一種小鼠胃癌模型的建立方法
【專利摘要】本發明公開了一種小鼠胃癌模型的建立方法。取4周齡C57BL/6小鼠，將小鼠至于能夠束縛其活動但能夠自由呼吸的管狀裝置中，每天6～8小時，持續25～30天為一個應激周期，每個應激周期間隔5～7天，共2-3個應激周期；在應激的同時，給予小鼠含有N-亞硝基化合物的飲水，給藥一周間隔一周再給藥，給藥間期給予正常飲水，總共給藥5周；給藥結束后常規飼養35周，獲得胃癌小鼠。以往文獻報道單純MNU處理C57BL/6小鼠后胃癌的形成率約為30%左右，本發明將MNU處理和應激處理相結合后，C57BL/6小鼠的胃癌形成率上升至60%。
【專利說明】一種小鼠胃癌模型的建立方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于實驗【技術領域】，涉及一種小鼠胃癌模型的建立方法。
【背景技術】
[0002]目前，小鼠胃癌模型分為自發成瘤模型和移植瘤模型。移植瘤模型采用的是免疫缺陷小鼠(如無胸腺裸鼠、SCID小鼠),將腫瘤細胞或瘤塊移植進免疫缺陷鼠體內后形成腫瘤。小鼠胃癌自發瘤模型又分為基因工程小鼠胃癌模型和環境因子刺激胃癌模型。現在世界上共有3種基因工程小鼠胃癌模型:INS-GAS小鼠、TFF-1knockout小鼠和RunnX3knockout小鼠。這些小鼠均是利用小鼠胚胎干細胞的基因同源重組，將特定基因在小鼠基因組上敲除或敲入。目前，已經成功在小鼠體內誘導發生胃癌的環境因子包括:幽門螺桿菌(Cancer Res65:10709 - 10715)、亞硝基化合物 MNNG (Gann70:343 - 352)和 MNU(Jpn J Cancer Res84:1258 - 1264)。幽門螺桿菌在體外擴增后，給小鼠進行灌胃來使其定植于胃內。MNNG和MNU是混在小鼠的飲水中，給小鼠連續飲用誘發胃癌。
[0003]小鼠移植瘤胃癌模型一直都飽受爭議，因為移植物并非小鼠自身形成的腫瘤，并不能反映體內成瘤的真正過程。此外，目前的腫瘤領域研究發現，機體的免疫系統微環境在腫瘤形成過程中起到了重要作用，而免疫缺陷鼠缺乏正常的免疫系統，因此，利用這個模型進行研究勢必會產生誤差。 [0004]自發成瘤模型因其類似人體內腫瘤的發生過程而被廣泛認可，胃癌的形成是一個多因素的過程，包括了基因的突變、環境的刺激等，而基因工程小鼠胃癌模型僅將一個基因進行突變，未將重要的環境因素納入，因此，環境因子刺激胃癌模型比基因工程小鼠模型更接近人體胃癌的自然形成過程。
[0005]目前，僅一篇文獻報道了成功利用幽門螺桿菌在小鼠體內誘導胃癌，且主要為上皮內瘤變(Cancer Res65:10709 - 10715)。MNNG用于小鼠胃癌誘導模型的成功率在文獻中報道不一，有兩篇文獻報道了誘導成功(Methods Cancer Res7:245 - 308，Gann70:343 -352)，其余均未誘導成功。MNU目前被證實具有較穩定的成瘤率，在C57BL/6小鼠中的成瘤率約為 30% 左右(Carcinogenesis29 (8): 1648-1654)。
【發明內容】
[0006]本發明的目的是針對現有技術的上述缺陷，提供一種小鼠胃癌模型的建立方法。
[0007]本發明的目的可通過以下技術方案實現:
[0008]一種小鼠胃癌模型的建立方法，取4周齡C57BL/6小鼠，將小鼠至于能夠束縛其活動但能夠自由呼吸的管狀裝置中，每天6~8小時，持續25~30天為一個應激周期，每個應激周期間隔5~7天，共2-3個應激周期；在應激的同時，給予小鼠含有N-亞硝基化合物的飲水，給藥一周間隔一周再給藥，給藥間期給予正常飲水，總共給藥5周；給藥結束后常規飼養30~35周，獲得胃癌小鼠。
[0009]所述的小鼠胃癌模型的建立方法，優選將小鼠至于能夠束縛其活動但能夠自由呼吸的管狀裝置中，每天6小時，持續28天為一個應激周期。
[0010]所述的能夠束縛其活動但能夠自由呼吸的管狀裝置優選為管身戳有5-10個洞的50ml離心管,或其類似裝置。
[0011 ] 所述的N-亞硝基化合物優選η-甲基-η-亞硝基脲。
