一種梨樹抗腐爛病快速鑒定方法
【專利摘要】本發明公開了一種梨樹抗腐爛病快速鑒定方法，該方法利用梨樹一年生休眠枝條的“皮孔相對面積”與人工接種梨樹的發病程度之間存在顯著的正相關這一規律，選取梨樹一年生休眠枝條，通過測定枝條表皮的“皮孔相對面積”，對梨樹的抗腐爛病進行分級；與現有技術相比，本發明具有快速、簡便、高效的特點。
【專利說明】一種梨樹抗腐爛病快速鑒定方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及的是一種梨樹疾病的鑒定方法，尤其涉及的是一種梨樹抗腐爛病快速鑒定方法。
【背景技術】
[0002]梨樹腐爛病在我國梨各主產區均有發生，以新疆、西北、華北等地發生較重。據目前調查，新疆庫爾勒香梨病株率已達50%~80%，西北地區酥梨病株率達30%~50% ;華北地區鴨梨、雪花梨發病株率均達30%以上。腐爛病具有發生區域廣、發病率高、難以控制的特點，發病嚴重的梨園，樹體病疤累累、枝干殘缺不全，甚至造成大量死樹或毀園，嚴重威脅到我國梨產業的健康發展。
[0003]通過新技術的開發和多種技術的集成，針對不同生態區組建可持續的梨腐爛病綜合防控技術體系，雖然可為提升我國梨腐爛病防控技術水平。但是，培育篩選出抗腐爛病的優良新品種、并進行大面積推廣，是有效控制梨樹腐爛病蔓延加重、保障我國梨的安全生產的必經之路。目前，鑒定梨樹不同品質資源對腐爛病的抗性，只有取一年生休眠枝條樣本，采用電烙鐵燙傷離體接種，或者對田間苗木進行刻傷原位接種。這樣，不僅需要活化培養大量的菌源，接種后尚需等待一周左右，才能統計試驗結果。由此可見，對于梨樹抗腐爛病鑒定評價，尚缺乏快速、簡便、有效的方法。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供了一種梨樹抗腐爛病快速鑒定方法，以提供一種快速、簡便、有效的方法鑒定出高抗類型的梨樹抗腐爛病品種。
[0005]本發明是通過以下技術方案實現的，本發明包括以下步驟:
[0006]一種梨樹抗腐爛病快速鑒定方法，包括以下步驟:
[0007](I)取梨樹一年生休眠枝條,剝下枝條的表皮,測定表皮上的皮孔占整個表皮的面積比率，獲得“皮孔相對面積”;
[0008](2)抗病性分級:“皮孔相對面積” (2%的梨樹品種為高抗類型，“皮孔相對面積”在開區間(2%，6%)的梨樹品種為中間類型，“皮孔相對面積”≥6%的梨樹品種為易感類型。
[0009]優選地，所述步驟(1)中，一年生休眠枝條為梨樹落葉后至萌芽前的樹冠外圍的一年生枝條。
[0010]優選地，所述步驟(1)中，一年生休眠枝條的取樣部位為枝條的中部。
[0011]優選地,所述步驟(1)中,表皮的剝取面積為I~2平方厘米。
[0012]優選地，所述步驟(1)中，“皮孔相對面積”的測定方法為:首先用300dpi以上精度掃描表皮，保存成像，測定表皮的總像素值和皮孔的總像素值，皮孔的總像素值與表皮的總像素值的比率即為“皮孔相對面積”。
[0013]本發明的工作原理是:本發明選取了各種類品種代表資源38份(來源于梨屬的12個種)，用傳統電烙鐵燙傷、離體接種法鑒定不同品種資源對腐爛病的抗性，再通過形態學、細胞學、生理學和分子生物學等方面指標的測定結果進行相關性分析，最終發現，梨樹一年生休眠枝條的“皮孔相對面積”與人工接種梨樹的發病程度之間存在顯著的正相關(其相關系數r=0.9381)。因此，確立了用“皮孔相對面積”替代傳統接種方法鑒定梨樹不同品種資源對腐爛病的抗性程度的可行性。
[0014]本發明相比現有技術具有以下優點:本發明提供了一種梨樹抗腐爛病快速鑒定方法，該方法只需剝取梨樹一年生休眠枝條的表皮，測定“皮孔相對面積”，即可將梨樹抗腐爛病定性分級，具有快速、簡便、高效的特點；而傳統的電烙鐵燙傷、離體接種法，接種前需要活化大量菌種，接種需要的枝條數量多，接種后需要培養7~10天才能進行觀察鑒定，鑒定周期長。
【具體實施方式】
[0015]下面對本發明的實施例作詳細說明，本實施例在以本發明技術方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發明的保護范圍不限于下述的實施例。
[0016]實施例1
[0017]本實施例選取六月鮮梨、南果梨和蒲城雪三種梨樹品種代表資源，進行抗腐爛病快速鑒定，包括以下步驟:
[0018](I)分別取落葉后至萌芽前的上述兩種梨樹品種的樹冠外圍一年生休眠枝條，剝下枝條中部的表皮，所 述表皮的剝取面積約I平方厘米，用透明粘膠將表皮固定于白紙上，重復5次；
[0019]a、以300bpi精度的掃描儀掃描固定在白紙上的表皮，保存成像；
[0020]b、運用photoshop圖像處理軟件，以正方形選擇工具選取皮孔分布均勻的單位表皮面積，在“圖像”菜單中的“直方圖”欄目中查得該單位表皮面積的像素值Sa ；
