一種含余甘子植物源抗病毒劑及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種以余甘子根皮（Phyllanthi?Fructus?L.）提取物為有效成分的植物源抗病毒劑及其制備方法。該制備方法是將余甘子根皮粉碎，經一定的加工過程，制備成余甘子根皮抗病毒可溶液劑、水劑及微乳劑，用于煙草、辣椒、番茄、西葫蘆、馬鈴薯等作物上防治煙草花葉病毒病（Tobaccomosaic?virus,TMV）、黃瓜花葉病毒病（Cucumber?mosaic?virus，CMV）及馬鈴薯病毒病（Potato?Virus?X，PVX；Potato?Virus?Y，PVY）等多種植物病毒病。制劑中含有余甘子根皮提取物10％～30％，其余為助劑。本發明的抗植物病毒劑不僅抗病毒效果好，而且對環境、人、畜、害蟲天敵及其它有益生物安全。該抗植物病毒劑制備工藝簡單，成本低廉，適宜推廣應用。
【專利說明】一種含余甘子植物源抗病毒劑及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于植物及其應用領域，具體涉及余甘子抗植物病毒病制劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002]植物病毒是一種由核酸和蛋白質組成的具有侵染活性的細胞內寄生病原物，據國際病毒分類委員會(ICTV)的第八次報告，目前全世界發現的植物病毒種類達1122個。植物病毒所引起的植物病素有“植物癌癥”之稱，其對農作物的危害程度僅次于真菌病原物，幾乎每種農作物都受到2~3種病毒的危害。全世界每年由植物病毒造成的損失約4百億美元，僅煙草花葉病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)造成的危害就超過I億美元。
[0003]由于植物病毒對植物細胞具有絕對寄生性，病毒復制所需要的物質和能量場所完全由寄主植物提供，導致病毒和寄主的代謝融為一體；加之植物缺乏完整的免疫系統，病毒一旦侵染植物，就可在植物細胞內無限期存活，直至寄主死亡。因此，抑制植物病毒病的藥物很難只選擇性地攻擊病毒而不傷害寄主細胞，導致目前篩選高效、專一、安全的抗病毒制劑研究面臨極大的困難。
[0004]目前除了采取傳統的抗病毒育種、弱毒株系交叉保護、改進栽培技術、殺蟲劑控制傳毒介體和轉基因等方法外，科研人員還研究出了一些植物病毒病的化學防治方法。但到目前為止，只有一小部分抗植物病毒劑得到實際應用，這些制劑大多以預防為主，且藥效多不理想。由于人們對醫藥或獸藥中抗病毒劑研究較早，一些抗植物病毒劑(如農用病毒唑)就是從抗人或動物病毒劑中發展而來。因此，深入探討抗植物病毒天然物質，有利于抗植物病毒劑的研究、開發及應用。
[0005]余甘子(Phyll anthi Fructus L.)為大戟科葉下珠屬植物，中國野生廣泛分布在云南、廣西、福建、海南、臺灣、海南、四川、貴州等省，江西、湖南、浙江等省部分地區也有，資源豐富。其果實余甘子為一種常用藏藥，與訶子，毛訶子三者在藏藥中常被稱為“三大果”使用頻率很高，在《藏藥標準》所載的290種藏藥成藥中，含余甘子的有72種，占總數的25%，衛生部藥品標準1995年版藏藥標準所載200種成藥中，有59種含余甘子，占29%，并被載入各版《中國藥典》。
[0006]關于余甘子在醫藥的應用有大量報道。中醫認為，清熱涼血，消食健胃，生津止咳。用于血熱血瘀，消化不良，腹脹，咳嗽，喉痛，口干功效。余甘子果實富含鞣質，含量高達45%，主要包括沒食子酸(gallic acid),鞋花酸(ellagic acid),訶子酸(chebulinic acid),原訶子酸(terchebin),訶黎勒酸(chebulagic acid),鞋云實素(corilagin),余甘子酸(phyllemblic acid)等；此外,余甘子果實中還含有黃酮類化合物,生物堿等。有關余甘子根皮化學成分的研究較少，有報道稱從余甘子根皮中分離出二萜、沒藥烷型倍半萜類成分及苷類。而余甘子在抗植物病毒作用方面的研究至今未見報道，在農業上的應用也有待于進一步開發。
【發明內容】
[0007]本發明的目的在于，以余甘子(Phyllanthi Fructus L.)為原料,研究出植物源抗病毒劑效果高、無公害、價格低廉的植物源抗植物病毒劑及其制備方法。
