一種杜鵑花金躑躅的組培快繁方法
【專利摘要】本發明涉及一種杜鵑花金躑躅的組織培養快繁方法，具體地說，涉及植物生物技術中植物組織培養方法。組培快繁包括選擇外植體、消毒、叢生芽誘導、繼代并生根培養和試管苗移栽步驟，選取金躑躅的莖段為外植體，外植體取金躑躅的莖段，叢芽誘導培養基為改良Anderson+2.0mg/lZT+0.1mg/lNAA，pH5.1-5.2；繼代培養基為改良Anderson+1.0mg/lZT+0.1mg/lNAA；生根培養基為1/2改良Anderson+0.5mg/lNAA。使用該方法可達到一個莖段誘導4-5或者更過的叢枝，45天生根率達77%，移栽成活率90%，極大地提高了金躑躅的快繁能力，為新品種金躑躅的保存和規模化生產提供了技術支撐。
【專利說明】一種杜鵑花金躑躅的組培快繁方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種杜鵑花金躑躅的組織培養快繁方法，具體地說，涉及植物生物技術中植物組織培養方法。
【背景技術】
[0002]“金躑躅”是從羊躑躅實生苗中選育出的變異品種。羊躑躅隸屬于杜鵑花科(Ericaceae)杜醇花屬(Rhododendron)羊擲躅亞屬,落葉灌木。“金擲躅”的花金黃色,花色鮮艷，具有較高的觀賞價值，由于“金躑躅”為羊躑躅芽突變得到的變異性狀的新品種，并且經過新品種發明人的多年試驗，金躑躅的扦插幾乎不生根，扦插較為困難。迄今，金躑躅沒有相關生物技術方法快繁的研究與報道，為使金躑躅優良的特性能夠保存和可持續利用，需要研究該種的組織培養，并形成一套專門的組織培養快繁技術體系。
【發明內容】
[0003]本發明的目的在于克服金躑躅生扦插困難、成活率低的不足，提供一種杜鵑花金躑躅的組織培養方法，使之能夠繁衍。該新品種金躑躅在優良性狀的保存能夠得到保障條件下，同時縮短離體培養時間，提高生根率和幼苗移栽率，為新品種“金躑躅”的可持續利用奠定組培種苗繁育基礎。
[0004]為了實現本發明的目的，本發明提供了如下的技術方案:
? 一種杜鵑花金躑躅的組培快繁方法包括選擇外植體、消毒、叢生芽誘導、繼代并生根培養和試管苗移栽步驟，外植體取金躑躅的莖段，叢芽誘導培養基為改良Anderson+2.0mg/1 ZT +0.lmg/1 NAA, pH5.1-5.2 ;繼代培養基為改良 Anderson +1.0mg/l ZT+0.lmg/1 NAA ;生根培養基為 1/2 改良 Anderson +0.5mg/l NAA。
`[0005]所述外植體的消毒先用5%洗衣粉水浸泡清洗20min,再用無菌水沖洗至無泡沫，然后采用75%的酒精滅菌30s，無菌水沖洗3遍后再用0.1%升汞溶液進行表面消毒8min，分兩次進行，第一次消毒5min，不斷震蕩后用無菌水清洗3_5遍,再用0.1%升汞消毒3min后用無菌水清洗3-5遍。
[0006]所述叢芽誘導和繼代及生根培養的溫度為20_23°C，濕度30-45%。
[0007]所述叢芽誘導和繼代及生根培養的光照條件為自然光2000-2500LUX+人工輔助光 1500-2000LUX。
[0008]試管苗移栽是生根組培苗在培養瓶內培養45天以后，煉苗7天，再移栽到溫室大棚。
[0009]移栽基質為1份珍珠巖+1份腐殖土，pH為5.1-5.2。
[0010]試管苗移栽在早上8-11點以前，溫度為18_25°C下進行。
