甜葉菊種質保存方法

甜葉菊種質保存方法
【專利摘要】本發明公開了一種甜葉菊種質保存方法，利用本方法可顯著延長種質的保存時間，同時節省保存所需的勞力、物力和空間。本發明的主要過程是：將甜葉菊種質的種苗進行消毒滅菌，然后在超凈工作臺上進行接種，將接種好的種苗放入培養箱中進行培養保存，保存到種苗長滿試管空間后進行繼代。
【專利說明】甜葉菊種質保存方法
【技術領域】
[0001]本發明是關于植物種質的保存方法，更具體地說，是一種利用組織培養技術延長甜葉菊種質保存時間的方法。
【背景技術】
[0002]甜葉菊是菊科草本植物，原產巴拉圭一帶，八十年代初我國引種栽培成功，其葉片中甜菊糖苷的甜度是蔗糖300倍以上，被稱為是最有開發價值和前途的健康新糖源。甜葉菊為異花授粉植物，種子帶浮毛、易帶菌，加上種子體積小、活力低等缺點，用常規的育種方法進行種質保存，種子的發芽率很低且易產生混雜。采用常規組培瓶接種進行甜葉菊苗種質保存，在(25±2) °C，15001x光照12h/d的常規條件下培養，種苗的生長空間較大，生長較快，保存1-2個月種苗就長滿組培瓶，需繼代后再培養保存。而本發明技術方案將種苗接種到試管中，在10-15°C，100-2001x光照12h/d的培養條件下，限定種苗的生長空間和培養條件，種苗生長較緩慢，培養保存10-12個月才能長滿試管空間再進行繼代培養保存。此方法可減少保存種苗繼代培養的次數，節省繼代培養所需培養基原料成本、勞力和培養保存空間。目前，關于甜葉菊種質保存的方法還未見報道。