[0008]為了實現上述任務，本發明采取如下的技術解決方案:
[0009]一種余甘子植物源抗病毒劑，其特征在于，以余甘子根皮提取物為主成分并加入助劑加工而成，制劑形態是可溶液劑、水劑或微乳劑。其中:
[0010]所述的微乳劑由以下原料按重量百分比配制:
[0011]余甘子根皮提取物10%~30%，有機溶劑:20~30%，乳化劑:5%~30%，余量為水，原料的重量百分比之和為100%;
[0012]所述的可溶液劑由以下原料按重量百分比配制:
[0013]余甘子根皮提取物10%~30%，表面活性劑:5%~30%，余量為有機溶劑，原料的重量百分比之和為100% ；
[0014]水劑:余甘子根皮提取物10%~30%，有機溶劑:20~30%，表面活性劑:5%~30%，防凍劑:4%~10%，余量為水，原料的重量百分比之和為100%。
[0015]上述有機溶劑為乙酸乙酯，環己酮、油酸甲酯、乙醇，甲醇，丙酮，N，N_ 二甲基甲酰胺中的一種或幾種的混合物；
[0016]所述的乳化劑為烷基苯磺酸鹽類、烷基酚聚氧乙烯醚類、多苯乙烯苯酚聚氧乙烯醚、苯乙基酚聚氧乙烯醚類、苯`乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚類、斯潘系列、吐溫、農用陰離子-磷酸酯中的一種或幾種的混合物；
[0017]所述的表面活性劑為烷基苯磺酸鹽類、烷基酚聚氧乙烯醚類、苯乙基酚聚氧乙烯醚類、苯乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚類、蓖麻油與環氧乙烷的加成物、芳烷基酚聚氧乙烯醚甲醛縮合物中一種或幾種的混合物；
[0018]所述的防凍劑為乙二醇或丙三醇。
[0019]上述余甘子植物源抗病毒劑的制備方法，其特征在于:
[0020]所述的微乳劑的制備方法是:
[0021]A、將余甘子根皮用植物組織粉碎機粉碎至I~5mm的粗粉碎物。
[0022]B、將步驟A所得的粗粉碎物用溶劑浸提，提取溫度為50~80°C，提取時間為6~12小時，浸提物經真空濃縮至相當于Ikg干粉/kg濃縮液。
[0023]C、將步驟B所得的濃縮液、溶劑和表面活性劑按比例于混配釜中(混配釜溫度為35-60°C，攪拌速度800~1000轉/分鐘，攪拌時間為30分鐘)攪拌均勻后即得余甘子抗植物病毒微乳劑。
[0024]所述的可溶液劑的制備方法是:
[0025]A、將余甘子根皮用粉碎機粉碎至I~5_的粗粉碎物。
[0026]B、將步驟A所得的粗粉碎物用溶劑浸提，提取溫度為50~80°C，提取時間為6~12小時，浸提物經真空濃縮至相當于Ikg干粉/kg濃縮液。
[0027]C、將步驟B所得的濃縮液、溶劑和表面活性劑按比例于混配釜中(混配釜溫度為
35-600C，攪拌速度800~1000轉/分鐘，時間為30分鐘)攪拌均勻后即得余甘子抗植物病毒可溶液劑。
[0028]所述的水劑的制備方法是:[0029]A、將余甘子根皮用粉碎機粉碎至I~5mm的粗粉碎物。
[0030]B、將步驟A所得的粗粉碎物用溶劑浸提，提取溫度為50~80°C，提取時間為6~12小時，浸提物經真空濃縮至相當于Ikg干粉/kg濃縮液。
[0031]C、將步驟B所得的濃縮液、溶劑、表面活性劑、防凍劑和水按比例于混配釜中(混配釜溫度為35-60°C，攪拌速度800~1000轉/分鐘，攪拌時間為30分鐘)攪拌均勻后即得余甘子抗植物病毒水劑。
[0032]本發明所制成的余甘子植物源抗病毒劑具有以下優點:
[0033]1、植物源抗病毒劑活性顯著，可用于煙草、辣椒、番茄、西葫蘆、馬鈴薯等作物上防治煙草花葉病毒病(Tobacco mosaic virus, TMV)、黃瓜花葉病毒病(Cucumber mosaicvirus, CMV)及馬鈴薯病毒病(Potato Virus X, PVX ；Potato Virus Y, PVY)等多種植物病
毒病;
[0034]2、對人、畜、害蟲天敵及其它有益生物安全，環境兼容性好；
[0035]3、生物源農藥，使用后無殘留毒害；
[0036]4、資源豐富、制備方法簡單、成本低廉、適宜推廣使用。 【具體實施方式】