[0011]杜鵑花金躑躅的組培快繁方法具體操作是:選取金躑躅莖段為外植體，用5%的洗衣粉水進行浸泡和沖洗，然后用75%酒精消毒30s，后用0.1%升汞溶液進行消毒8min，分兩次進行，第一次5min，不斷震蕩后用無菌水清洗3-5遍，再用0.1%升汞消毒3分鐘后用無菌水清洗3-5遍；
將金躑躅莖段置于消毒后的濾紙上，切取一葉一段，接種至誘導培養基改良Anderson+2.0mg/1 ZT +0.lmg/1 ΝΑΑ, ρΗ5.1_5.2，溫度 20-23 °C，濕度 30-45%，光照條件為自然光2000-2500LUX+人工輔助光1500-2000LUX下培養，長出叢芽后轉接入改良Anderson+1.0mg/1 ZT +0.lmg/1 NAA中進行增殖、繼代和生根，繼代3_4次，每次30天；
將繼代苗轉入生根培養基，莖段未木質化，生根培養基為1/2改良Anderson +0.5mg/lNAA, 45天生根培養后進行組培苗煉苗7天后得試管苗，將試管苗移栽到基質為1份珍珠巖+1份腐殖土，PH為5.1-5.2，濕度50-60%的大棚內，每天早晚各噴水一次。
[0012]本發明技術方案提出是基于下述的研究基礎:“金躑躅”為杜鵑花新品種，色彩艷麗豐富，但金躑躅的生根難度較大，扦插幾乎不生根，為了解決其大量快繁、保存和可持續利用，故此發明金躑躅組織培養的技術。
[0013]本發明組培擴繁不僅可以在短時間內獲得大量的再生植株，而且移栽生長良好且能保持其優良性狀不變。試管苗移栽的溫度控制在18-23°C，最好在早上8-11點進行移栽，組培苗雖然在生長過程中很少受病蟲害的浸染，但為了預防病蟲害的發生，在生長季內噴施多囷靈、氧化樂果2_3次為且。夏季要注思通風。
[0014]本發明方法其優點在于:
1、建立了有效的“金躑躅”組培快繁方法，解決了其生根困難，快繁受阻的狀況。
[0015]2、通過組培快繁得到的幼苗，成苗容易，一致性強，生長健壯，葉色濃綠，很少病蟲害，易于管理。
[0016]3、利用組培快繁方法快繁的金躑躅不受季節限制，任何時候都可以進行組培。
[0017]4、利用組培快繁的方法快繁的金躑躅可以保持物種特性，使該新品種能夠延續和可持續利用。
[0018]本發明組培快繁方法繁育的金躑躅在I個月內增殖系數為4_5，45天生根率為77%，移栽成活率為90%，極大地提高了金躑躅的快繁系數，為該物種的保存和可持續利用提供了非常有效的快繁方法。
【具體實施方式】
[0019]以下實施例用來進一步說明本發明的實質性內容。根據本發明技術方案和實施例的描述，也許同領域技術人員在本發明的基礎上還可以對本發明技術方案進行一些修改和改進。因此，在不偏離本發明主要技術方案基礎上所做的修改和改進，均應屬于本發明所要求保護的范圍。
[0020]本發明杜鵑花金躑躅的組培快繁方法可具體描述為:方法包括選擇外植體、消毒、叢生芽誘導，繼代并生根培養，試管苗移栽步驟，選取金躑躅的莖段為外植體，外植體取金躑躅的莖段，叢芽誘導培養基為改良Anderson +2.0mg/1 ZT +0.lmg/1 NAA, pH5.1-5.2 ；繼代培養基為改良Anderson +1.0mg/l ZT +0.lmg/1 NAA ;生根培養基為1/2改良Anderson+0.5mg/l NAA。
[0021]所述外植體消毒先用5%的洗衣粉水,浸泡清洗20min,用無菌水沖洗至無泡沫,后用70%的酒精消毒30s,無菌水沖洗3-5遍后,用0.1%升萊溶液進行消毒8min,分兩次進行，第一次5min，不斷震蕩后用無菌水清洗3_5遍，再用0.1%升汞消毒3min后用無菌水清洗3-5遍。
[0022]所述叢芽誘導和繼代及生根培養的溫度為20_23°C，濕度30-45%。
