一種馬屬動物凍精的人工授精方法
【專利摘要】本發明公開了一種馬屬動物凍精的人工授精方法，人工授精方法包括以下步驟：發情調控步驟；排卵調控步驟；精液采集步驟；精液檢測步驟；精液處理步驟；精液冷凍步驟；人工授精步驟。本發明實施例提供的技術方案帶來的有益效果是：本發明實施時選擇進口優良公馬作為父本，選擇進口優良母馬作為母本，選擇國產母馬作為代孕母馬，根據母馬生理特點、排卵規律，采用人工授精方法使進口母馬孕育其與進口公馬的后代，然后經胚胎移植使國產母馬代孕。本發明可使每匹供體母馬年產有效胚胎6~12枚，鮮胚人工授精成功率可達85%，本發明不需要麻醉和手術，極大地提高了進口優良母馬的利用率。
【專利說明】一種馬屬動物凍精的人工授精方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及馬屬動物人工授精【技術領域】，特別涉及一種馬屬動物凍精的人工授精方法。
【背景技術】
[0002]人工授精技術是一項應用于哺乳動物的繁育高新技術。利用人工授精，結合胚胎移植技術，可以開發遺傳特性優良的母畜繁殖潛力，較快地擴大良種畜群，在自然情況下，牛、馬等母畜通常一年產I胎，一生繁殖后代僅僅16只左右；豬也不過百頭。采用人工授精技術，結合胚胎移植技術則使優良母畜免去了冗長的妊娠期，胚胎取出后不久即可再次發情、配種和授精，從而能在一定時間內產生較多的后代。精液的冷凍處理可實現一次采精多次使用，進一步節省精液使用量，同時提高種公馬利用率。目前在許多畜牧業發達國家人工授精和胚胎移植均已進入產業化發展階段。在我國，這一技術起步較晚，我國從七十年代開始對胚胎生物工程技術進行研究，八十年代后發展迅速。先后采用胚胎人工授精技術成功對奶牛、波爾山羊進行擴繁。由于各種原因，建國以來我國養馬業日漸消退，因此國內馬的胚胎人工授精技術也鮮有研究。但是隨著現代馬術運動的興起，我國養馬業開始復蘇，應用胚胎人工授精技術進行良種馬匹的擴繁成為改良我國馬匹品種以適應現代馬術運動的一條捷徑。
[0003]由于馬屬動物的卵巢結構有其獨特性，因此導致了馬屬動物的生理特點及排卵規律有別于其他動物。雖然牛羊等人工授精和胚胎移植技術已經成熟化，但并不適用于馬屬動物。
【發明內容】
[0004]為了提高進口良種馬匹的繁育能力，本發明實施例提供了一種馬屬動物凍精的人工授精方法。
[0005]為了實現上述發明目的，本發明提供了一種馬屬動物凍精的人工授精方法，其中，所述人工授精方法包括以下步驟:
精液采集步驟:利用假臺馬模擬母馬，采精桶模擬陰道的方法進行人工精液采集； 精液檢測步驟:通過顯微鏡檢測鏡子活率、畸形率及運動方式等指標；
精液處理步驟:用精液稀釋液稀釋精液，延長精子在體外存活時間，便于人工授精操作和提高成功率。
[0006]精液冷凍步驟:將用精液稀釋液稀釋后的精液經22°C、4°C、_196°C降溫冷凍密封保存。
[0007]所述精液采集步驟之前還可以進一步包括排卵調控步驟，所述排卵調控步驟為:于供體母馬和/或受體母馬發情期、卵泡直徑> 35mm時靜脈注射hCG，使用劑量為1200-1800 單位 / 匹。
[0008]所述精液采集步驟之前還可以進一步包括發情調控步驟，所述發情調控步驟為:于供體母馬和/或受體母馬黃體生成的第5~14天肌肉注射PGF2 α，使用劑量為
0.15-0.3mg/ 匹。
[0009]所述精液處理步驟之后還可以進一步包括人工授精步驟，所述人工授精步驟為:將經過處理的精液裝入人工授精管內，清洗并擦干供體母馬外陰后，將人工授精管送入母馬子宮內，將精液送入供體母馬子宮。
[0010]所述精液處理步驟之后還可以進一步包括胚胎收集步驟，所述胚胎收集步驟為:將胚胎收集用Y型管一端插入供體馬子宮，一端接胚胎營養液，另一端接胚胎收集杯，開啟開關使胚胎營養液流入子宮至子宮充盈，用手經肛門輕輕按摩子宮后使胚胎營養液流出子宮經集卵杯。
[0011]所述精液處理步驟中的所述精液稀釋液為脫脂奶粉、蛋黃和甘油的混合物。
[0012]所述胚胎收集步驟中的所述胚胎營養液包含以下成分:氯化鈉6~10g/L，氯化鉀
0.1-0.3 g/L，磷酸氫二鈉 f 1.5 g/L，磷酸二氫鉀 0.1-0.3 g/L，氯化鈣 0.05、.15 g/L，氯化鎂0.05、.15 g/L，體積百分比為0.3、.6%的牛血清白蛋白或體積百分比為1%~10%的犢牛血清，青霉素90-110萬單位/升，鏈霉素50-100萬單位/升。