[0012]所述的含有η-甲基-η-亞硝基脲的飲水中η_甲基_η_亞硝基脲的濃度優選240~300ppm,進一步優選24ppm。對飲水的總量不進行控制。
[0013]有益效果:[0014]應激在腫瘤形成過程中具有重要的，但目前還沒有應激在胃癌中形成中的相關研究。本發明的發明點在于發現了應激具有促進胃癌發生的作用，并以此為基礎輔以特定劑量的N-亞硝基化合物，特別是MNU建立了小鼠胃癌模型，該方法具有以下優點:
[0015]1.小鼠慢性應激反應明顯:該模型使小鼠產生明顯的行動抑制，體重增加，血漿中皮質酮升高。
[0016]2.小鼠胃癌形成率升高:以往文獻報道單純MNU處理C57BL/6小鼠后胃癌的形成率約為30%左右，本發明在應急處理的基礎上結合N-亞硝基化合物處理后，C57BL/6小鼠的胃癌形成率上升至60%。
[0017]3.本法明的在N-亞硝基化合物中優選MNU，因為其誘導胃癌穩定性好。劑量優選240~300ppm，因為大劑量的MNU會產生消化道其他部位腫瘤，且小鼠很難耐受其毒性。應激周期選3個周期，以利于誘導慢性應激。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0018]圖1小鼠束縛模型
[0019]圖2小鼠胃癌標本
[0020]圖3小鼠胃癌組織切片HE染色
【具體實施方式】
[0021]實施例1
[0022]1.胃癌誘導化合物:MNlKn-甲基-η-亞硝基脲,N-methyl-Nnitrosourea)。給藥途徑:溶于小鼠飲水中。劑量:240ppm。
[0023]2.應激模具:50ml離心管(戳5-10個小洞)
[0024]3.步驟:
[0025]取4周齡C57BL/6小鼠，將小鼠放進50ml離心管中(戳5_10個小洞)，束縛其活動，每只離心管放一只小鼠，每天6小時，持續28天為一個應激周期，每個應激周期間隔5天，共3個應激周期。在應激的同時，給予小鼠含有MNU的飲水，給藥一周間隔一周再給藥，給藥間期給予正常飲水，總共給藥5周。同時設置僅給予小鼠含有MNU的飲水不進行應激處理的MNU組和僅按照上述方法進行應激處理的應激組。給藥結束后常規飼養35周，再斷頸處死小鼠，取出胃組織，HE染色確定病變性質，并且測定小鼠的體重、胃組織中皮質酮、測量腫瘤大小，計算成瘤率，結果見圖1和表1。由表1可見，本發明聯合使用MNU和應激較之單獨使用MNU成瘤率顯著提高，能夠更好地誘導胃癌的發生。
[0026]表1[0027]
【權利要求】
1.一種小鼠胃癌模型的建立方法，其特征在于取4周齡C57BL/6小鼠，將小鼠至于能夠束縛其活動但能夠自由呼吸的管狀裝置中，每天6~8小時，持續25~30天為一個應激周期，每個應激周期間隔5~7天，共2-3個應激周期；在應激的同時，給予小鼠含有N-亞硝基化合物的飲水，給藥一周間隔一周再給藥，總共給藥5周，給藥間期給予正常飲水；給藥結束后常規飼養30~35周，獲得胃癌小鼠。
2.根據權利要求1所述的小鼠胃癌模型的建立方法，其特征在于將小鼠至于能夠束縛其活動但能夠自由呼吸的管狀裝置中，每天6小時，持續28天為一個應激周期。
3.根據權利要求1或2所述的小鼠胃癌模型的建立方法，其特征在于所述的能夠束縛其活動但能夠自由呼吸的管狀裝置為管身戳有5-10個洞的50ml離心管，或其類似裝置。
4.根據權利要求1所述的鼠胃癌模型的建立方法，其特征在于所述的N-亞硝基化合物為n_甲基_η_亞硝基服。
5.根據權利要求4所述的鼠胃癌模型的建立方法，其特征在于所述的含有η-甲基-η-亞硝基脲的飲水中η-甲基-η-亞硝基脲的濃度為200~280ppm。
6.根據權利要求5所述的鼠胃癌模型的建立方法，其特征在于所述的含有η-甲基-η-亞硝基脲的飲水中η-甲基-η-亞硝 基脲的濃度為240ppm。
【文檔編號】A61D3/00GK103750916SQ201410038030
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2014年1月26日 優先權日:2014年1月26日
【發明者】支小飛, 徐皓, 楊力, 徐澤寬 申請人:徐澤寬