[0023]所述叢芽誘導和繼代及生根培養的光照條件為自然光2000-2500LUX+人工輔助光 1500-2000LUX。
[0024]移栽生根是組培苗在培養瓶內生根培養45天以后，煉苗7天，再移栽于溫室大棚中。
[0025]移栽基質為1份珍珠巖+1份腐殖土，pH為5.1-5.2。
[0026]移栽在早上8-11點以前，溫度為18_25°C下進行。
[0027]實施例1:選取金躑躅的莖段為外植體，用5%的洗衣粉水浸泡和沖洗20min，后用70%的酒精消毒30s,無菌水沖洗3-5遍后,用0.1%升萊溶液進行消毒8 min,分兩次進行，第一次5 min，不斷震蕩后用無菌水清洗3-5遍，再用0.1%升汞消毒3 min后用無菌水清洗
3-5遍,用無菌濾紙吸干表面水分后接種至誘導培養基改良Anderson+2.0mg/1 ZT+0.lmg/1ΝΑΑ,ρΗδ.1-5.2，溫度20_23°C，濕度30_45%，光照條件為自然光2000-2500LUX+人工輔助光1500-2000LUX下培養，長出叢芽后轉接入改良Anderson+l.0mg/1 ZT+0.lmg/1 NAA中進行增殖、繼代，生根為改良l/2Anderson+0.5mg/l NAA,繼代3_4次，周期30天；組培苗煉苗一周后，移栽于基質為1份珍珠巖+1份腐殖土，PH為5.1-5.2，濕度50-60%的大棚內，每天早晚各噴水一次。
[0028]對比實驗組:
以“金躑躅”的莖段為外植體探索叢芽誘導最適培養基。選用“金躑躅”的莖段為外植體探索最佳培養基配方。取“金躑躅”的莖段放入5%洗衣粉水中浸泡20min，后用70%的酒精消毒30s，無菌水沖洗3-5遍后，用0.1%升汞溶液進行消毒8 min，分兩次進行，第一次5min,不斷震蕩后用無菌水清洗3-5遍,再用0.1%升萊消毒3 min后用無菌水清洗3_5遍,用無菌濾紙吸干表面水分，在超凈工作臺上將莖段切成一葉一段，接種在叢芽誘導培養基上，每瓶接種4-5個，共接30株。其中，ZT的濃度梯度為0.5mg、l.0mg和1.5mg/l ；NAA的濃度梯度為為0.05 mg/1,0.1 mg/1和0.5mg/l，培養基PH為5.1-5.2，采用均勻設計法。不同ZT和NAA濃度影響“金躑躅”莖段的分化，接種30天后，莖段底部有大量愈傷組織形成，并有叢芽發生。
[0029]培養室的光照條件為自然光2000-2500LUX+人工輔助光1500-2000LUX，光照時間12h/d。
[0030]該培養基不僅提高了分化系數而且促進了生根，繼代30天后，每個芽生長葉片7-8片，株高3cm，大量須根白色。另外，溫度對叢芽的誘導和組培苗的生長和生根也起到了非常關鍵的作用，溫度在21-23 °C，光照為自然光2000-2500LUX+人工輔助光1500-2000LUX，光照時間12h/d，有利于叢芽分化。在此條件下葉色濃綠，生長健壯，試管苗的增殖系數為4-5，45天生根率為77%，極大地提高了金躑躅的快繁系數。
[0031]當每株金躑躅在瓶內生根較密，根長為l-3cm時可作移栽準備。首先將瓶蓋打開進行煉苗，同時，在溫室準備移栽準備，移栽基質為1份珍珠巖+1份腐殖土，PH為5.1-5.2。將移栽基質裝入移栽盤內，清水浸透，將煉苗7天后的組培苗移栽于溫室內的移苗盤內，移栽時間最好在早上8-11點進行，溫度在18-25°C，覆薄膜并每天澆水1-2次，注意在早上
