鐵皮石斛的高效快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及鐵皮石斛的快速繁殖方法，包括以下步驟：（1）不定芽誘導(dǎo)：將消毒完的石斛莖段在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)28-30d，該誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS基本培養(yǎng)基、0.1-0.15mg/L萘乙酸、0.5-1.0mg/L的6-芐氨基腺嘌呤、3%蔗糖、0.8%瓊脂；（2）不定芽的增殖：誘導(dǎo)結(jié)束后，將莖段在節(jié)間處長(zhǎng)出新芽切下，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中繼代增殖30-32d，在切口處獲得叢生芽；（3）壯苗及生根移栽：將叢生芽切成單苗，轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)23-25d，當(dāng)芽發(fā)育為高2-3cm、并具有2-3片葉片時(shí)即可進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)時(shí)間為30-32d；其中壯苗培養(yǎng)基為：MS基本培養(yǎng)基、3%蔗糖、0.7%瓊脂；生根培養(yǎng)基為：1/2MS基本培養(yǎng)基、0.3-0.5mg/L萘乙酸、0.3-0.5%活性炭。本方法培植的鐵皮石斛叢生芽的株高達(dá)3.9cm以上、根數(shù)達(dá)4根以上，根長(zhǎng)達(dá)1.5cm以上。
【專利說明】鐵皮石斛的高效快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及鐵皮石斛的培植技術(shù)，具體為鐵皮石斛的高效快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鐵皮石斛又名黑節(jié)草，俗稱鐵皮楓斗，為蘭科石斛屬多年生常綠草本植物，是一種名貴藥材。近年研究發(fā)現(xiàn)石斛中含有石斛多糖、生物堿、鼓槌菲和毛蘭素等化合物，以及7種人體必需氨基酸和多種微量元素?，F(xiàn)代藥理表明石斛具有抗腫瘤、抗衰老、增強(qiáng)免疫力等功能，對(duì)心血管、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和眼科疾病均有明顯的治療作用。由于鐵皮石斛具有多種獨(dú)特療效的藥用價(jià)值，民間稱其為救命仙草！，醫(yī)學(xué)界稱其為藥界大熊貓！。鐵皮石斛自然繁殖力極低，傳統(tǒng)的分株、扦插等方式繁殖率又很低，生長(zhǎng)速度緩慢，加上人為無節(jié)制的采集和破壞，使得自然資源的蘊(yùn)藏量驟降，已瀕臨滅絕。對(duì)鐵皮石斛進(jìn)行體外快繁，是解決目前鐵皮石斛野生資源與需求矛盾的重要途徑。
[0003]近年來，科研工作者對(duì)鐵皮石斛組織培養(yǎng)快繁技術(shù)進(jìn)行了大量的研究，但是主要集中在原球莖增殖、分化方面，以莖段為材料實(shí)現(xiàn)鐵皮石斛體外快繁的研究不多。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種能夠縮短鐵皮石斛無性繁殖的周期的鐵皮石斛的高效快速繁殖方法。
[0005]為解決上述技術(shù)問題 ，本發(fā)明提供了一種鐵皮石斛的高效快速繁殖方法，包括以下步驟:
(1)不定芽誘導(dǎo):取鐵皮石斛當(dāng)年生幼嫩莖段，切成長(zhǎng)度為1-1.5cm、帶1-2個(gè)腋芽的小莖段，沖洗后，先用70%的酒精浸泡60s，然后用0.1%的氯化汞消毒10-12min ；
將消毒完的石斛莖段在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)25-28d，該誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:1/2MS基本培養(yǎng)基、0.5-0.8mg/L萘乙酸、1.2-1.4mg/L 的 6-芐氨基腺嘌呤、1.5-1.8mg/L 的赤霉素、25_30g/L蔗糖；
(2)不定芽的增殖:誘導(dǎo)結(jié)束后，將莖段在節(jié)間處長(zhǎng)出新芽切下，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中繼代增殖30-32d，在切口處獲得叢生芽；
(3)壯苗及生根移栽:將叢生芽切成單苗，轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)23-25d，當(dāng)芽發(fā)育為高2-3cm、并具有2-3片葉片時(shí)即可進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)時(shí)間為30_32d ;其中壯苗培養(yǎng)基為:MS基本培養(yǎng)基、3%蔗糖、0.7%瓊脂；生根培養(yǎng)基為:1/2MS基本培養(yǎng)基、0.3-0.5mg/L 萘乙酸、0.3-0.5% 活性炭。
[0006]上述各步驟中，培養(yǎng)溫度均為20_25°C，光照強(qiáng)度為2000 lx，光照時(shí)間為16h/d。
[0007]本發(fā)明的技術(shù)效果:本發(fā)明的鐵皮石斛的高效快速繁殖方法，誘導(dǎo)階段采用的誘導(dǎo)培養(yǎng)基通過赤霉素的處理，無菌萌發(fā)效果好，誘導(dǎo)率高，幼葉無褐化、壞死，生根階段采用的生根培養(yǎng)基采用了萘乙酸搭配活性炭，對(duì)鐵皮石斛試管苗生根具有較好的促進(jìn)作用。【具體實(shí)施方式】
[0008]實(shí)施例1
本實(shí)施例的鐵皮石斛的高效快速繁殖方法，包括以下步驟:
