一種用于藍莓組織培養的培養基的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種用于藍莓組織培養的培養基，其組分及含量為NH4NO3400mg/L，MgSO4.7H2O370mg/L，CaCl2.2H2O95mg/L，Ca(NO3)2.4H2O695mg/L，KH2PO4340mg/L，K2SO4745mg/L，KI0.83mg/L，H3BO36.2mg/L，ZnSO4.7H2O8.6mg/L，Na2Mo04.2H200.25mg/L，CuSO4.5H2O0.025mg/L，CoCl2.6H2O0.025mg/L，MnSO4.4H2O22.3mg/L，FeS04.7H2055.6mg/L，Na2-EDTA74.6mg/L。以本發明的配方為基本培養基，在初代培養基上莖段誘導率為82.5～90.5%，平均初代誘導率較在WPM培養基上提高3.7%；在繼代培養基上的增殖率平均為7.8，較在WPM培養基上的增殖率高9.0%。
【專利說明】一種用于藍莓組織培養的培養基
【技術領域】
[0001]本發明涉及到植物的組織培養，特別是涉及到藍莓的組織培養。
【背景技術】
[0002]藍莓(Blueberry)學名越桔，屬杜胃$花科(Ericaceae)越桔亞科(Vaccinioideae)越桔屬(Vacciniodeae)植物，多年生落葉或常綠灌木或小灌木。藍莓果實含有豐富的Vc、糖、酸及礦物質，尤其富含花色素、S0D、果膠等營養保健成分，對改善人體大腦記憶和智力，增強心腦血管功能，改善視力，增強人體免疫力和組織抗氧化等有特效，被國際糧農組織列為人類五大健康食品之一。歐美的很多國家都把藍莓作為保健與功能食品。國際市場需求量大，供不應求，市場售價昂貴。而且隨著人們生活水平和消費能力提高，營養和保健意識增強，藍莓、樹莓、刺梨等小水果類因其營養和保健等作用日益受到消費者喜愛，成為新興水果，發展前景廣闊。 [0003]我國藍莓種植和研究較晚，從20世紀80年代才開始引進種植，但是近幾年呈迅猛態勢，在吉林、遼寧、山東、浙江、江蘇、貴州等地區種植面積大，經濟效益顯著，開創了一條特色高效農業發展之路。
[0004]傳統的扦插、壓條等繁殖方法繁殖系數和出苗率低，難以滿足迅速推廣優良品種的需要。組織培養繁殖速度快，需要種苗少，能生產出無毒苗，因此被應用于藍莓新品種的繁育。藍莓莖段培養所用的基本培養基有MS、1/2MS、White、WPM( Woody PlantMedium )、改良 WPM (將 WPM 培養基中的 K2S04、CaCl2, FeSO4 和 Na2EDTA 以 KN03190mg/L、Ca(NO3)2.4H20684mg/L> C10H13FeN2NaO 873.4 mg /L 和鹽酸硫胺素 0.1 mg/L 代替)、knops培養基和B5等幾種。目前WPM及其改良型培養基是生產研究中較多為研究者所采用的基本培養基。
[0005]在組織培養中仍存在初代誘導率不高，育苗周期長，缺乏適合特定區域藍莓品種的適宜培養基。由于藍莓品種差異對培養基的營養成分需求也有不同，因此通過組織培養方式生產藍莓種苗時依據品種需使用不同的培養基。
【發明內容】
[0006]本發明研究出一種適合我國南方地區栽植藍莓品種的、具有節約成本、初代誘導率和增殖率高，縮短育苗周期、芽的質量好，得到的苗生根率高，出根能力強，葉片深綠色的
培養基。
[0007]本發明的技術方案是:.一種用于藍莓組織培養的培養基，其特征在于所述的培養基其組分及含量為=NH4NO3 400 mg/L, MgSO4.7H20 370 mg/L, CaCl2.2H20 95 mg/L,Ca (NO3) 2.4H20 695 mg/L, KH2PO4 340 mg/L, K2SO4 745 mg/L, KI 0.83 mg/L, H3BO3 6.2 mg/L, ZnSO4.7H20 8.6 mg/L, Na2MoO4.2H20 0.25 mg/L, CuSO4.5H20 0.025 mg/L, CoCl2.6H200.025 mg/L, MnSO4.4H20 22.3 mg/L, FeSO4.7H20 55.6 mg/L, Na2-EDTA 74.6 mg/L,甘氨酸2.0mg/L，肌醇 100 mg/L，鹽酸硫胺素(VB1) 1.0 mg/L，鹽酸吡哆醇(VB6) 0.5 mg/L，煙酸 0.5mg/L,鹿糖30 g/L，瓊脂7.0 g/L, pH為5.4,余量為蒸懼水。