[0037]本發明的植物源抗病毒劑，以余甘子根皮提取物為活性物質，加入一定比例助劑進行劑型加工，可以制得環保型制劑微乳劑、水劑或可溶液劑。經發明人的試驗證明，30%余甘子微乳劑、10 %余甘子微乳劑、30 %余甘子可溶液劑、10 %余甘子可溶液劑、30%余甘子水劑和10%余甘子水劑對煙草花葉病毒(TMV)具有良好的防治效果。為了更好的理解發明的實質，下面用實施例來詳細說明發明的技術內容，但發明并不局限于這些實施例。
[0038]實施例1:30%余甘子微乳劑的配制
[0039]稱取余甘子根皮濃縮物30kg，溶解于20kg乙酸乙酯中，再加入15kg十二烷基苯磺酸鈣，5kg苯乙烯酸聚氧乙烯醚，在高速攪拌下混和，加熱至40°C左右；高速攪拌下滴加去離子水25kg，控制水的滴加速度，使溫度保持在40°C左右；水滴加完畢，升溫至50°C，攪拌I小時，制得30%余甘子微乳劑100kg。制劑的穩定性、外觀等符合商品制劑的要求。
[0040]實施例2:10%余甘子微乳劑的配制
[0041]稱取余甘子根皮濃縮物IOkg,溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入15kg十二烷基苯磺酸鈣，5kg苯乙烯酸聚氧乙烯醚，在高速攪拌下混和，加熱至40°C左右；高速攪拌下滴加去離子水40kg，控制水的滴加速度，使溫度保持在40°C左右；水滴加完畢，升溫至50°C，攪拌I小時，制得10%余甘子微乳劑100kg。制劑的穩定性、外觀等符合商品制劑的要求。
[0042]實施例3:30%余甘子根皮可溶液劑的配制
[0043]稱取余甘子根皮濃縮物30kg，溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入5kg烷基酚聚氧乙烯醚，Ikg烷基多糖苷A, 5kg乙二醇，乙醇補齊至100kg,混合均勻后，以攪拌速度800~1000轉/分鐘攪拌10~30分鐘，即可制得30%余甘子可溶液劑100kg。制劑的穩定性、外觀等符合商品制劑的要求。
[0044]實施例4:10%余甘子根皮可溶液劑的配制
[0045]稱取余甘子根皮濃縮物10kg，溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入5kg烷基酚聚氧乙烯醚，Ikg烷基多糖苷A, 5kg乙二醇，乙醇補齊至100kg,混合均勻后，以攪拌速度800~1000轉/分鐘攪拌10~30分鐘，即可制得余甘子可溶液劑100kg。制劑的穩定性、外觀等符合商品制劑的要求。
[0046]實施例5:30%余甘子根皮水劑的配制
[0047]稱取余甘子根皮濃縮物30kg，溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入5kg烷基酚聚氧乙烯醚，Ikg烷基多糖苷A, 5kg乙二醇,水補齊至100kg,混合均勻后，以攪拌速度800~1000轉/分鐘攪拌10~30分鐘，即可制得余甘子根皮可溶液劑100kg。制劑的穩定性、外觀等符合商品制劑的要求。
[0048]實施例6:10%余甘子根皮水劑的配制 [0049]稱取余甘子根皮濃縮物10kg，溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入5kg烷基酚聚氧乙烯醚，Ikg烷基多糖苷A，5kg丙三醇，水補齊至100kg，混合均勻后，以攪拌速度800~1000轉/分鐘攪拌10~30分鐘，即可制得余甘子根皮可溶液劑100kg。制劑的穩定性、外觀等符合商品制劑的要求。
[0050]實施例7:6種余甘子抗病毒劑對TMV的室內生物測定[0051 ] (I)對TMV體外鈍化效果
[0052]采用半葉枯斑法測定,選取生長旺盛、長勢一致的5~6葉期心葉煙(Nicotianaglutinosa)為枯斑寄主。以葉脈為界，左半葉接種藥液與病毒等體積混合液，右半葉接種蒸餾水與病毒等體積混合液作對照，病毒接種濃度為10μ g/mL，鈍化時間為5min，接種后立即用清水沖洗接種葉片表面。每處理接種4片葉子，試驗重復3次，3d后統計枯斑數，計算抑制率。
[0053]抑制率(％)=(對照枯斑數-處理枯斑數)/對照枯斑數X 100
[0054]測定結果見表1。
[0055]表1:6種余甘子抗病毒劑對TMV體外鈍化作用
【權利要求】
