一種紅藻無菌外植體的制備方法
【專利摘要】本發明公開了紅藻無菌外植體的制備方法，將紅藻用無菌過濾海水清洗干凈后，將江蘺、蜈蚣藻、石花菜、凝花菜、龍須菜、角叉菜、鹿角菜中的任意一種浸泡于1%-5%的碘化鉀溶液中浸泡1-4min，用無菌過濾海水清洗干凈；再將紅藻置于1%-5%的聚維酮碘溶液中浸泡2-8min，然后用無菌過濾海水清洗干凈；最后將海藻置于1%-3%的次氯酸鈉溶液中浸泡1-5min，無菌過濾海水清洗干凈后即可獲得無菌的紅藻外植體。本發明以碘化鉀、聚維酮碘和次氯酸鈉酸鈉為消毒劑，配合使用，可以有效的殺死紅藻外植體表面的細菌和微生物且不損害植株的生長，可以獲得80%無菌可行的外植體。
【專利說明】一種紅藻無菌外植體的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及植物組織培養【技術領域】，具體涉及一種紅藻無菌外植體的制備方法。【背景技術】
[0002]植物組織培養技術是指在無菌培養條件下，將離體的植物器官、組織、細胞、胚胎及原生質體，培養在人工配制的培養基上，給予適宜的培養條件，誘發產生愈傷組織或潛伏芽，或長成完整的植株的技術；由于培養的對象是脫離母體的部分，在試管內培養，所以也可以稱為離體培養。植物組織培養技術不受季節和地域等條件限制，繁殖速度快、植物材料來源單一、遺傳背景一致，并且具有良好的重復性等，通過離體快繁技術可在較短時期內迅速擴大植物的數量。此外，植物組織培養技術具有生長周期短、成本低、苗木整齊一致和管理方便等特點，因此，利用植物組織培養快繁技術可以加速推廣新品種植物的傳播。
[0003]紅藻如江蘺、蜈蚣藻、石花菜、凝花菜、龍須菜、角叉菜、鹿角菜中含有大量的瓊脂，是產瓊脂的主要植物來源，但目前，除了龍須菜已經形成產業規模的育種外，其他紅藻主要以自然野生資源為主。目前，缺乏穩定、充足的紅藻資源，繁育時間長、產量低的有性育種途徑已經不能滿足人們對紅藻日益增長的需求。
[0004]高等陸生植物組織培養技術日臻完善，外植體不但可以通過直接誘導體細胞胚胎或器官完成植株再生過程，也可以通過誘導愈傷組織并通過愈傷組織誘導體細胞胚胎或器官完成植株再生過程。與高等陸生植物組織培養技術相比，海洋植物組織培養技術的研究比較落后，海藻組織培養面臨最大的難題就是無法獲得無菌可行的海藻外植體，因為海洋植物是由單層或多層細胞構成的，其的組織結構與陸生植物有很大的差異，沒有高等植物莖葉所具有的維管束結構，也沒有堅硬的表皮保護；陸生植物常用的酒精、升汞等消毒劑非常容易侵入海藻細胞的內部而造成外植體死亡。目前，大型海藻的組織培養技術相對落后，已知資料中常用抗生素浸泡或洗滌劑清洗來達到消毒滅菌的目的，但是，洗滌劑消毒，清洗是非常棘手的問題，而抗生素有很多方面的危害，對處理后的外植體以及再生的植株有怎樣的危害還不得知，上述處理紅藻外植體的可行性非常低，最多只能獲得60%的無菌外植體。
【發明內容】
[0005]針對現有技術存在的缺陷，本發明所要解決的技術問題是提供一種紅藻無菌外植體的制備方法，本方法簡單、易行、安全，短時間內為紅藻組織培養提供充足的高效、可行的無菌外植體來源。
[0006]為了解決上述技術問題，本發明的技術方案如下:
一種紅藻無菌外植體的制備方法，包括以下步驟:紅藻用無菌過濾海水清洗干凈后，將紅藻浸泡于1%_5%的碘化鉀·溶液中浸泡l_4min，用無菌過濾海水清洗紅藻；再將紅藻置于1%-5%的聚維酮碘溶液中浸泡2-8min，然后用無菌過濾海水清洗紅藻；最后將海藻置于1%-3%的次氯酸鈉溶液中浸泡l_5min，無菌過濾海水清洗干凈后即可獲得無菌的紅藻外植體。
[0007]上述的紅藻為江蘺、蜈蚣藻、石花菜、凝花菜、龍須菜、角叉菜、鹿角菜中的任意一種。
[0008]進一步的，所述的碘化鉀的濃度為2%，浸泡時間為2min。
[0009]進一步的，所述的聚維酮碘的濃度為2%，浸泡時間為3min。
[0010]進一步的，所述的次氯酸鈉溶液為現用現配置的溶液，濃度為2%，浸泡時間為2min。
[0011]本發明的有益效果是:
本發明以碘化鉀、聚維酮碘和次氯酸鈉酸鈉為消毒劑，配合使用，可以有效的殺死紅藻外植體表面的細菌和微生物且不損害植株的生長，可以獲得80%無菌可行的外植體。
【具體實施方式】
[0012]以下通過實施例進一步闡述本發明的有益效果:
實施例1:
江蘺用無菌過濾海水清洗干凈后，將江蘺浸泡于2%的碘化鉀溶液中浸泡2min，用無菌過濾海水清洗江蘺；再將江蘺置于2%的聚維酮碘溶液中浸泡3min，然后用無菌過濾海水清洗江蘺；最后將海藻置于2 %的次氯酸鈉溶液中浸泡2min，無菌過濾海水清洗干凈后將江蘺外植體切成3-5mm的切段，將切段接種于固體VSE培養基中，每個培養皿接種I塊組織切段，共接種100塊組織塊，培養2周后，有20塊組織塊表面形成菌落，污染率為20%,其余80塊組織塊上有芽或絲狀愈傷組織形成。
