一種胰膽管梗阻大鼠模型的構建方法
【專利摘要】本發明涉及一種胰膽管梗阻大鼠模型的構建方法，屬于動物病理模型構建【技術領域】。將SD大鼠麻醉后，于無菌環境下，將大鼠膽胰管進入十二指腸末端部位的腸段置于一硬質透明支撐片上；在膽胰管開口處遠端處從腸系膜對側緣輕壓住腸壁，使消化液聚積于膽胰管匯入的十二指腸段；用相同的方法，在膽胰管開口處近端處輕壓住十二指腸，十二指腸段因胃腸胰液脹滿而充盈；固定腸壁，并將密閉式靜脈留置針在胰膽管開口對側無血管區腸壁上插入，將穿刺針插入胰膽管，拔出針芯，再將留置軟管插入，封管后即完成胰膽管梗阻模型。采用本發明技術方案，具有穿刺成功率高、可復性好等優點。
【專利說明】一種胰膽管梗阻大鼠模型的構建方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種胰膽管梗阻大鼠模型的構建方法，屬于動物病理模型構建【技術領域】。
【背景技術】
[0002]急性重癥膽管炎(acute cholangitis severe type, ACST)是肝膽外科研究的熱點問題，建立良好的動物模型是疾病實驗性研究的基礎，目前應用最廣泛的ACST動物模型是膽道完全梗阻并注入細菌或內毒素的大鼠模型，該類模型系不可復性，不能模擬臨床上ACST解除膽道梗阻后的研究。也有一些文獻報道中胰膽管梗阻模型所選用的胰膽管在腸管開口處結扎，但該方法成功率不高，結扎不確切，建立膽管炎和胰腺炎模型較難；采用胰膽管分別穿刺置管的方式則容易造成膽漏和胰漏。
【發明內容】
[0003]為了克服現有技術中存在的上述缺陷，本發明提供一種新型的、無拘束、可復性的胰膽管梗阻大鼠模型的構建方法。
[0004]為實現上述目的，本發明采取的技術方案如下:
一種胰膽管梗阻大鼠模型的構建方法，將SD大鼠在乙醚輕度麻醉或I %異戊巴比妥鈉(50mg/kg)麻醉下，于無菌環境下進行如下處理:
(1)將大鼠膽胰管進入十二指腸末端部位的腸段置于一硬質透明支撐片上，可見透明的胰膽管斜行開口于十二指腸大乳頭，周圍粉紅色胰腺呈片狀包繞胰膽管；
(2)在膽胰管開口處遠端處 從腸系膜對側緣輕壓住腸壁，使消化液聚積于膽胰管匯入的十二指腸段；
(3)用與步驟(2)相同的方法，在膽胰管開口處近端處輕壓住十二指腸，十二指腸段因胃腸胰液脹滿而充盈，可清晰看見大鼠膽胰管進入十二指腸段隆起可見膽胰管開口于十二指腸腸壁位置；固定腸壁，并將密閉式靜脈留置針在胰膽管開口對側無血管區腸壁上插入，將穿刺針插入胰膽管，拔出針芯，再將留置軟管插入，封管后即完成胰膽管梗阻模型。
[0005]其中:
所述的密閉留置針采用0.7mm X 19mm型。
[0006]所述的密閉留置針可通過軟管與微泵注射裝置相連，以形成膽管炎和胰腺炎模型。
[0007]所述的硬質透明支撐片為硬質透明塑料片。
[0008]采用上述技術方案構建本模型的優點如下:
(O十二指腸段下方放置有透明薄塑料片，術者可持此操作，易于拿持，不容易造成腸管水腫，提高穿刺的成功率，并為手術部位提供平穩固定的平臺。
[0009]( 2 )消毒棉簽輕壓住膽胰管開口兩端腸壁，十二指腸袢被胃腸膽汁液體充盈后，膽胰管腸壁開口也稍有充盈，顯露清晰，更利于穿刺。[0010](3)密閉式靜脈留置針采用0.7_ X 19mm型，留置針硬質針芯細而尖，易于穿入腸壁及胰膽管開口處；取出針芯后，軟管仍可以留置在胰膽管內，一方面可以動態觀察胰膽管壓力變化和胰膽液的分泌情況，另一方面可以非常方便地通過軟管注射藥物制作膽管炎和胰腺炎模型，而放置軟管的方式也可以避免了注射藥物反流入十二指腸。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0011]圖1為ACST組24h肝臟組織HE染色圖(X 100);