【發明內容】

[0003]本發明的目的是克服常規種質保存方法的不足，提供一種長時間保存甜葉菊種質方法的技術，節省甜葉菊種質保存所需成本、勞力和空間。
[0004]本發明是這樣實現的:
一種甜葉菊種質保存方法包括以下技術環節:
①外植體消毒:將甜葉菊種質的種苗用自來水沖洗5-8min,洗去表面灰塵和異物，然后在超凈工作臺上，用75%酒精浸泡處理20 s后轉入0.1%升萊中處理10 min,消毒后用無菌水沖洗3-4次；
②接種:在超凈工作臺上用剪刀將消毒后的種苗剪為±0.5cm長短的莖段，用鑷子將莖段接種到盛有培養基的試管中，每個試管接種2個莖段；
③培養基配方:MS培養基加入生長延緩劑甘露醇30g/L和生長激素6-BA 1.0 mg/L、IAA 0.1 mg/L ；
④培養條件:將接種好的試管放入培養箱中培養，培養箱溫度5-15°C，光照強度50-1000 lx，光照時間 12h/d。
[0005]⑤繼代培養保存:培養保存一段時間后，種苗長滿至試管頂部，無繼續生長空間，需進行繼代接種培養保存。
[0006]所述培養箱培養中培養溫度最好為10_15°C，所述培養箱光照強度最好為100-200Ix0
[0007]本發明的有益效果:
本發明通過對接種容器的選擇和組織培養條件的控制，有效地延緩甜葉菊種苗的生長速度，延長了種質培養保存的時間，減少了保存繼代的次數；同時，也節省了繼代保存所需培養基成本、勞力和培養空間。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0008]圖1為常規組培條件下甜葉菊種質生長I個月的示意圖；
圖2為10°C、IOOlx光照條件下試管中甜葉菊種質生長6個月的示意圖；
圖3為10°C、IOOlx光照條件下試管中甜葉菊種質生長12個月的示意圖。
【具體實施方式】
[0009]【具體實施方式】舉例I，甜葉菊品種BI種質的組培保存
①外植體消毒:將甜葉菊品系BI種苗用自來水沖洗5-8min，洗去表面灰塵和異物，然后在超凈工作臺上，用75%酒精浸泡處理20 s后轉入0.1%升萊中處理10 min,消毒后用無菌水沖洗3-4次；
②接種:在超凈工作臺上用剪刀將消毒后的種苗剪為±0.5cm長短的莖段，用鑷子將莖段接種到盛有培養基的100 ml試管中，每個試管接種2個莖段；
③培養基配方:MS培養基加入生長延緩劑甘露醇30g/L和生長激素6-BA 1.0 mg/L、IAA 0.1 mg/L ；
④培養條件:將接種好的試管放入培養箱中培養，培養箱溫度10°C,光照強度IOOlx,光照時間12h/d ；
⑤繼代培養保存:培養保存1 2個月后，種苗長滿至試管頂部，需進行繼代接種培養保存。
[0010]【具體實施方式】舉例2，甜葉菊品種B6種質的組培保存
①外植體消毒:將甜葉菊品系W3種苗用自來水沖洗5-8min，洗去表面灰塵和異物，然后在超凈工作臺上，用75%酒精浸泡處理20 s后轉入0.1%升萊中處理10 min,消毒后用無菌水沖洗3-4次；
②接種:在超凈工作臺上用剪刀將消毒后的種苗剪為±0.5cm長短的莖段，用鑷子將莖段接種到盛有培養基的100 ml試管中，每個試管接種2個莖段；
③培養基配方:MS培養基加入生長延緩劑甘露醇30g/L和生長激素6-BA 1.0 mg/L、IAA 0.1 mg/L ；
④培養條件:將接種好的試管放入培養箱中培養，培養箱溫度15°C,光照強度2001x,光照時間12h/d ；
⑤繼代培養保存:培養保存11個月后，種苗長滿至試管頂部，需進行繼代接種培養保存。
[0011]【具體實施方式】舉例3，甜葉菊品種皖甜I號種質的組培保存
①外植體消毒:將甜葉菊品系18號種苗用自來水沖洗5-8min，洗去表面灰塵和異物，然后在超凈工作臺上，用75%酒精浸泡處理20 s后轉入0.1%升萊中處理10 min,消毒后用無菌水沖洗3-4次；
②接種:在超凈工作臺上用剪刀將消毒后的種苗剪為±0.5cm長短的莖段，用鑷子將莖段接種到盛有培養基的100 ml試管中，每個試管接種2個莖段；③培養基配方:MS培養基加入生長延緩劑甘露醇30g/L和生長激素6-BA 1.0 mg/L、IAA 0.1 mg/L ；
④培養條件:將接種好的試管放入培養箱中培養，培養箱溫度10°C,光照強度2001x,光照時間12h/d ； ⑤繼代培養保存:培養保存10個月后，種苗長滿至試管頂部，需進行繼代接種培養保存。
【權利要求】
1.一種甜葉菊種質保存方法，其特征是，它包括以下技術環節: ①外植體消毒:將甜葉菊種質的種苗用自來水沖洗5-8min,洗去表面灰塵和異物，然后在超凈工作臺上，用75%酒精浸泡處理20 s后轉入0.1%升萊中處理10 min,消毒后用無菌水沖洗3-4次； ②接種:在超凈工作臺上用剪刀將消毒后的種苗剪為±0.5cm長短的莖段，用鑷子將莖段接種到盛有培養基的試管中，每個試管接種2個莖段； ③培養基配方:MS培養基加入生長延緩劑甘露醇30g/L和生長激素6-BA 1.0 mg/L、IAA 0.1 mg/L ； ④培養條件:將接種好的試管放入培養箱中培養，培養箱溫度5-15°C，光照強度50-1000 lx，光照時間 12h/d ; ⑤繼代培養保存:培養保存一段時間后，種苗長滿至試管頂部，無繼續生長空間，需進行繼代接種培養保存。
2.根據權利要求1所述的甜葉菊種質保存方法，其特征是，所述培養箱中培養溫度為10-15。。。
3.根據權利要求1所述的甜葉菊種質保存方法，其特征是，所述培養箱光照強度為100-200 lx。
【文檔編號】A01H4/00GK103609448SQ201310611039
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月28日 優先權日:2013年11月28日
【發明者】何克勤, 崔然, 胡能兵, 徐昊, 王建功 申請人:何克勤