一株淡紫擬青霉及其培養方法和在作物病蟲防治上的應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種淡紫擬青霉菌株及其培養方法和應用。該淡紫擬青霉菌株為淡紫擬青霉(Paecilomyceslilacinus)CPLI0708,其保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏號為CGMCCNo.8450。該淡紫擬青霉菌株的培養方法步驟:A、菌株活化：在PDA斜面上劃線培養活化菌株；B、菌株液體發酵培養：將活化好的菌株轉入裝有液體培養基的三角瓶中，振蕩培養：C、菌株固體發酵培養：將載體、營養基質和水按體積混合均勻制成固體發酵培養基，裝入保鮮袋，接種液體發酵種子，攪拌均勻后培養。該菌株分生孢子對溫室蚜蟲、粉虱等刺吸式害蟲具有很強的殺蟲效果，發酵液對大豆孢囊線蟲幼蟲'具有強致死作用，可用于無公害蔬菜的生產。I
【專利說明】一株淡紫擬青霉及其培養方法和在作物病蟲防治上的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一株淡紫擬青霉（Paecilomyces Iilacinus)菌株及其培養方法，及其 在防治保護地害蟲蚜蟲、粉虱和大豆孢囊線蟲中的應用。
【背景技術】
[0002] 我國保護地蔬菜有五千多萬畝的種植面積，保護地蔬菜是北方居民冬春季的主要 蔬菜來源，具有重要的國民經濟意義。冬春蔬菜保護地主要發生的害蟲為粉虱（白粉虱和 煙粉虱等）、蚜蟲（瓜蚜等），常年危害產量損失在30%以上。目前防治保護地害蟲的主要 手段是化學防治，如噴灑有機磷、菊酯及吡蟲啉等化學農藥，這些農藥的大量使用造成了嚴 重的農產品農藥殘留超標和農田環境污染。大豆是我國重要的蔬菜作物和油料經濟作物， 種植面積達1億畝，具有極其重要的國民經濟價值。大豆孢囊線蟲（Heterodera glycines Ichinohe)是大豆在生產過程中最重要的病害之一，被稱為大豆的"癌癥"，嚴重影響了大豆 的產量與品質。由于迄今為止沒有發現對其具有明顯抗病性的種質資源，大豆孢囊線蟲病 仍然是農業生產中的世界性難題。目前，大豆孢囊線蟲的防治主要依靠化學農藥，如二溴氯 丙烷、二溴乙烷、呋喃丹等，這些防治線蟲的化學農藥多是高毒農藥。
[0003] 隨著生活水平的不斷提高，人們對食品質量的要求越來越高，對食品安全和環境 污染問題越來越關注，無公害食品和綠色食品生產應運而生。同時，食品安全問題往往是國 際農產品貿易壁壘中的籌碼，貫徹綠色植保非常必要。保護地害蟲粉虱、蚜蟲和大豆孢囊線 蟲繁殖力強，易對化學藥劑產生抗藥性，迫切需要發展綠色防控來替代或減少化學農藥的 使用。作為生物農藥，生防真菌不同于化學農藥，具有全新的作用機理、對環境無污染、無殘 留，是農業病蟲害綠色防控體系的重要組成部分。本發明針對這一農業生產的重要需求而 研發，發現一株高效生防真菌，研究了該菌株的生物學特性和應用技術。
【發明內容】
[0004] 為了防治保護地蚜蟲、粉虱和大豆孢囊線蟲等害蟲，本發明的首要目的在于提供 一種淡紫擬青霉菌菌株。
[0005] 本發明的另一目的在于提供一種淡紫擬青霉菌的培養方法。
[0006] 本發明的再一個目的在于提供一種淡紫擬青霉菌在作物病蟲防治上的應用。
[0007] 為了實現以上目的，本發明采用如下技術措施：
[0008] (1) -種淡紫擬青霉菌的獲得及生物學特性：