圖2 SO組24h肝臟組織HE染色圖(X 100);
圖3為ACST組72h肝臟組織HE染色圖(X 100);
圖4 SO組72h肝臟組織HE染色圖(X 100)。
【具體實施方式】
[0012]材料與方法
1.1 一般材料選用二級清潔健康Sprague-Dawley(SD)大鼠(由浙江省實驗動物中心提供)26只，雄性，體重227~385 g，平均(314.75±56.22)g。標準顆粒混合飼料(浙江省實驗動物中心提供)喂養，所有大鼠實驗期間禁食，靜脈給予葡萄糖4.5 mg-kg-1 iin'將大鼠按月齡、體重兩兩配對同窩飼養，分為兩組:ACST模型組(ACST組，/7=13)和假手術組(S0組，/7=13)。兩組一般資料比較，差異均無統計學意義Gd均>0.05)。
[0013]1.2 方法
1.2.1導管制備選用人外徑約0.9mm的硬膜外麻醉導管(由浙江海圣醫療器械有限公司生產)，并從近端(即鈍頭，含側孔)剪下長約5 cm 一段，遠端連接帶有封帽的注射組件，用于膽總管置管。所余一段用于頸外靜脈置管，其近端加熱并略拉長，使其變軟為平口，防止刺穿血管壁,遠端組件接微電腦數字式注射泵。
[0014]1.2.2模型建立所有大鼠置管前禁食6 h，自由飲水。SO組在無菌條件下進入腹腔，鈍性剝離膽總管周圍組織后關閉腹腔;ACST組的SD大鼠在乙醚輕度麻醉或1%異戊巴比妥鈉(50mg/kg)麻醉下，無菌環境下取上腹正中長約Icm的切口，用眼科鑷緩慢拉出膽胰管進入十二指腸末端部位的腸段置于一硬質透明薄塑料片上。可見透明的胰膽管斜行開口于十二指腸大乳頭，周圍粉紅色胰腺呈片狀包繞胰膽管。在膽胰管開口處遠端約I cm處從腸系膜對側緣應用消毒棉簽輕壓住腸壁，使消化液聚積于膽胰管匯入的十二指腸段。Imin后用同法，在膽胰管開口處近端約Icm處用消毒棉簽輕壓住十二指腸，十二指腸段因胃腸胰液脹滿而充盈，可清晰看見大鼠膽胰管進入十二指腸段隆起可見膽胰管開口于十二指腸腸壁位置。左手固定腸壁，右手用密閉式靜脈留置針(連接微泵注射裝置容易形成膽管炎和胰腺炎模型)在胰膽管開口對側無血管區腸壁上緩慢插入，將穿刺針緩慢插入胰膽管約3 _，拔出針芯，再將留置軟管插入2_，封管后即完成胰膽管梗阻模型。
[0015]1.3檢測指標
1.3.1膽總管壓力監測
ACST組于膽總管 結扎后O h、24 h、48 h、72 h，導管接MX9505T型壓力傳感器(由美國Medex公司生產)監測膽總管壓力(CmH2O表示)。
[0016]1.3.2實驗室檢測各組分別于膽總管內注射內毒素后O h、12 h、24 h、48 h采靜脈血，用雅培AeiOset全自動生化分析儀(由美國雅培公司生產)檢測血清膽紅素(total bilirubin , TBIL),谷丙轉氨酶(alanine aminotransferase , ALT);利用雙抗夾心免疫酶聯吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA)法測定血清腫瘤壞死因子(tumornecrosis factor, TNF-α ), ELISA試劑盒為武漢意德生物技術有限公司生產。
[0017]1.3.3肝臟組織病理檢查