8-10點以前打開薄膜以通氣，濕度在50-60%之間。10天以后即可揭掉薄膜，進行正常管理。[0032]通過上述本發明的組培快繁方法，繁育的金躑躅在I個月內增殖系數為4-5，45天生根率為77%，移栽成活率為90%，極大地提高了金躑躅的快繁系數，阻止了由于生殖隔離缺乏種子導致該物種滅絕的危險，為該物種的保存和可持續利用提供了非常有效的快繁方
法。·
【權利要求】
1.一種杜鵑花金躑躅的組培快繁方法，其特征在于組培快繁包括選擇外植體、消毒、叢生芽誘導、繼代并生根培養和試管苗移栽步驟，外植體取金躑躅的莖段，叢芽誘導培養基為改良 Anderson +2.0mg/1 ZT +0.lmg/1 NAA, ρΗ5.1-5.2 ;繼代培養基為改良 Anderson+1.0mg/1 ZT +0.lmg/1 NAA ;生根培養基為 1/2 改良 Anderson +0.5mg/l NAA。
2.根據權利要求1所述的杜鵑花金躑躅的組培快繁方法，其特征在于所述外植體的消毒先用5%洗衣粉水浸泡清洗20min，再用無菌水沖洗至無泡沫，然后采用75%的酒精滅菌30s,無菌水沖洗3遍后再用0.1%升汞溶液進行表面消毒8min，分兩次進行，第一次消毒5min,不斷震蕩后用無菌水清洗3-5遍，再用0.1%升汞消毒3min后用無菌水清洗3_5遍。
3.根據權利要求1所述的杜鵑花金躑躅的組培快繁方法，其特征在于所述叢芽誘導和繼代及生根培養的溫度為20-23°C，濕度30-45%。
4.根據權利I所述的杜鵑花金躑躅的組培快繁方法，其特征在于所述叢芽誘導和繼代及生根培養的光照條件為自然光2000-2500LUX+人工輔助光1500-2000LUX。
5.根據權利要求1所述的杜鵑花金躑躅的組培快繁方法，其特征在于試管苗移栽是生根組培苗在培養瓶內培養45天以后，煉苗7天，再移栽到溫室大棚。
6.根據權利要求1或5所述的杜鵑花金躑躅的組培快繁方法，其特征在于移栽基質為1份珍珠巖+1份腐殖土，PH為5.1-5.2。
7.根據權利要求1所述的杜鵑花金躑躅的組培快繁方法，其特征在于試管苗移栽在早上8-11點以前,溫度為18-25°C下進行。
8.根據權利要求書1-7中任意一項所述的杜鵑花金躑躅的組培快繁方法，其特征在于組培快繁方法具體操作是:選`取金躑躅莖段為外植體，用5%的洗衣粉水進行浸泡和沖洗，然后用75%酒精消毒30s,后用0.1%升萊溶液進行消毒8min,分兩次進行,第一次5min,不斷震蕩后用無菌水清洗3-5遍，再用0.1%升汞消毒3分鐘后用無菌水清洗3-5遍； 將金躑躅莖段置于消毒后的濾紙上，切取一葉一段，接種至誘導培養基改良Anderson+2.0mg/1 ZT +0.lmg/1 ΝΑΑ, ρΗ5.1_5.2，溫度 20-23 °C，濕度 30-45%，光照條件為自然光2000-2500LUX+人工輔助光1500-2000LUX下培養，長出叢芽后轉接入改良Anderson+1.0mg/l ZT +0.lmg/1 NAA中進行增殖、繼代和生根，繼代3_4次，每次30天； 將繼代苗轉入生根培養基，莖段未木質化，生根培養基為1/2改良Anderson +0.5mg/lNAA, 45天生根培養后進行組培苗煉苗7天后得試管苗，將試管苗移栽到基質為1份珍珠巖+1份腐殖土，PH為5.1-5.2，濕度50-60%的大棚內，每天早晚各噴水一次。
【文檔編號】A01H4/00GK103651115SQ201310538539
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年11月5日 優先權日:2013年11月5日
【發明者】劉國強, 李奮勇, 田曉玲, 張長芹 申請人:云南遠益園林工程有限公司