1.一種余甘子植物源抗病毒劑，其特征在于，以余甘子根皮提取物為主成分并加入助劑加工而成，制劑形態是微乳劑、可溶液劑和水劑；其中: 所述的微乳劑由以下原料按重量百分比配制: 余甘子根皮提取物10%~30%，有機溶劑:20~30%，乳化劑:5%~30%，余量為水，原料的重量百分比之和為100% ； 所述的可溶液劑由以下原料按重量百分比配制: 余甘子根皮提取物10%~30%，表面活性劑:5%~30%，余量為有機溶劑，原料的重量百分比之和為100%; 所述的水劑由以下原料按重量百分比配制: 余甘子根皮提取物10%~30%，有機溶劑:20~30%，表面活性劑:5%~30%，防凍劑:.4%~10%，余量為水，原料的重量百分比之和為100%。
2.如權利要求1所述的余甘子植物源抗病毒劑，其特征在于: 所述的有機溶劑為乙酸乙酯、環己酮、油酸甲酯、乙醇、甲醇、丙酮、N, N-二甲基甲酰胺中的一種或幾種的混合物； 所述的乳化劑為烷基苯磺酸鹽類、烷基酚聚氧乙烯醚類、多苯乙烯苯酚聚氧乙烯醚、苯乙基酚聚氧乙烯醚類、苯乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚類、斯潘系列、吐溫、農用陰離子-磷酸酯中的一種或幾種的混合物； 所述的表面活性劑為烷基苯磺酸鹽類、烷基酚聚氧乙烯醚類、苯乙基酚聚氧乙烯醚類、苯乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚類、蓖麻油與環氧乙烷的加成物、芳烷基酚聚氧乙烯醚甲醛縮合物中一種或幾種的混合物； 所述的防凍劑為乙二醇或丙三醇。
3.權利要求1所述的余甘子植物源抗病毒劑的制備方法，其特征在于: 所述的微乳劑的制備方法是: A、將余甘子根皮用植物組織粉碎機粉碎至I~5mm的粗粉碎物。 B、將步驟A所得的粗粉碎物用溶劑浸提，提取溫度為50~80°C，提取時間為6~12小時，浸提物經真空濃縮至相當于Ikg干粉/kg濃縮液。 C、將步驟B所得的濃縮液、溶劑、乳化劑按比例于混配釜中，混配釜溫度為35-60°C，攪拌時間為30分鐘，攪拌均勻后即得余甘子抗植物病毒微乳劑。 所述的可溶液劑的制備方法是: A、將余甘子根皮用粉碎機粉碎至I~5mm的粗粉碎物。 B、將步驟A所得的粗粉碎物用溶劑浸提，提取溫度為50~80°C，提取時間為6~12小時，浸提物經真空濃縮至相當于Ikg干粉/kg濃縮液； C、將步驟B所得的濃縮液、溶劑和表面活性劑按比例于混配釜中，混配釜溫度為35-60°C，攪拌時間為30分鐘，攪拌均勻后即得余甘子植物源抗病毒可溶液劑； 所述的水劑的制備方法是: A、將余甘子根皮用粉碎機粉碎至I~5mm的粗粉碎物。 B、將步驟A所得的粗粉碎物用溶劑浸提，提取溫度為50~80°C，提取時間為6~12小時，浸提物經真空濃縮至相當于Ikg干粉/kg濃縮液； C、將步驟B所得的濃縮液、有機溶劑、表面活性劑、防凍劑和水按比例于混配釜中，混配釜溫度為35-60°C，攪拌時間為30分鐘，攪拌均勻后即得余甘子抗植物病毒水劑。
4.如權利要求3所述的方法，其特征在于: 所述的有機溶劑為乙酸乙酯，環己酮、油酸甲酯、乙醇，甲醇，丙酮，N，N-二甲基甲酰胺中的一種或幾種的混合物； 所述的乳化劑為烷基苯磺酸鹽類、烷基酚聚氧乙烯醚類、多苯乙烯苯酚聚氧乙烯醚、苯乙基酚聚氧乙烯醚類、苯乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚類、斯潘系列、吐溫、農用陰離子-磷酸酯中的一種或幾種的混合物； 所述的表面活性劑為烷基苯磺酸鹽類、烷基酚聚氧乙烯醚類、苯乙基酚聚氧乙烯醚類、苯乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚類、蓖麻油與環氧乙烷的加成物、芳烷基酚聚氧乙烯醚甲醛縮合物中一種或幾種的混合物； 所述的防凍劑為乙二 醇或丙三醇。
【文檔編號】A01P1/00GK103766414SQ201410009553
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月8日 優先權日:2014年1月8日
【發明者】閆合, 韓立榮, 尹紅園, 周勇, 吳華, 馮俊濤, 張興 申請人:楊凌農科大無公害農藥研究服務中心