[0013]本發明實施例提供的技術方案帶來的有益效果是:本發明實施時選擇進口優良公馬作為父本，選擇進口優良母馬作為母本，選擇國產母馬作為代孕母馬，根據母馬生理特點、排卵規律，采用人工授精方法使進口母馬孕育其與進口公馬的后代，然后經胚胎移植使國產母馬代孕。本發明可使每匹供體母馬年產有效胚胎6~12枚，鮮胚人工授精成功率可達85%，本發明不需要麻醉和手術，極大地提高了進口優良母馬的利用率。同時因精液冷凍可實現一次采精多次使用，節省了精液，也提高了種公馬的利用率。
【具體實施方式】
[0014]為了提高進口良種馬匹的繁育能力，使進口良種馬匹可年產胚胎6-12枚，從而達到快速繁育進口優良馬種以適應現代馬術運動的需要的目的，本發明提供了一種馬屬動物凍精的人工授精方法。
[0015]實施例1:
一種馬屬動物凍精的人工授精方法，人工授精方法包括以下步驟:
精液采集步驟:利用假臺馬模擬母馬，采精桶模擬陰道的方法進行人工精液采集； 精液檢測步驟:通過顯微鏡檢測鏡子活率、畸形率及運動方式等指標；
精液處理步驟:用精液稀釋液稀釋精液，延長精子在體外存活時間，便于人工授精操作和提高成功率。
[0016]精液冷凍步驟:將用精液稀釋液稀釋后的精液經22°C、4°C、_196°C降溫冷凍密封保存。
[0017]其中，處理精液用精液稀釋液為脫脂奶粉、蛋黃和甘油的混合物。
[0018]人工授精試驗:
種公馬:歐洲進口良種溫血馬4匹。
[0019]供體母馬:歐洲進口良種溫血馬10匹。
[0020]受體母馬:國產母馬120匹。
[0021]試驗時間及人工授精方法:采用本發明實施例1的人工授精方法進行人工授精試驗。人工授精數量按月統計。
[0022]實驗地點:青島即墨鰲山衛馬匹繁育基地。
[0023]試驗數據見表1。
[0024]表1每月人工授精數量和懷孕數量統計表
【權利要求】
1.一種馬屬動物凍精的人工授精方法，其特征在于，所述人工授精方法包括以下步驟: 精液采集步驟:利用假臺馬模擬母馬，采精桶模擬陰道的方法進行人工精液采集； 精液檢測步驟:通過顯微鏡檢測鏡子活率、畸形率及運動方式等指標； 精液處理步驟:用精液稀釋液稀釋精液，延長精子在體外存活時間，便于人工授精操作和提高成功率。
2.精液冷凍步驟:將用精液稀釋液稀釋后的精液經22°C、4°C、_196°C降溫冷凍密封保存。
3.根據權利要求1所述的馬屬動物凍精的人工授精方法，其特征在于，所述精液采集步驟之前還可以進一步包括排卵調控步驟，所述排卵調控步驟為:于供體母馬和/或受體母馬發情期、卵泡直徑> 35mm時靜脈注射hCG，使用劑量為1200-1800單位/匹。
4.根據權利要求2所述的馬屬動物凍精的人工授精方法，其特征在于，所述精液采集步驟之前還可以進一步包括發情調控步驟，所述發情調控步驟為:于供體母馬和/或受體母馬黃體生成的第5~14天肌肉注射PGF2 α，使用劑量為0.15-0.3mg/匹。
5.根據權利要求1一3任一所述的馬屬動物凍精的人工授精方法，其特征在于，所述精液處理步驟之后還可以進一步包括人工授精步驟，所述人工授精步驟為:將經過處理的精液裝入人工授精管內，清洗并擦干供體母馬外陰后，將人工授精管送入母馬子宮內，將精液送入供體母馬子宮。
6.根據權利要求1一3任一所述的馬屬動物凍精的人工授精方法，其特征在于，所述精液處理步驟之后還可以進一步包括胚胎收集步驟，所述胚胎收集步驟為:將胚胎收集用Y型管一端插入供體馬子宮，一端接胚胎營養液，另一端接胚胎收集杯，開啟開關使胚胎營養液流入子宮至子宮充盈，用手經肛門輕輕按摩子宮后使胚胎營養液流出子宮經集卵杯。
7.根據權利要求1-4任一所述的馬屬動物凍精的人工授精方法，其特征在于，所述精液處理步驟中的所述精液稀釋液為脫脂奶粉、蛋黃和甘油的混合物。
8.根據權利要求1一5任一所述的馬屬動物凍精的人工授精方法，其特征在于，所述胚胎收集步驟中的所述胚胎營養液包含以下成分:氯化鈉6~10g/L，氯化鉀0.1-0.3 g/L，磷酸氫二鈉廣1.5 g/L，磷酸二氫鉀0.1-0.3 g/L，氯化鈣0.05、.15 g/L，氯化鎂0.05、.15g/L，體積百分比為0.3、.6%的牛血清白蛋白或體積百分比為1%~10%的犢牛血清，青霉素90-110萬單位/升，鏈霉素50-100萬單位/升。
【文檔編號】A61D19/02GK103784217SQ201310678166
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2013年12月13日 優先權日:2013年12月13日
【發明者】叢龍曉, 孫吉勝, 張建軍 申請人:青島德瑞駿發生物科技有限公司, 伊犁德瑞駿發生物科技有限公司, 青島德瑞鰲瀾馬術有限公司