[0013]實施例2:
江蘺用無菌過濾海水清洗干凈后，將江蘺浸泡于1%的碘化鉀溶液中浸泡4min，用無菌過濾海水清洗江蘺；再將江蘺置于1%的聚維酮碘溶液中浸泡8min，然后用無菌過濾海水清洗江蘺；最后將海藻置于1%的次氯酸鈉溶液中浸泡5min，無菌過濾海水清洗干凈后將江蘺外植體切成3-5mm的切段，將切段接種于固體VSE培養基中，每個培養皿接種I塊組織切段，共接種100塊組織塊，培養2周后，有23塊組織塊表面形成菌落，污染率為23%，有2塊外植體變干死亡，其余75塊組織塊上有芽或絲狀愈傷組織形成。
[0014]實施例3:
江蘺用無菌過濾海水清洗干凈后，將江蘺浸泡于5%的碘化鉀溶液中浸泡lmin，用無菌過濾海水清洗江蘺；再將江蘺置于5%的聚維酮碘溶液中浸泡2min，然后用無菌過濾海水清洗江蘺；最后將海藻置于3%的次氯酸鈉溶液中浸泡lmin，無菌過濾海水清洗干凈后將江蘺外植體切成3-5mm的切段，將切段接種于固體VSE培養基中，每個培養皿接種I塊組織切段，共接種100塊組織塊，培養2周后，有35塊組織塊表面形成菌落，污染率為35%，有5塊外植體變干死亡，其余60塊組織塊上有芽或絲狀愈傷組織形成。
[0015]實施例4:
龍須菜用無菌過濾海水清洗干凈后，將龍須菜浸泡于2%的碘化鉀溶液中浸泡2min，用無菌過濾海水清洗龍須菜；再將龍須菜置于2%的聚維酮碘溶液中浸泡3min，然后用無菌過濾海水清洗龍須菜；最后將海藻置于2%的次氯酸鈉溶液中浸泡2min，無菌過濾海水清洗干凈后將外植體切成3-5_的切段，將切段接種于固體VSE培養基中，每個培養皿接種I塊組織切段，共接種100塊組織塊，培養2周后，有22塊組織塊表面形成菌落，污染率為22%，有4塊外植體干枯死亡,其余74塊組織塊上有芽或絲狀愈傷組織形成。
[0016]實施例5:
石花菜用無菌過濾海水清洗干凈后，將石花菜浸泡于2%的碘化鉀溶液中浸泡2min，用無菌過濾海水清洗石花菜；再將石花菜置于2%的聚維酮碘溶液中浸泡3min，然后用無菌過濾海水清洗石花菜；最后將海藻置于2%的次氯酸鈉溶液中浸泡2min，無菌過濾海水清洗干凈后將外植體切成3-5_的切段，將切段接種于固體VSE培養基中，每個培養皿接種I塊組織切段，共接種100塊組織塊，培養2周后，有23塊組織塊表面形成菌落，污染率為23%，有2塊外植體干枯死亡,其余75塊組織塊上有芽或絲狀愈傷組織形成。
[0017]實施例6:
凝花菜用無菌過濾海水清洗干凈后，將凝花菜浸泡于2%的碘化鉀溶液中浸泡2min，用無菌過濾海水清洗凝花菜；再將石花菜置于2%的聚維酮碘溶液中浸泡3min，然后用無菌過濾海水清洗凝花菜；最后將海藻置于2%的次氯酸鈉溶液中浸泡2min，無菌過濾海水清洗干凈后將外植體切成3-5_的切段，將切段接種于固體VSE培養基中，每個培養皿接種I塊組織切段，共接種100塊組織塊，培養2周后，有25塊組織塊表面形成菌落，污染率為25%，有5塊外植體干枯死亡,其余70塊組織塊上有芽或絲狀愈傷組織形成。
[0018]上述實例只是為說明本發明的技術構思以及技術特點，并不能以此限制本發明的保護范圍。 凡根據本發明的實質所做的等效變換或修飾，都應該涵蓋在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種紅藻無菌外植體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟:紅藻用無菌過濾海水清洗干凈后，將紅藻浸泡于1%_5%的碘化鉀溶液中浸泡l_4min,用無菌過濾海水清洗紅藻；再將紅藻置于1%_5%的聚維酮碘溶液中浸泡2-8min，然后用無菌過濾海水清洗紅藻；最后將海藻置于1%_3%的次氯酸鈉溶液中浸泡l_5min，無菌過濾海水清洗干凈后即可獲得無菌的紅藻外植體。
2.根據權利要求1所述的紅藻無菌外植體的制備方法，其特征在于，所述的紅藻為江蘺、蜈蚣藻、石花菜、凝花菜、龍須菜、角叉菜、鹿角菜中的任意一種。
3.根據權利要求1所述的紅藻無菌外植體的制備方法，其特征在于，所述的碘化鉀的濃度為2%，浸泡時間 為2min。
4.根據權利要求1所述的紅藻無菌外植體的制備方法，其特征在于，所述的聚維酮碘的濃度為3%，浸泡時間為3min。
5.根據權利要求1所述的紅藻無菌外植體的制備方法，其特征在于，所述的次氯酸鈉溶液為現用現配置的溶液，濃度為2%,浸泡時間為2min。
【文檔編號】A01H4/00GK103651117SQ201310554582
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年11月11日 優先權日:2013年11月11日
【發明者】張明 申請人:青島佰眾化工技術有限公司