[0009] 將我國河北省廊坊市采集的土樣，用無菌水稀釋后，涂布于加有多果定和鏈霉素 的培養基上，置于25°C，培養3?5天，挑取單菌落轉移到斜面上獲得菌株， 申請人:將其命 名為淡紫擬青霉（P. lilacinus)CPLI0708。該淡紫擬青霉（P. lilacinus)CPLI0708 于 2013 年11月11日保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC)，其保藏號為 CGMCC NO. 8450,分類命名為淡紫擬青霉（P. lilacinus)CPLI0708。
[0010] 菌株形態鑒定特征：淡紫擬青霉（P. 111&(^11118)0?1^10708在251：培養3天后，在 PDA平板上菌落呈白色，產孢后逐漸變成淺粉紅色，培養7d后，菌落呈紫紅色、圓形、隆起、 粉狀，表面沒有分泌物。淡紫擬青霉的分生孢子梗末端膨大。分生孢子為單細胞，橢圓形至 紡錘形，呈鏈狀、平滑、無色至黃色，2. 5 μ m?4 μ m寬，孢梗上具有瓶頸狀不規則的分枝或 輪生分枝，瓶梗基部較寬。
[0011] 菌株的培養特征：淡紫擬青霉（P. lilacinus)CPLI0708菌株生長溫度范圍可以從 12°C?36°C，生長和產孢的最適溫度范圍是25°C?28°C，10°C和40°C時停止生長，36°C時 停止產孢。該菌株在不同培養基上生長和產孢差異較大。
[0012] 1、在基礎培養基（氯化鉀0· 50g，七水硫酸亞鐵0· Olg，磷酸氫二鉀I. 0g，七水硫酸 鎂0. 50g，硝酸鈉2g，蔗糖30g，瓊脂15g，水1000ml，pH自然）的基礎上，用等當量的不同的 碳源取代基礎培養基中的碳源。淡紫擬青霉（P. lilacinus) CPLI0708菌株的菌落生長及產 孢特性如下。
[0013] 淡紫擬青霉（P. lilaCinuS)CPLI0708菌株7天在葡萄糖培養基上菌落直徑為 I. 845cm，麥芽糖培養基上為2. 643cm，蔗糖培養基上為I. 796cm，可溶性淀粉培養基上為 I. 982cm，乳糖培養基上為I. 945cm，甘油培養基上為I. 935cm。
[0014] 淡紫擬青霉（P. lilacinus)CPLI0708菌株13天在葡萄糖培養基上產孢量為 3. 264X 109個孢子/ ml，麥芽糖上為20. 88X 109個孢子/ ml，蔗糖上為1.968X 109個孢 子/ ml，可溶性淀粉上為5. 088X IO9個孢子/ ml，乳糖上為3. 984X IO9個孢子/ ml，甘油 上為2. 64X IO9個孢子/ ml。
[0015] 表1不同碳源上淡紫擬青霉（P. lilacinus)CPLI0708菌株的菌落生長特征
[0016]
【權利要求】
1. 一種淡紫擬青霉，其特征為淡紫擬青霉（Paecilomyces lilacinus)CPLI0708,保藏 于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No. 8450。
2. 權利要求1所述的一種淡紫擬青霉菌株，其特征在于：所述淡紫擬青霉菌株屬絲孢目、 擬青霉屬：在PDA平板上菌落呈白色，產孢后逐漸變成淺粉紅色，培養7d后，菌落呈紫紅色、 圓形、隆起、粉狀，表面沒有分泌物；淡紫擬青霉的分生孢子梗末端膨大；分生孢子為單細胞， 橢圓形至紡錘形，呈鏈狀、平滑、無色至黃色，2. 5 μ m?4 μ m寬，孢梗上具有瓶頸狀不規則的 分枝或輪生分枝，瓶梗基部較寬；淡紫擬青霉（P. lilacinus)CPLI0708菌株生長溫度范圍可 以從12°C?36°C，生長和產孢的最適溫度范圍是25°C?28°C，KTC和40°C時停止生長，36°C 時停止產孢；該菌株在不同培養基上生長和產孢差異較大，菌株7天在葡萄糖培養基上菌落 直徑為I. 845cm，麥芽糖培養基上為2. 643cm，蔗糖培養基上為I. 796cm，可溶性淀粉培養基上 為I. 982cm，乳糖培養基上為I. 