(1)不定芽誘導(dǎo):取鐵皮石斛當(dāng)年生幼嫩莖段，切成長(zhǎng)度為1-1.5cm、帶1-2個(gè)腋芽的小莖段，沖洗后，先用75%的酒精浸泡30s，然后用0.1%的氯化汞消毒IOmin ；
將消毒完的石斛莖段在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)25d,該誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:1/2MS基本培養(yǎng)基、0.8mg/L萘乙酸、1.2mg/L的6-節(jié)氨基腺嘌呤、1.5mg/L的赤霉素、25g/L鹿糖；
(2)不定芽的增殖:誘導(dǎo)結(jié)束后，將莖段在節(jié)間處長(zhǎng)出新芽切下，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中繼代增殖30d，在切口處獲得叢生芽；
(3)壯苗及生根移栽:將叢生芽切成單苗，轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)25d，當(dāng)芽發(fā)育為高2-3cm、并具有2-3片葉片時(shí)即可進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)時(shí)間為30d ;其中壯苗培養(yǎng)基為:MS基本培養(yǎng)基、3%蔗糖、0.7%瓊脂；生根培養(yǎng)基為:1/2MS基本培養(yǎng)基、0.5mg/L萘乙酸、0.5%活性炭。
[0009]上述各步驟中，培養(yǎng)溫度均為25°C，光照強(qiáng)度為2000 lx，光照時(shí)間為16h/d。
[0010]實(shí)施例2
本實(shí)施例的鐵皮石斛的高效快速繁殖方法，包括以下步驟:
(1)不定芽誘導(dǎo):取鐵皮石斛當(dāng)年生幼嫩莖段，切成長(zhǎng)度為1-1.5cm、帶1-2個(gè)腋芽的小莖段，沖洗后，先用75%的酒精浸泡30s，然后用0.1%的氯化汞消毒lOmin，再經(jīng)無菌水沖洗5次；
將消毒完的石斛莖段在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)28d,該誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:1/2MS基本培養(yǎng)基、0.5mg/L萘乙酸、1.3 mg/L的6-節(jié)氨基腺嘌呤、1.6mg/L的赤霉素、30g/L鹿糖；
(2)不定芽的增殖:誘導(dǎo)結(jié)束后，將莖段在節(jié)間處長(zhǎng)出新芽切下，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中繼代增殖30d，在切口處獲得叢生芽；
(3)壯苗及生根移栽:將叢生芽切成單苗，轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)25d，當(dāng)芽發(fā)育為高2-3cm、并具有2-3片葉片時(shí)即可進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)時(shí)間為30d ;其中壯苗培養(yǎng)基為:MS基本培養(yǎng)基、3%蔗糖、0.7%瓊脂；生根培養(yǎng)基為:1/2MS基本培養(yǎng)基、0.4mg/L萘乙酸、0.4%活性炭。
[0011]上述各步驟中，培養(yǎng)溫度均為25°C，光照強(qiáng)度為2000 lx，光照時(shí)間為16h/d。
【權(quán)利要求】
1.一種鐵皮石斛的高效快速繁殖方法，其特征在于包括以下步驟: (1)不定芽誘導(dǎo):取鐵皮石斛當(dāng)年生幼嫩莖段，切成長(zhǎng)度為1-1.5cm、帶1-2個(gè)腋芽的小莖段，沖洗后，先用75%的酒精浸泡30s，然后用0.1%的氯化汞消毒10-12mi，再經(jīng)無菌水沖洗4-5次； 將消毒完的石斛莖段在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)25-28d，該誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:1/2MS基本培養(yǎng)基、0.5-0.8mg/L萘乙酸、1.2-1.4mg/L 的 6-芐氨基腺嘌呤、1.5-1.8mg/L 的赤霉素、25_30g/L蔗糖； (2)不定芽的增殖:誘導(dǎo)結(jié)束后，將莖段在節(jié)間處長(zhǎng)出新芽切下，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中繼代增殖30-32d，在切口處獲得叢生芽； (3)壯苗及生根移栽:將叢生芽切成單苗，轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)23-25d，當(dāng)芽發(fā)育為高2-3cm、并具有2-3片葉片時(shí)即可進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)時(shí)間為30_32d ;其中壯苗培養(yǎng)基為:MS基本培養(yǎng)基、3%蔗糖、0.7%瓊脂；生根培養(yǎng)基為:1/2MS基本培養(yǎng)基、`0.3-0.5mg/L 萘乙酸、0.3`-0.5% 活性炭。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103718954SQ201310584516
【公開日】2014年4月16日 申請(qǐng)日期:2013年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月20日
【發(fā)明者】段學(xué)武, 蔣躍民, 鄭永華 申請(qǐng)人:蘇州田園農(nóng)業(yè)技術(shù)開發(fā)有限公司