一種獨一味離體培養(yǎng)一步成苗培養(yǎng)基及其方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種獨一味離體培養(yǎng)一步成苗培養(yǎng)基及其方法，該培養(yǎng)基使獨一味試管苗葉片離體培養(yǎng)一步成苗。所述一步成苗培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基，補加不同濃度和組合的6-芐氨基嘌呤（6-BA），萘乙酸（NAA）和2，4-二氯苯氧乙酸（2,4-D），試管苗葉片作為外植體接種后經(jīng)愈傷組織誘導直接分化不定芽和不定根，一步獲得獨一味再生植株。本發(fā)明無需將初代培養(yǎng)基中誘導獲得的愈傷組織轉接于分化培養(yǎng)基中再生成苗，與離體培養(yǎng)多步再生成苗相比，其步驟簡化，培養(yǎng)周期短，重復性好，成苗率高。
【專利說明】一種獨一味離體培養(yǎng)一步成苗培養(yǎng)基及其方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術領域】，具體地，涉及一種獨一味離體培養(yǎng)一步成苗培養(yǎng)基，應用該培養(yǎng)基使獨一味試管苗葉片一步成苗的方法，相應地，本發(fā)明也提供了一種優(yōu)化該培養(yǎng)基的方法。
【背景技術】
[0002]獨一味Lamiophlomis rotata (Benth.)Kudo,為唇形科,獨一味屬植物，該屬僅有獨一味一個種。主產(chǎn)西藏，青海，甘肅，四川西部及云南西北部；生于高原或高山上強度風化的碎石灘中或石質高山草甸、河灘地，海拔2700~4500m。具有典型高山植物特征，如植物矮，莖短，根系發(fā)達，葉片較大，貼地展開。這些特征與其生長環(huán)境為高寒缺氧、干旱風大、輻射強及晝夜溫差大等有關。
[0003]獨一味屬于傳統(tǒng)藏藥，民間用全草入藥，治跌打損傷、筋骨疼痛、氣滯閃腰、浮腫后流黃水、關節(jié)積黃水、骨松質發(fā)炎。此外據(jù)青海對大白鼠股動脈、肱動脈、頸動脈橫切斷止血試驗，認為本種有較好的止血效果。隨著野生獨一味的存儲量逐步降低，對獨一味的研究也越來越受到重視。對將獨一味引種到低海拔地區(qū)的研究工作也有部分開展。如金蘭等通過將獨一味根莖芽從海拔4300m的野生地移栽到海拔2366m和3100m的實驗基地后，對移栽地獨一味的花粉活力，花粉萌發(fā)及自然結束率進行了統(tǒng)計，結果發(fā)現(xiàn)獨一味移栽到較低海拔后花粉活力低，柱頭上無花粉萌發(fā)，自然結實率為O。因此，在低海拔地區(qū)對獨一味的種苗獲得，以植物組織培養(yǎng)方式更為可行。但是，通過對培養(yǎng)基成分的研究，采用一次組培成苗的技術，還未見報道。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]針對上述問題，本發(fā)明的主要目的是提供一種優(yōu)化獨一味離體培養(yǎng)一步成苗的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法，通過該優(yōu)化方法獲得的獨一味試管苗葉片一步成苗培養(yǎng)基和使其一步成苗的培養(yǎng)方法。應用該獨一味一步成苗培養(yǎng)基和該培養(yǎng)方法，獨一味試管苗葉片在形成愈傷組織后，不需要轉移到分化培養(yǎng)基上，而是直接在原培養(yǎng)基上分化成苗，提高了獨一味試管苗葉片愈傷組織的再生效率、縮短了培養(yǎng)時間、簡化了操作步驟，為獨一味優(yōu)良種苗復壯快繁和品種改良提供了一條有效途徑。
[0005]本發(fā)明是通過如下技術方案實現(xiàn)的:
[0006]—種獨一味離體培養(yǎng)一步成苗培養(yǎng)基，使獨一味試管苗葉片離體培養(yǎng)一步成苗，所述培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基，并在IL MS培養(yǎng)基中，還需補加如下組分，并使各組分的終濃度如下:
[0007]6-BA (6-節(jié)氛基嘿呤)1.0 ~2.0mg/L ；
[0008]NAA (蔡乙酸)0.5 ~1.5mg/L ；
