鐵皮石斛的高效繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及鐵皮石斛的高效繁殖方法，包括以下步驟：（1）不定芽誘導(dǎo)：將消毒完的石斛莖段在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)28-30d，該誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：1/2MS基本培養(yǎng)基、0.5-0.8mg/L萘乙酸、1.2-1.4mg/L的6-芐氨基腺嘌呤、1.5-1.8mg/L的赤霉素、25-30g/L蔗糖；（2）不定芽的增殖：誘導(dǎo)結(jié)束后，將莖段在節(jié)間處長出新芽切下，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中繼代增殖30-32d，在切口處獲得叢生芽；（3）壯苗及生根移栽：將叢生芽切成單苗，轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)20d，當(dāng)芽發(fā)育為高2-3cm、并具有2-3片葉片時進行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)時間為28d；其中壯苗培養(yǎng)基為：MS基本培養(yǎng)基、3wt%蔗糖、0.7wt%瓊脂、3wt%有機肥；生根培養(yǎng)基為：1/2MS基本培養(yǎng)基、0.3-0.5mg/L萘乙酸、0.3-0.5wt%活性炭。
【專利說明】鐵皮石斛的高效繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及鐵皮石斛的培植技術(shù)，具體為能夠縮短鐵皮石斛無性繁殖周期的鐵皮石斛的高效繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鐵皮石斛又名黑節(jié)草，俗稱鐵皮楓斗，為蘭科石斛屬多年生常綠草本植物，是一種名貴藥材。近年研究發(fā)現(xiàn)石斛中含有石斛多糖、生物堿、鼓槌菲和毛蘭素等化合物，以及7種人體必需氨基酸和多種微量元素。現(xiàn)代藥理表明石斛具有抗腫瘤、抗衰老、增強免疫力等功能，對心血管、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和眼科疾病均有明顯的治療作用。由于鐵皮石斛具有多種獨特療效的藥用價值，民間稱其為救命仙草，醫(yī)學(xué)界稱其為藥界大熊貓。鐵皮石斛自然繁殖力極低，傳統(tǒng)的分株、扦插等方式繁殖率又很低，生長速度緩慢，加上人為無節(jié)制的采集和破壞，使得自然資源的蘊藏量驟降，已瀕臨滅絕。對鐵皮石斛進行體外快繁，是解決目前鐵皮石斛野生資源與需求矛盾的重要途徑。
[0003]近年來，科研工作者對鐵皮石斛組織培養(yǎng)快繁技術(shù)進行了大量的研究，但是主要集中在原球莖增殖、分化方面，以莖段為材料實現(xiàn)鐵皮石斛體外快繁的研究不多。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種能夠縮短鐵皮石斛無性繁殖的周期的鐵皮石斛的高效繁殖方法。
[0005]為解決上述 技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種鐵皮石斛的高效繁殖方法，包括以下步驟:
(1)不定芽誘導(dǎo):取鐵皮石斛當(dāng)年生幼嫩莖段，切成長度為1-1.5cm、帶1-2個腋芽的小莖段，沖洗后，先用75%的酒精浸泡30s，然后用0.1%的氯化汞消毒10-12min，再經(jīng)無菌水沖洗4-5次；
將消毒完的石斛莖段在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)28-30d，該誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:1/2MS基本培養(yǎng)基、0.5-0.8mg/L萘乙酸、1.2-1.4mg/L 的 6-芐氨基腺嘌呤、1.5-1.8mg/L 的赤霉素、25_30g/L蔗糖；
(2)不定芽的增殖:誘導(dǎo)結(jié)束后，將莖段在節(jié)間處長出新芽切下，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中繼代增殖30-32d，在切口處獲得叢生芽；
(3)壯苗及生根移栽:將叢生芽切成單苗，轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)20d，當(dāng)芽發(fā)育為高2-3cm、并具有2-3片葉片時即可進行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)時間為28d ;其中壯苗培養(yǎng)基為:MS基本培養(yǎng)基、3wt%蔗糖、0.7wt%瓊脂、3wt%有機肥；生根培養(yǎng)基為:1/2MS基本培養(yǎng)基、0.3-0.5mg/L萘乙酸、0.3-0.5wt%活性炭。