[0008]培養基滅菌后冷卻至40-70°C時加入無菌ZT，pH值調至5.4。
[0009]培養基滅菌后最好冷卻至40-50°C時加入無菌ZT，pH值調至5.4。
[0010]ZT 加入量為 l-2mg/L。
[0011]一種用于藍莓組織培養的培養基的制備方法，包括步驟:
①.大量元素A液，其組分及含量為=NH4NO38.0g/L, MgSO4.7H20 7.4g/L ；
B 液，其組分及含量為=CaCl2.2H20 1.9 g/L, Ca(NO3)2.4Η2013.9 g/L ；
C 液，其組分及含量為=KH2PO4 6.8g/L，K2SO4H.9 g/L ；
②微量元素，其組分及含量為=KI0.083 g/L, H3BO3 0.62 g/L, ZnSO4.7H20 0.86 g/L,Na2MoO4.2H20 0.025 g/L, CuSO4.5H20 0.0025 g/L, CoCl2.6H20 0.0025 g/L, MnSO4.4H20
2.23 g/L ；
③鐵鹽，其組分及含量為=FeSO4.7H20 2.78 g/L，Na2-EDTA 3.73 g/L ；
④有機元素:Vb其組分及含量為:鹽酸硫胺素0.1 8/1，鹽酸吡哆醇0.05 g/L，煙酸0.05 g/L ；
甘氨酸含量為:0.2 g/L ；
肌醇含量為:10.0 g/L。
[0012]其中混合配制IL培養基的用量為A液、B液、C液各50ml，鐵鹽20ml，微量元素、甘氨酸、肌醇、VB各10ml，蔗糖30 g/L，瓊脂7.0 g/L，余量是蒸餾水；
⑤將上述配制好的培養基121°C溫度下滅菌20min.。
[0013]培養基滅菌后冷卻至40_50°C時加入無菌ZT, pH值調至5.4。
[0014]ZT 加入量為 l_2mg/L。
[0015]有益效果
以本發明的配方為基本培養基，在初代培養基上莖段誘導率為82.5~90.5%，平均初代誘導率較在WPM培養基上提高3.7% ;在繼代培養基上的增殖率平均為7.8，較在WPM培養基上的增殖率高9.0%。苗生根率高，苗木健壯，育苗周期短，降低了成本，提高了苗木繁殖效率。
[0016]【具體實施方式】:
1、培養基的制備及滅菌
按照本培養基組分及含量配制母液:大量元素A液(NH4NO3 8.0g/L, MgSO4.7H20 7.4g/L, )、B 液(CaCl2.2H20 1.9 g/L, Ca(NO3)2.4Η2013.9 g/L)、C 液(KH2PO4 6.8g/L, K2SO4H.9g/L)，微量元素(ΚΙ 0.083 g/L, H3BO3 0.62 g/L, ZnSO4.7H20 0.86 g/L, Na2MoO4.2H20 0.025g/L, CuS04.5H20 0.0025 g/L, CoCl2.6H20 0.0025 g/L, MnSO4.4H20 2.23 g/L)、鐵鹽(FeS04.7H20 2.78 g/L，Na2_EDTA 3.73 g/L)、甘氨酸(0.2 g/L)、肌醇(10.0 g/L)、VB (鹽酸硫胺素0.1 g/L,鹽酸吡哆醇0.05 g/L,煙酸0.05 g/L)各1L。配制IL培養基的用量為A液、B液、C液各50ml，鐵鹽20ml，微量元素、甘氨酸、肌醇、VB各10ml。加入瓊脂7.0 g/L,蔗糖30.0 g/L,加蒸餾水定容至1L，煮沸后，裝入IL容量瓶中。在121°C溫度下滅菌20min。在超凈工作臺上，用無菌(0.22um微孔濾膜)過濾器過濾1.0 mg/ml的ZT溶液。滅菌后的培養基冷卻至40-70°C，最好是40 - 50°C時每升加入l_2ml 1.0 mg/ml無菌ZT溶液，PH調至5.4。其中ZT -zeatin,玉米素，從玉米嫩籽中分離出的一種存在于高等植物中的天然細胞分裂素；分子式:c1(ih13n5o。
[0017]2、外植體莖段的初代培養
2.1初代培養基
培養基滅菌后冷卻至40-70°C，最好是40 - 50°C時用無菌移液槍每升中加入2ml
1.0 mg/ml的無菌ZT溶液，搖勻后分裝到30根無菌試管中。將7-8cm莖段，70%酒精處理30s+0.l%HgCl26-8min，剪成單芽莖段接種在改良WPM+2mg/LZT的培養基上。。