945cm，甘油培養基上為I. 935cm ;菌株13天在葡萄糖培養基上 產孢量為3. 264 X IO9個孢子/ ml，麥芽糖上為20. 88 X IO9個孢子/ ml，蔗糖上為1. 968 X IO9 個孢子/ ml，可溶性淀粉上為5. 088 X IO9個孢子/ ml，乳糖上為3. 984 X IO9個孢子/ ml，甘 油上為2. 64X IO9個孢子/ ml ;菌株培養7天，在硝酸鉀培養基上的菌落直徑為2. 072cm，在 硫酸銨培養基上的菌落直徑為I. 916cm，在蛋白胨培養基上的菌落直徑為2. 431cm，在酵母浸 粉培養基上的菌落直徑為2. 621cm，在脲培養基上的菌落直徑為2. 212cm，在硝酸鈉培養基上 的菌落直徑為I. 712cm ;菌株培養13天，在硝酸鉀培養基上產孢為18. 72X IO8個孢子/ ml，在 硫酸銨培養基上產孢為7. 2X IO8個孢子/ ml，在蛋白胨培養基上產孢為31. 2X IO8個孢子/ ml，在酵母浸粉培養基上產孢為11. 04 X IO8個孢子/ ml，在脲培養基上產孢為19. 68 X IO8個 孢子/ ml，在硝酸鈉培養基上產孢為10. 08X IO8個孢子/ ml ;菌株在改良的PDA培養基上， 15°C下的菌落生長直徑為0· 632cm，19°C下的菌落生長直徑為I. 077cm，23°C下的菌落生長直 徑為I. 389cm，27°C下的菌落生長直徑為I. 4cm，29°C下的菌落生長直徑為2. 202cm，31°C下的 菌落生長直徑為I. 932cm ;菌株在在改良的PDA培養基上，15°C下的產孢為11. 79X IO6個孢 子/ ml，19°C下的產孢為8. 73X IO6個孢子/ ml，23°C下的產孢為56. 16X IO6個孢子/ ml， 27°C下的產孢為35. 46X IO6個孢子/ ml，29°C下的產孢為116. 888X IO6個孢子/ ml，31°C下 的產孢為107. 46X IO6個孢子/ ml。
3. 權利要求1所述的一種淡紫擬青霉的培養方法，其步驟是： A、 淡紫擬青霉（P. lilacinus)CPLI0708的活化：將淡紫擬青霉（P. lilacinus) CPLI0708菌株劃線培養于PDA斜面上，于25°C條件下培養6d?8d ; B、 淡紫擬青霉（P. lilacinus)CPLI0708的液體發酵培養：將5ml無菌水倒入活化的 淡紫擬青霉（P. lilacinus)CPLI0708菌株斜面上，用旋渦震蕩器將真菌孢子洗下獲得孢子 懸浮液，將孢子懸浮液接種到裝有200ml液體培養基（葡萄糖25g，酵母浸粉20g，蒸餾水 1000ml)的500ml三角瓶中，于180rmp / min，25°C條件下振蕩培養2d?3d; C、 淡紫擬青霉（P. lilacinus)CPLI0708的固體發酵培養：將載體、營養基質和水按體 積比6 :1 :1混合均勻制的固體發酵培養基，按每袋200ml裝入聚乙烯保鮮袋，121°C滅菌 0. 5h?lh，冷卻后，將步驟2的淡紫擬青霉（P. lilacinus) CPLI0708液體發酵菌液按5%? 10%的體積比接種到固體發酵培養基中，再次攪拌均勻，26°C?28°C培養6d?10d。
4. 權利要求1所述的一種淡紫擬青霉菌株在防治保護地害蟲（蚜蟲、粉虱等）和大豆 孢囊線蟲中的應用。
【文檔編號】A01P7/04GK104212722SQ201310669589
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2013年12月12日 優先權日:2013年12月12日
【發明者】謝明, 張艷軍, 張召榮 申請人:謝明