可降低鐵皮石斛組培苗污染率的培養(yǎng)基的制作方法
【專(zhuān)利摘要】可降低鐵皮石斛組培苗污染率的培養(yǎng)基，包括1/2MS+IBA、AC，還包括茶多酚。該培養(yǎng)基利用天然抗菌素茶多酚的抗菌特性，可解決鐵皮石斛組培苗污染率高的問(wèn)題，將污染率大大降低，在規(guī)?；a(chǎn)中能降低成本，提高效益。
【專(zhuān)利說(shuō)明】可降低鐵皮石斛組培苗污染率的培養(yǎng)基
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種可降低鐵皮石斛組培苗污染率的培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002]鐵皮石斛，為蘭科多年生附生草本植物。生于海拔達(dá)1600米的山地半陰濕的巖石上，喜溫暖濕潤(rùn)氣候和半陰半陽(yáng)的環(huán)境，不耐寒。石斛可分為黃草、金釵、馬鞭等數(shù)十種，鐵皮石斛為石斛之極品，鐵皮石斛因表皮呈鐵綠色而得名。鐵皮石斛具有獨(dú)特的藥用價(jià)值，以其莖入藥，中藥名:石斛，屬補(bǔ)益藥中的補(bǔ)陰藥，《中國(guó)藥典》:益胃生津，滋陰清熱。鐵皮石斛等少數(shù)品種之嫩莖，扭成螺旋狀或彈簧狀，曬干，商品稱(chēng)為耳環(huán)石斛，又名楓斗。
[0003]多年以來(lái)，商品石斛主要依靠野生藥用石斛資源，隨著藥用石斛開(kāi)發(fā)利用的不斷深入和國(guó)內(nèi)外需求量的逐年增加，我國(guó)野生藥用石斛資源遭到了嚴(yán)重破壞，有些地區(qū)甚至面臨枯竭。為了保護(hù)野生蘭科植物資源，各國(guó)都出臺(tái)了許多禁止采挖或銷(xiāo)售野生蘭科植物的法規(guī)和條例，如1975年生效的《瀕危野生動(dòng)植物種國(guó)際貿(mào)易公約》(cITEs)，把所有蘭科植物全部列入附錄I和II中；于1987年國(guó)務(wù)院出臺(tái)的《野生藥材資源保護(hù)管理?xiàng)l例》中，環(huán)草石斛、黃草石斛、金釵石斛、馬鞭石斛和鐵皮石斛被列為國(guó)家三級(jí)珍稀瀕危保護(hù)植物。這些政策措施對(duì)野生藥用石斛資源的妥善保護(hù)起到了重要作用。
[0004]傳統(tǒng)鐵皮石斛組織培養(yǎng)小植株主要依靠培養(yǎng)基中的糖作為碳源，極易引起微生物的污染。培養(yǎng)基被污染后會(huì)導(dǎo)致鐵皮石斛組培苗停止生長(zhǎng)、畸形、死亡等，嚴(yán)重影響工廠生產(chǎn)，損害工廠利益。
[0005]申請(qǐng)?zhí)枮?0121`0374262.5鐵皮石斛在非無(wú)菌條件下無(wú)糖微體快繁技術(shù)，提供了一種非無(wú)菌條件下無(wú)糖微體快繁技術(shù)，用松樹(shù)皮粗粉加入1/2MS培養(yǎng)基為基質(zhì)，不含糖及瓊脂，減少了細(xì)菌生長(zhǎng)所需要的碳源，降低了培養(yǎng)基的污染率。但是同時(shí)也減少了鐵皮石斛組培苗生長(zhǎng)所需要的碳源，影響了鐵皮石斛組培苗的正常生長(zhǎng)。
[0006]又如用申請(qǐng)?zhí)枮?01310029289.5 一種鐵皮石斛無(wú)糖組織培養(yǎng)方法，用CO2替代糖作為小植株生長(zhǎng)的唯一碳源，通過(guò)強(qiáng)制性換氣系統(tǒng)供給小植株生長(zhǎng)所需CO2，使其在人工光照下，吸收CO2進(jìn)行完全的自養(yǎng)生長(zhǎng)，在一定程度上避免了微生物的污染。但是其操作復(fù)雜，對(duì)于現(xiàn)有設(shè)備需要較大投入，可行性不強(qiáng)。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007]本發(fā)明的目的在于提供一種可降低鐵皮石斛組培苗污染率的培養(yǎng)基，該配方可解決鐵皮石斛組培苗污染率高的問(wèn)題。
[0008]可降低鐵皮石斛組培苗污染率的培養(yǎng)基，包括1/2MS+IBA、AC，其特征在于:還包括茶多酚。
[0009]本發(fā)明中，茶多酚的總酚含量最好要求> 50%。這樣可以更好地保證茶多酚的純度，確保其抗菌效果。[0010]所述培養(yǎng)基的配比為:1/ 2MS+IBA:0.1 ~0.5mg / L，AC:10 ~50mg / L，茶多酌.0.5 ~20mg / L0
[0011]更優(yōu)化的配比為:I/ 2MS+IBA:0.I ~0.5mg / L，AC:15 ~30mg / L，茶多酚 2 ~IOmg / L0
[0012]最佳配比為:1/ 2MS+IBA:0.3mg / L, AC:25mg / L,茶多酌'jmg / L。
[0013]培養(yǎng)基中還包括蔗糖。
[0014]蔗糖用量為15~25g / L。
[0015]最佳蔗糖用量為20g / L。
[0016]培養(yǎng)基pH值調(diào)節(jié)為5.0~6.0。
[0017]更優(yōu)化的方案是將培養(yǎng)基pH值調(diào)節(jié)為5.2~5.4。