[0009]2,4-D (2，4-二氯苯氧乙酸)0~0.111^/1。
[0010]所述的獨一味離體培養(yǎng)一步成苗培養(yǎng)基，以MS為基礎培養(yǎng)基,加入的激素各組分的終濃度為:
[0011]6-BA 2.0mg/L ；
[0012]NAA 1.0mg/L ο
[0013]一種獨一味試管苗葉片離體培養(yǎng)一步成苗的培養(yǎng)方法，包括如下步驟:
[0014](I)按照所述的配方配制獨一味離體培養(yǎng)一步成苗培養(yǎng)基，并進行滅菌處理；
[0015](2)選取來源一致的獨一味無菌試管苗，無菌條件下，切取頂端完全展開的葉片約0.5cmX0.5cm,以葉片背面貼于步驟I所述的培養(yǎng)基上；
[0016](3)將步驟(2)所得的接種后培養(yǎng)基置于溫度為18~20°C條件下，全黑暗培養(yǎng)，7~IOd后，再每天進行光照12~16h，1000~1200Lx，培養(yǎng)30~40d后，愈傷組織形成，培養(yǎng)50~60d后統(tǒng)計愈傷組織逐漸分化出不定芽與不定根，形成試管苗；
[0017](4)將試管苗經(jīng)常規(guī)煉苗技術，進行試管苗移栽，30d后統(tǒng)計移栽存活率。
[0018]本發(fā)明的有益效果為:所述的獨一味離體培養(yǎng)一步成苗培養(yǎng)基和應用該培養(yǎng)基使獨一味試管葉片離體培養(yǎng)一步成苗的方法，葉片外植體在形成愈傷組織后，不需要轉移到分化培養(yǎng)基上，而是直接在原培養(yǎng)基上分化成苗，該方法具有再生周期短，繁殖系數(shù)和再生頻率高，易操作，培養(yǎng)程序簡單等優(yōu)點，為獨一味在低海拔地區(qū)種苗培育提供了良好的方法。
【具體實施方式】
[0019]以下結合具體實施例，對本發(fā)明進行詳細說明。
[0020]一種優(yōu)化獨一味離體培養(yǎng)一步成苗培養(yǎng)基的方法，該培養(yǎng)基使獨一味試管苗葉片離體培養(yǎng)一步成苗，包括以下步驟:
[0021]以不加任何激素的MS培養(yǎng)基作為對照，采用三因素三水平的L9 (34)正交試驗設計，在MS培養(yǎng)基中添加不同濃度和組合的6-BA、NAA和2，4_D，配制成10組不同的獨一味一步成苗培養(yǎng)基。各組中，含有的6-BA、NAA和2，4-D的濃度及組合見表1
[0022]表1具有不同激素組合物的獨一味一步成苗培養(yǎng)基正交實驗設計L9 (34)
【權利要求】
1.一種獨一味離體培養(yǎng)一步成苗培養(yǎng)基，使獨一味試管苗葉片離體培養(yǎng)一步成苗，其特征在于，所述培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基，并在IL MS培養(yǎng)基中，還需補加如下組分，并使各組分的終濃度如下: 6-BA1.0 ~2.0mg/L ； NAA0.5 ~1.5mg/L ； 2,4-D O ~0.lmg/Lo
2.根據(jù)權利要求1所述的獨一味離體培養(yǎng)一步成苗培養(yǎng)基，其特征在于，以MS為基礎培養(yǎng)基，加入的激素各組分的終濃度為: 6-BA 2.0mg/L ； NAA 1.0mg/Lο
3.—種獨一味試管苗葉片離體培養(yǎng)一步成苗的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)按照權利要求1或2所述的配方配制獨一味離體培養(yǎng)一步成苗培養(yǎng)基，并進行滅菌處理； (2)選取來源一致的獨一味無菌試管苗，無菌條件下，切取頂端完全展開的葉片約.0.5cmX0.5cm,以葉片背面貼于步驟I所述的培養(yǎng)基上； (3)將步驟(2)所得的接種后培養(yǎng)基置于溫度為18~20°C條件下，全黑暗培養(yǎng)，7~IOd后，再每天進行光照12~16h，1000~1200Lx。
【文檔編號】A01H4/00GK103461138SQ201310437034
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月23日 優(yōu)先權日:2013年9月23日
【發(fā)明者】楊華, 黃雪麗, 牟蘭, 田孟良 申請人:四川農(nóng)業(yè)大學