗和生根4個階段用不同的培養基，探討能減少變異又能提高增殖系數，且再生植株生長健壯的中國蘭組織培養方法。
【發明內容】
[0008]本發明的目的在于提供一種利用國蘭根誘導原球莖的培養方法及其培養基，使國蘭根誘導原球莖的誘導率達100%，培養45天每個根外植體原球莖數達15個以上，原球莖成活率達80%以上，植株生長健壯，直接生根。[0009]本發明的利用根誘導原球莖快速繁殖國蘭的方法，包括以下步驟:
[0010]I)選取國蘭無菌苗的根，接種于培養基中，進行暗培養，獲得原球莖，培養室溫度為25±2°C ;所述的培養基組分為:MS基本培養基+蔗糖+瓊脂粉+水解酪蛋白，以及由6-芐氨基嘌呤+毒莠定組成的植物生長調節劑；
[0011]2)將暗培養獲得的原球莖轉到光下進行培養，每天10-16小時光照，溫度為25 ±2 °C，原球莖逐漸變綠；
[0012]3)將變綠的原球莖轉接到置于培養瓶的培養基中，逐漸發育成正常植株，同時生根；所述培養基為步驟I)中不含6-芐氨基嘌呤+毒莠定+水解酪蛋白的培養基；
[0013]4)室溫，打開瓶蓋煉苗，I周后種植于溫室穴盤中。
[0014]優選地，步驟I)中所述的的培養基組分用量為:MS基本培養基+蔗糖20000-30000mg/L+瓊脂粉5000_7000mg/L+水解酪蛋白500mg/L，以及由6-芐氨基嘌呤
0.5-2mg/L+毒莠定0.5-2mg/L組成的植物生長調節劑。
[0015]優選地，步驟I)所述的培養基組分含量為:MS基本培養基+蔗糖30000mg/L+瓊脂粉5000mg/L+水解酪蛋白500mg/L,以及由6-節氨基嘌呤0.5mg/L+毒莠定0.5mg/L組成的植物生長調節劑。
[0016]本發明的一種用于根誘導原球莖快速繁殖國蘭的培養基，其組分為:MS基本培養基+蔗糖+瓊脂粉+水解酪蛋白，以及由6-芐氨基嘌呤+毒莠定組成的植物生長調節劑。
[0017]優選地，所述的培養基組分含量為:MS基本培養基+蔗糖20000-30000mg/L+瓊脂粉5000-7000mg /L+水解酪蛋白500mg/L，以及由6-芐氨基嘌呤0.5_2mg/L+毒莠定
0.5-2mg/L組成的植物生長調節劑。
[0018]其中，所述的MS基本培養基配方如下表1所示，mg/L表示每升MS培養基中含各成分的暈克數。
[0019]表1
【權利要求】
1.一種利用根誘導原球莖快速繁殖國蘭的方法，包括如下步驟， 1)選取國蘭無菌苗的根，接種于培養基中，進行暗培養，獲得原球莖，培養室溫度為25±2°C;所述的培養基組分為:MS基本培養基+蔗糖+瓊脂粉+水解酪蛋白，以及由6-芐氨基嘌呤+毒莠定組成的植物生長調節劑； 2)將暗培養獲得的原球莖轉到光下進行培養，每天10-16小時光照，溫度為25±2°C，原球莖逐漸變綠； 3)將變綠原球莖轉接到置于培養瓶的培養基中，逐漸發育成正常植株，同時生根；所述培養基為步驟I)中不含6-芐氨基嘌呤+毒莠定+水解酪蛋白的培養基； 4)室溫，打開瓶蓋煉苗，一周后種植于溫室穴盤中。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟I)所述的培養基組分含量為:MS基本培養基+蔗糖20000-30000mg/L+瓊脂粉5000_7000mg/L+水解酪蛋白500mg/L，以及由6-節氨基嘌呤0.5-2mg/L+毒莠定0.5_2mg/L組成的植物生長調節劑。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟I)所述的培養基組分含量為:MS基本培養基+蔗糖30000mg/L+瓊脂粉5000mg/L+水解酪蛋白500mg/L，以及由6-芐氨基嘌呤0.5mg/L+毒莠定0.5mg/L組成的植物生長調節劑。
4.一種用于根誘導原球莖快速繁殖國蘭的培養基，其組分為:MS基本培養基+蔗糖+瓊脂粉+水解酪蛋白，以及由6-芐氨基嘌呤+毒莠定組成的植物生長調節劑。
5.根據權利要求4所述的培養基，其特征在于，所述的培養基組分含量為:MS基本培養基+蔗糖20000-30000mg/L+瓊脂粉5000_7000mg/L+水解酪蛋白500mg/L，以及由6-芐氨基嘌呤0.5-2mg/L+毒莠定0.5-2mg/L`組成的植物生長調節劑。
【文檔編號】C05G3/00GK103843567SQ201410085648
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2014年3月10日 優先權日:2014年3月10日
【發明者】周音, 張建軍, 陳敏敏, 謝紀紅 申請人:上海市農業科學院