[0018]茶多酹(tea polyphenol, TP)是從天然植物茶葉中分離提純出來(lái)的多酹類(lèi)化合物的復(fù)合體，具有多種保健功能和藥理效應(yīng)，如抗菌、抗病毒、抗毒素、防癌、抗癌、抗突變、降血脂、降血糖、防止動(dòng)脈硬化和血栓形成、保護(hù)肝臟、抗衰老、抗齲齒、抗過(guò)敏等，此外對(duì)于免疫系統(tǒng)的疾病，特別是艾滋病也具有良好的預(yù)防和治療功效。
[0019]茶多酚作為一種廣譜、強(qiáng)效、低毒的抗菌藥物已經(jīng)被世界上許多國(guó)家的學(xué)者所公認(rèn)。在眾多的抗菌試驗(yàn)中，人們發(fā)現(xiàn)它對(duì)普通變形桿菌、金葡球菌、表皮葡萄球菌、變形鏈球菌、霍亂弧菌、大腸桿菌等許多致病菌，尤其是對(duì)腸道致病菌具有不同程度的抑制和殺傷作用。
`[0020]本發(fā)明在培養(yǎng)基中加入茶多酚天然抗菌素，能有效降低培養(yǎng)基的污染率。
[0021]本發(fā)明的培養(yǎng)基在應(yīng)用于鐵皮石斛組織培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)溫度為20°C~28°C，培養(yǎng)光照條件為自然光200(T2500 LUX+人工輔助光150(T2000 LUX，連續(xù)光照培養(yǎng)時(shí)間為8~20h /天。
[0022]本發(fā)明的可降低鐵皮石斛組培苗污染率的培養(yǎng)基，與傳統(tǒng)鐵皮石斛培養(yǎng)基相比，添加了茶多酚作為天然抗菌素，在同等的操作環(huán)境，培養(yǎng)環(huán)境下，使用無(wú)添加天然抗菌素的培養(yǎng)基，在鐵皮石斛的組織培養(yǎng)全過(guò)程中，污染率在3~6%。而添加適量天然抗菌素茶多酚，污染率可控制在I~4%，在規(guī)?；a(chǎn)中能降低成本，提高效益。
【具體實(shí)施方式】
[0023]實(shí)施例1
選擇典型性狀健康的鐵皮石斛種苗的莖，以莖芽為中心上下各留0.5cm剪下莖段作為鐵皮石斛組織培養(yǎng)的外植體。
[0024]使用本發(fā)明的培養(yǎng)基:1/ 2MS+IBA:0.3mg / L，AC:25mg / L，茶多酚 5mg / L，添加蔗糖量為20g / L。茶多酚的多酚含量為80%。培養(yǎng)基pH值為5.3。
[0025]將外植體接種至培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為25°C，培養(yǎng)基光照條件為自然光2200LUX+人工輔助光1800 LUX，連續(xù)光照培養(yǎng)時(shí)間為12h /天。
[0026]另外使用沒(méi)有添加茶多酚的培養(yǎng)基:1 / 2MS+IBA:0.3mg / L，AC:25mg / L，添加蔗糖量為20g / L。在上述同樣條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
[0027]觀察檢查污染率。使用本發(fā)明的培養(yǎng)基的污染率為2%，而使用沒(méi)有添加茶多酚的培養(yǎng)基的污染率為5%。[0028]實(shí)施例2
選擇典型性狀健康的鐵皮石斛種苗的莖，以莖芽為中心上下各留0.5cm剪下莖段作為鐵皮石斛組織培養(yǎng)的外植體。
[0029]使用本發(fā)明的培養(yǎng)基:1/ 2MS+IBA:0.4mg / L，AC:30mg / L，茶多酚 IOmg / L，添加蔗糖量為15g / L。茶多酚的多酚含量為60%。培養(yǎng)基pH值為5.0。
[0030]將外植體接種至培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為23°C，培養(yǎng)基光照條件為自然光2500 LUX+人工輔助光1500 LUX，連續(xù)光照培養(yǎng)時(shí)間為15h /天。
[0031]另外使用沒(méi)有添加茶多酚的培養(yǎng)基:1 / 2MS+IBA:0.4mg / L，AC:30mg / L，茶多酚IOmg / L，添加蔗糖量為15g / L。在上述同樣條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
[0032]觀察檢查污染率。使用本發(fā)明的培養(yǎng)基的污染率為1%，而使用沒(méi)有添加茶多酚的培養(yǎng)基的污染率為4%。
[0033]實(shí)施例3
選擇典型性狀健康的鐵皮石斛種苗的莖，以莖芽為中心上下各留0.5cm剪下莖段作為鐵皮石斛組織培養(yǎng)的外植體。
[0034]使用本發(fā)明的培養(yǎng)基:1/ 2MS+IBA:0.2mg / L，AC:15mg / L，茶多酚 2mg / L，添加蔗糖量為25g / L。茶多酚的多酚含量為90%。培養(yǎng)基pH值為5.5。
[0035]將外植體接種至培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為28°C，培養(yǎng)基光照條件為自然光2000LUX+人工輔助光2000 LUX，連續(xù)光照培養(yǎng)時(shí)間為20h /天。
[0036]另外使用沒(méi)有添加茶多酚的培養(yǎng)基:1 / 2MS+IBA:0.2mg / L，AC:15mg / L，茶多酚2mg / L，添加蔗糖量為25g / L。在上述同樣條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