[0021 ] c、增加圖像的“亮度”和“對比度”，選擇“魔棒工具”，調整“容差”值，使得“魔棒工具”正好能夠選定所有皮孔為宜，然后在“圖像”菜單中的“直方圖”欄目中查得該單位表皮面積內皮孔面積的像素值La ；
[0022]d、計算枝條表皮的“皮孔相對面積” RA (%)，RA=La/SaX 100% ；
[0023](2)抗病性分級:
[0024]六月鮮梨:La=806，Sa=43818,RA=L 84%，為高抗類型；
[0025]南果梨:La=2436，Sa=43820,RA=5.56%，為中間類型；
[0026]蒲城雪:La=4710，Sa=44019，RA=I0.70%,為易感類型。
[0027]實施例2
[0028]本實施例選取38份梨樹品種代表資源，涉及不同國家和地區的12個種和一個種間雜種，鑒定這38份梨樹品種資源的抗腐爛病程度，包括以下步驟:
[0029](I)于12月份選取上述38份梨樹品種代表資源，取樹冠外圍一年生休眠枝條3支，剝下枝條中部的表皮表皮的剝取面積約2平方厘米，用透明粘膠將表皮固定于白紙上；
[0030]a、以300bpi精度的掃描儀掃描固定在白紙上的表皮，保存成像；
[0031]b、運用photoshop圖像處理軟件，以正方形選擇工具選取皮孔分布均勻的單位表皮面積，在“圖像”菜單中的“直方圖”欄目中查得該單位表皮面積的像素值Sa ；[0032]c、增加圖像的“亮度”和“對比度”，選擇“魔棒工具”，調整“容差”值，使得“魔棒工具”正好能夠選定所有皮孔為宜，然后在“圖像”菜單中的“直方圖”欄目中查得該單位表皮面積內皮孔面積的像素值La ；
[0033]d、計算枝條表皮的“皮孔相對面積” RA (%)，RA=La/SaX 100% ；
[0034](2)抗病性分級:“皮孔相對面積” (2%的梨樹品種為高抗類型，“皮孔相對面積”在開區間(2%，6%)的梨樹品種為中間類型，“皮孔相對面積”≥6%的梨樹品種為易感類型，鑒定結果如表1所不。
[0035]同時，以上述38份梨樹品種代表資源的樹冠外圍一年生休眠枝條為試驗材料，采用電烙鐵燙傷、離體接種法作為對照組。每份資源取長30~40厘米枝段5根，在每根枝段的枝皮上用電烙鐵烙制3個直徑約5~7mm的傷口，傷口深度達木質部，其中4根枝條的傷口處接種用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基PDA培養4天、打孔直徑為5mm的腐爛病菌餅，另一根枝條傷口以無菌的PDA接種作為對照。各處理的枝段放塑料保鮮盒中，無菌濕潤紗布保濕，置于25°C恒溫培養3天后，每隔24小時觀察保濕與發病情況，在接種后IOd測量擴展病斑直徑，計算各品種病斑“擴展系數” Ec,代表各品種接種發病程度:
[0036]Ec= Σ (擴展病斑直徑一電烙鐵打孔直徑)/發病孔數。
[0037]依據接種點病斑擴展情況，將這38份梨樹品種代表資源進行抗病性分級，共劃分為三個等級:
[0038]高抗類型:Ec≤6 ;
[0039]中間類型:6〈Ec〈50;
[0040]易感類型:Ec≥50
[0041]本發明與傳統接種鑒定結果如下表1所示:
[0042]表1:梨樹品種代表資源抗腐爛病鑒定結果
[0043]
【權利要求】
1.一種梨樹抗腐爛病快速鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)取梨樹一年生休眠枝條，剝下枝條的表皮，測定表皮上的皮孔占整個表皮的面積比率，獲得“皮孔相對面積”； (2)抗病性分級:“皮孔相對面積”≤2%的梨樹品種為高抗類型，“皮孔相對面積”在開區間(2%，6%)的梨樹品種為中間類型，“皮孔相對面積” ≥ 6%的梨樹品種為易感類型。
2.如權利要求1所述的一種梨樹抗腐爛病快速鑒定方法，其特征在于，所述步驟(1)中，一年生休眠枝條為梨樹落葉后至萌芽前的樹冠外圍的一年生枝條。
3.如權利要求1或2任一所述的一種梨樹抗腐爛病快速鑒定方法，其特征在于，所述步驟(1)中，一年生休眠枝條的取樣部位為枝條的中部。
4.如權利要求1所述的一種梨樹抗腐爛病快速鑒定方法，其特征在于，所述步驟(1)中，表皮的剝取面積為1~2平方厘米。
5.如權利要求1所述的一種梨樹抗腐爛病快速鑒定方法，其特征在于，所述步驟(1)中，“皮孔相對面積”的測定方法為:首先用300dpi以上精度掃描表皮，保存成像，測定表皮的總像素值和皮孔的總像素值，皮孔的總像素值與表皮的總像素值的比率即為“皮孔相對面積”。
【文檔編號】A01G17/00GK103828678SQ201410079119
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2014年3月5日 優先權日:2014年3月5日
【發明者】朱立武, 賈兵, 衡偉, 葉振風, 劉莉, 劉普 申請人:安徽農業大學