[0018]2.2莖段誘導
4-6月份，剪取生長健壯，無病蟲害的當年生枝條，去掉葉片，葉柄留l_2mm，剪成7~8cm的莖段，流水沖洗lh。在超凈臺上先在IL盛裝70%酒精的燒杯中浸泡30s，無菌水沖洗3次,再在IL盛裝0.1% HgCl2的燒杯中消毒6~8min,無菌水沖洗5次,每次5min,無菌濾紙吸干水分后剪成1.0-1.5cm單芽莖段，接種到分裝培養基的試管中。25°C，黑暗培養7d后，每天光照培養14h，光強19001x，黑暗培養lOh，40-50d后繼代。
[0019]誘導率=(萌芽莖段數/接種莖段數)X 100%
3個品種接種在改良WPM培養基上的誘導率為82.5-90.5%,較在WPM培養基上的誘導率分別高4.1%, 1.9%, 5.2%。品種間誘導率有差異，其中都克 > 藍雨 > 燦爛。
[0020]表1不同品種芽誘導率
【權利要求】
1.一種用于藍莓組織培養的培養基，其特征在于所述的培養基其組分及含量為:NH4NO3 400 mg/L, MgSO4.7H20 370 mg/L, CaCl2.2H20 95 mg/L, Ca (NO3) 2.4H20 695 mg/L,KH2PO4 340 mg/L, K2SO4 745 mg/L, KI 0.83 mg/L, H3BO3 6.2 mg/L, ZnSO4.7H20 8.6 mg/L,Na2MoO4.2H20 0.25 mg/L, CuSO4.5H20 0.025 mg/L, CoCl2.6H20 0.025 mg/L,MnSO4.4H20 22.3mg/L, FeSO4.7H20 55.6 mg/L, Na2-EDTA 74.6 mg/L,甘氨酸 2.0mg/L,肌醇 100 mg/L,鹽酸硫胺素(VB1 )1.0 mg/L，鹽酸吡哆醇(VB6) 0.5 mg/L，煙酸 0.5 mg/L，蔗糖 30 g/L，瓊脂 7.0g/L,余量為蒸懼水。
2.如權利要求1所述的培養基，其特征在于:所述的培養基滅菌后冷卻至40-70°C時加入無菌ZT，pH值調至5.4。
3.如權利要求1所述的培養基，其特征在于:所述的培養基滅菌后冷卻至40-50°C時加入無菌ZT，pH值調至5.4。
4.如權利要求2或3所述的培養基，其特征在于:所述的ZT加入量為l_2mg/L。
5.一種用于藍莓組織培養的培養基的制備方法，包括步驟: ①.大量元素A液，其組分及含量為=NH4NO38.0g/L, MgSO4.7H20 7.4g/L ；
B 液，其組分及含量為=CaCl2.2H20 1.9 g/L, Ca(NO3)2.4Η2013.9 g/L ； C 液，其組分及含量為=KH2PO4 6.8g/L，K2SO4H.9 g/L ；
②微量元素，其組分及含量為=KI0.083 g/L, H3BO3 0.62 g/L, ZnSO4.7H20 0.86 g/L,Na2MoO4.2H20 0.025 g/L, CuSO4.5H20 0.0025 g/L, CoCl2.6H20 0.0025 g/L, MnSO4.4H202.23 g/L ；` ③鐵鹽，其組分及含量為=FeSO4.7H20 2.78 g/L，Na2-EDTA 3.73 g/L ； ④有機元素:Vb其組分及含量為:鹽酸硫胺素0.1 8/1，鹽酸吡哆醇0.05 g/L，煙酸0.05 g/L ；
甘氨酸含量為:0.2 g/L ；
肌醇含量為:10.0 g/L ； 其中混合配制IL培養基的用量為A液、B液、C液各50ml，鐵鹽20ml，微量元素、甘氨酸、肌醇、VB各10ml，蔗糖30.0g，瓊脂7.0g，余量是蒸餾水； ⑤將上述配制好的培養基121°C溫度下滅菌20min.。
6.如權利要求5所述的方法，其特征在于:所述的培養基滅菌后冷卻至40-50°C時加入無菌ZT，pH值調至5.4。
7.如權利要求5或6所述的方法，其特征在于:所述的ZT加入量為l_2mg/L。
【文檔編號】A01H4/00GK103548697SQ201310546475
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月7日 優先權日:2013年11月7日
【發明者】涂俊凡, 秦仲麒, 李先明, 楊夫臣, 朱紅艷, 伍濤 申請人:湖北省農業科學院果樹茶葉研究所