[0037]觀察檢查污染率。使用本發(fā)明的培養(yǎng)基的污染率為2%，而使用沒(méi)有添加茶多酚的培養(yǎng)基的污染率為6%。
[0038]實(shí)施例4
選擇典型性狀健康的鐵皮石斛種苗的莖，以莖芽為中心上下各留0.5cm剪下莖段作為鐵皮石斛組織培養(yǎng)的外植體。
[0039]使用本發(fā)明的培養(yǎng)基:1/ 2MS+IBA:0.1mg / L,AC:10mg / L,茶多酹 Img / L,添加蔗糖量為18g / L0茶多酚的多酚含量為70%。培養(yǎng)基pH值為5.3。
[0040]將外植體接種至培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為20°C，培養(yǎng)基光照條件為自然光2400LUX+人工輔助光1600 LUX，連續(xù)光照培養(yǎng)時(shí)間為IOh /天。
[0041]另外使用沒(méi)有添加茶多酚的培養(yǎng)基:1 / 2MS+IBA:0.1mg / L，AC:10mg / L，茶多酚Img / L，添加蔗糖量為18g / L。在上述同樣條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
[0042]觀察檢查污染率。使用本發(fā)明的培養(yǎng)基的污染率為3%，而使用沒(méi)有添加茶多酚的培養(yǎng)基的污染率為6%。
[0043]實(shí)施例5
選擇典型性狀健康的鐵皮石斛種苗的莖，以莖芽為中心上下各留0.5cm剪下莖段作為鐵皮石斛組織培養(yǎng)的外植體。
[0044]使用本發(fā)明的培養(yǎng)基:1/ 2MS+IBA:0.5mg / L，AC:50mg / L，茶多酚 2mg / L，添加蔗糖量為22g / L。茶多酚的多酚含量為98%。培養(yǎng)基pH值為5.1。
[0045]將外植體接種至培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為26°C，培養(yǎng)基光照條件為自然光2300LUX+人工輔助光1700 LUX，連續(xù)光照培養(yǎng)時(shí)間為16h /天。
[0046]另外使用沒(méi)有添加茶多酚的培養(yǎng)基:1 / 2MS+IBA:0.5mg / L，AC:50mg / L，茶多酚2mg / L，添加蔗糖量為22g / L。在上述同樣條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
[0047]觀察檢查污染率。使用本發(fā)明的培養(yǎng)基的污染率為1%，而使用沒(méi)有添加茶多酚的培養(yǎng)基的污染率為5%。`
【權(quán)利要求】
1.可降低鐵皮石斛組培苗污染率的培養(yǎng)基，包括1/2MS+IBA、AC，其特征在于:還包括茶多酚。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于:茶多酚的總酚含量>50%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于:培養(yǎng)基的配比為:
I/ 2MS+IBA:0.I ~0.5mg / L，AC: 10 ~50mg / L,茶多酚 0.5 ~20mg / L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于:培養(yǎng)基的配比為: I/ 2MS+IBA:0.1 ~0.5mg / L，AC:15 ~30mg / L，茶多酚 2 ~IOmg / L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于:培養(yǎng)基的配比為: I/ 2MS+IBA:0.3mg / L, AC:25mg / L,茶多酚:5mg / L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于:還包括蔗糖。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的培養(yǎng)基，其特征在于:還包括蔗糖15~25g/ L0
8.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的培養(yǎng)基，其特征在于:還包括蔗糖20g/ L0
9.根據(jù)權(quán)利I所述的培養(yǎng)基，其特征在于:培養(yǎng)基pH值調(diào)節(jié)為5.0~6.0。
10.根據(jù)權(quán)利I所述的培養(yǎng)基，其特征在于:培養(yǎng)基pH值調(diào)節(jié)為5.2~5.4。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103749301SQ201410015541
【公開(kāi)日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2014年1月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月14日
【發(fā)明者】蔡衛(wèi)東 申請(qǐng)人:桂林豐潤(rùn)萊生物科技有限公司