[0006]上述各步驟中，培養(yǎng)溫度均為25±2°C，光照強度為2000 lx，光照時間為10_12h/
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[0007]本發(fā)明的技術(shù)效果:(1)本發(fā)明的鐵皮石斛的高效繁殖方法，，誘導(dǎo)階段采用的誘導(dǎo)培養(yǎng)基通過赤霉素的處理，無菌萌發(fā)效果好，誘導(dǎo)率高，幼葉無褐化、壞死，生根階段采用的生根培養(yǎng)基采用了萘乙酸搭配活性炭，對鐵皮石斛試管苗生根具有較好的促進作用。(2)鐵皮石斛原球莖的增殖、分化及生根壯苗階段是組培苗繁殖的關(guān)鍵?，F(xiàn)有技術(shù)完成該階段要求需要轉(zhuǎn)接至少3次3種培養(yǎng)基。而采用本申請的培養(yǎng)基后，經(jīng)觀察，減少轉(zhuǎn)接次數(shù)1-2次，降低了污染，降低了成本，提高了組培苗存活率達30%以上。
【具體實施方式】
[0008]本實施例的鐵皮石斛的高效繁殖方法，包括以下步驟:
(1)不定芽誘導(dǎo):取鐵皮石斛當(dāng)年生幼嫩莖段，切成長度為1-1.5cm、帶1-2個腋芽的小莖段，沖洗后，先用75%的酒精浸泡30s，然后用0.1%的氯化汞消毒lOmin，再經(jīng)無菌水沖洗5次；
將消毒完的石斛莖段在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)30d,該誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:1/2MS基本培養(yǎng)基、
0.5mg/L萘乙酸、1.4mg/L的6-節(jié)氨基腺嘌呤、1.5mg/L的赤霉素、30g/L鹿糖；
(2)不定芽的增殖:誘導(dǎo)結(jié)束后，將莖段在節(jié)間處長出新芽切下，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中繼代增殖30d，在切口處獲得叢生芽；
(3)壯苗及生根移栽:將叢生芽 切成單苗，轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)20d，當(dāng)芽發(fā)育為高2-3cm、并具有2-3片葉片時即可進行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)時間為28d ;其中壯苗培養(yǎng)基為:MS基本培養(yǎng)基、3wt%蔗糖、0.7wt%瓊脂、3wt%有機肥；生根培養(yǎng)基為:1/2MS基本培養(yǎng)基、0.5mg/L萘乙酸、0.5wt%活性炭。
[0009]上述各步驟中，培養(yǎng)溫度均為25°C，光照強度為2000 lx，光照時間為12h/d。
【權(quán)利要求】
1.一種鐵皮石斛的高效繁殖方法，其特征在于包括以下步驟: (1)不定芽誘導(dǎo):取鐵皮石斛當(dāng)年生幼嫩莖段，切成長度為1-1.5cm、帶1-2個腋芽的小莖段，沖洗后，先用75%的酒精浸泡30s，然后用0.1%的氯化汞消毒10-12min，再經(jīng)無菌水沖洗4-5次； 將消毒完的石斛莖段在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)28-30d，該誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:1/2MS基本培養(yǎng)基、0.5-0.8mg/L萘乙酸、1.2-1.4mg/L 的 6-芐氨基腺嘌呤、1.5-1.8mg/L 的赤霉素、25_30g/L蔗糖； (2)不定芽的增殖:誘導(dǎo)結(jié)束后，將莖段在節(jié)間處長出新芽切下，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中繼代增殖30-32d，在切口處獲得叢生芽； (3)壯苗及生根移栽:將叢生芽切成單苗，轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)20d，當(dāng)芽發(fā)育為高2-3cm、并具有2-3片葉片時即可進行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)時間為28d ;其中壯苗培養(yǎng)基為:MS基本培養(yǎng)基、3wt%蔗糖、0.7wt%瓊脂、3wt%有機肥；生根培養(yǎng)基為:1/2MS基本培養(yǎng)基、0.3-0.5mg/L萘乙酸、0.3-0.5wt%活性炭; 上述各步驟中，培養(yǎng)溫 度均為25°C，光照強度為2000 lx，光照時間為12h/d。
【文檔編號】A01G31/00GK103609445SQ201310609832
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月27日
【發(fā)明者】段學(xué)武, 蔣躍民, 鄭永華 申請人:蘇州田園農(nóng)業(yè)技術(shù)開發(fā)有限公司