分別于造模(建立模型)后24小時各組隨機處死4只大鼠，分別取肝組織置于10%甲醒溶液中固定24小時后常規石臘切片，蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosinstaining,HE染色，光學顯微鏡下觀察)。72小時各組處死所有大鼠，以同樣方法進行病理學觀察。對肝組織損傷程度作半定量分析，半定量分析賦值標準為組織結構正常，記O分；“ + ”為可見肝細胞點狀壞死，記I分；“++”為肝細胞壞死范圍< 1/3，記2分；“+++”為肝細胞壞死范圍占肝小葉1/3~2/3,記3分；“++++”為肝細胞壞死范圍> 2/3,記4分。
[0018]1.4統計學方法采用SPSS 17.0軟件；計量資料采用均數土標準差(
表示；計量資料采用t檢驗。設P < 0.05為差異有統計學意義。
[0019]結果
2.1實驗結果
所有實驗大鼠均于術后Ih內清醒，ACST組12h出現疲倦，雙眼灰黃無光澤；24h蜷伏，口唇青紫，不飲不食，少尿，尿色深黃。SO組清醒后正常飲水，活動稍減少，12h后一般情況與手術前無明顯差異。所有大鼠處死時打開腹腔觀察，無一導管脫落及膽漏情況。
[0020]2.2 ACST組不同時點膽總管壓力比較
Oh、24 h、48 h、72 h 的膽總管壓力分別為(4.82±0.21)cmH20、(6.47±0.44)cmH20、(7.64±0.42) CmH2O, (11.10±0.72) cmH20, ACST組隨著造模時間的延長，膽總管壓力逐漸提高，不同時點間差異均有統計學意義(?分別=10.69、6.21、13.41，P均< 0.05)。
[0021]2.3.兩組各時點TBIL、ALT和NF-α的變化見表1。
[0022]表1兩組各時點TBIL、ALT和TNF- α的變化
【權利要求】
1.一種胰膽管梗阻大鼠模型的構建方法，其特征在于，將SD大鼠麻醉后，于無菌環境下進行如下處理: (1)將大鼠膽胰管進入十二指腸末端部位的腸段置于一硬質透明支撐片上，可見透明的胰膽管斜行開口于十二指腸大乳頭，周圍粉紅色胰腺呈片狀包繞胰膽管； (2)在膽胰管開口處遠端處從腸系膜對側緣輕壓住腸壁，使消化液聚積于膽胰管匯入的十二指腸段； (3)用與步驟(2)相同的方法，在膽胰管開口處近端處輕壓住十二指腸，十二指腸段因胃腸胰液脹滿而充盈，可清晰看見大鼠膽胰管進入十二指腸段隆起可見膽胰管開口于十二指腸腸壁位置；固定腸壁，并將密閉式靜脈留置針在胰膽管開口對側無血管區腸壁上插入，將穿刺針插入胰膽管，拔出針芯，再將留置軟管插入，封管后即完成胰膽管梗阻模型。
2.如權利要求1所述的一種胰膽管梗阻大鼠模型的構建方法，其特征在于:所述的密閉留置針采用0.7mmxl9mm型。
3.如權利要求1所述的一種胰膽管梗阻大鼠模型的構建方法，其特征在于:所述的硬質透明支撐片為硬質透明塑料片。
4.如權利要求1所述的一種胰膽管梗阻大鼠模型的構建方法，其特征在于:步驟(1)中，SD大鼠通過乙醚或1 %異戊巴比妥鈉麻醉。
5.如權利要求1-4任一項所述的一種胰膽管梗阻大鼠模型的構建方法,其特征在于:所述的密閉留置針可通過軟管與微泵注射裝置相連，以形成膽管炎和胰腺炎模型。
【文檔編號】A61D1/00GK103815979SQ201410052728
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年2月17日 優先權日:2014年2月17日
【發明者】魯葆春 申請人:紹興市人民醫院