專利名稱：用于防治松材線蟲病的菌株Smal-007及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種細(xì)菌菌株，具體涉及一種防治松材線蟲病的菌株。
背景技術(shù)：
松材線蟲病是世界上最嚴(yán)重的林木病害。該病在日本、韓國(guó)、美國(guó)、加拿大、墨西哥等國(guó)都有發(fā)生，日本是松材線蟲病危害最嚴(yán)重的國(guó)家，幾乎造成了赤松林和黑松林的覆沒。我國(guó)自1982年在江蘇省首次發(fā)現(xiàn)松材線蟲病以來，疫區(qū)已擴(kuò)大至14個(gè)省、(自治區(qū)、直轄市)192個(gè)縣級(jí)行政區(qū)，累計(jì)致死松樹5億多株，毀滅松林500多萬畝，造成經(jīng)濟(jì)損失數(shù)千億元。我國(guó)對(duì)于松材線蟲病的研究盡管已經(jīng)持續(xù)了幾十年，但到目前為止仍然沒有找到能應(yīng)用與生產(chǎn)，切實(shí)有效控制病害發(fā)展的防治方法。目前世界上對(duì) 松材線蟲病的防治還沒有有效的方法。目前使用的防治方法主要有①冬季砍除病死株，以減少初侵染來源。該方法缺點(diǎn)是砍伐不徹底，年年砍年年有發(fā)生，②樹干注射殺線蟲劑，以保護(hù)珍貴松樹。該方法的缺點(diǎn)是使用繁瑣，對(duì)樹木傷害較大。③用寄生昆蟲寄生傳媒昆蟲天牛，該方法的缺點(diǎn)是寄生昆蟲的飼養(yǎng)繁瑣，效果也一般。④利用天牛引誘劑引誘天牛，該方法效果一般?？偟膩碚f，這些方法雖然有一定效果，但都不能徹底解決松材線蟲病問題。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種用于防治松材線蟲病的菌株，只要把菌株Smal-007噴灑到松林內(nèi)，所述菌株就可快速替代我國(guó)松林內(nèi)松材線蟲體表的強(qiáng)致病細(xì)菌，使松材線蟲失去致病能力，從而達(dá)到控制松材線蟲病流行的目的，本發(fā)明方法簡(jiǎn)單易行，效果穩(wěn)定。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:—種用于防治松材線蟲病的菌株Smal-007,所述菌株的分類命名為:嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia),保藏編號(hào)為CGMCC N0.6990,保藏單位為中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，保藏單位地址為:北京市朝陽區(qū)大屯路中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，保藏日期為2012年12月13日。所述菌株為革蘭氏染色陰性細(xì)菌，經(jīng)16rDNA序列測(cè)定，菌株Smal-007為嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia),菌株的 16s rDNA喊基序列如 SEQ ID No:l 所示所述菌株能附著在松材線蟲(Bursaphelenchus xylophilus)體表,能替代松材線蟲體表的其他強(qiáng)致病細(xì)菌。所述菌株產(chǎn)生的毒素對(duì)馬尾松，黑松，濕地松等毒性較小，不能導(dǎo)致大多數(shù)松樹死亡；對(duì)紫外線有一定的抵抗能力，可在松林內(nèi)長(zhǎng)期生存。經(jīng)安全性測(cè)定，所述菌株對(duì)環(huán)境和其他生物沒有任何影響。菌株可用液體深層發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵通氣量15L/m,攪拌轉(zhuǎn)速200r/min，發(fā)酵溫度為30°C，發(fā)酵時(shí)間36h，初始pH值7.0。最適的發(fā)酵培養(yǎng)基配方(g/ml)葡萄糖2%，蔗糖2%，蛋白胨酵母膏復(fù)合物3%。發(fā)酵完成后培養(yǎng)液出罐直接用塑料包裝桶或包裝瓶分裝成液體劑型或采用泥炭吸附用包裝袋分裝成固體劑型。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:菌株Smal-007是用于防治松材線蟲病(Pine wild disease)的生防細(xì)菌。松材線蟲病是世界林木頭號(hào)病害，可引起松林成片枯萎死亡，但目前還沒有很好的防治方法。如果把菌株Smal-007噴灑到松林內(nèi)，就可在松林內(nèi)長(zhǎng)期生存，并逐漸替代松材線蟲體表致病細(xì)菌,使松材線蟲失去致病性,從而能以微生物之間的“競(jìng)爭(zhēng)”達(dá)到徹底防治松材線蟲病的目的菌株Smal-007 的 16s rDNA 序列如 SEQ ID No:1 所示。
具體實(shí)施方式
:實(shí)施例1:1.配制培養(yǎng)基:葡萄糖2%，蔗糖2%，蛋白胨酵母膏復(fù)合物3% (g/ml)。2.發(fā)酵培養(yǎng):將菌株Smal-007加入培養(yǎng)基中，液體深層發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵通氣量15L/m,攪拌轉(zhuǎn)速200r/min，初始pH值7.0，發(fā)酵溫度為30°C，發(fā)酵時(shí)間36h，菌液OD值14。3.菌劑分裝運(yùn)輸:菌劑用塑料包裝桶或包裝瓶分裝，運(yùn)輸中菌劑溫度不應(yīng)超過35。。。4.菌劑林間噴灑:(1)飛機(jī)噴灑:原菌液噴霧，每畝噴霧400克。每架次載藥量200千克，噴灑500畝。(2)機(jī)動(dòng)噴霧器噴霧:原菌液噴霧，每畝噴霧500-1000克。重點(diǎn)噴灑枯死木松樹樹干及枯死木附近松樹樹干及梢頭。
權(quán)利要求
1.一種用于防治松材線蟲病的細(xì)菌菌株，其特征在于，所述菌株的保藏編號(hào)為CGMCCN0.6990。
2.如權(quán)利要求1所述的菌株在防治松材線蟲病中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，包括以下具體步驟:(1)配制培養(yǎng)基:葡萄糖2%(g/ml)，蔗糖2% (g/ml)，蛋白胨酵母膏復(fù)合物3% (g/ml), (2)液體深層發(fā)酵培養(yǎng):將所述菌株加入所述培養(yǎng)基中，發(fā)酵通氣量15L/m，攪拌轉(zhuǎn)速200r/min,初始pH值7.0，發(fā)酵溫度為30°C，發(fā)酵時(shí)間36h，測(cè)得菌液OD值為14， (3)將發(fā)酵后的菌液噴灑于林間。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其中，所述噴灑方法為:飛機(jī)噴灑和機(jī)動(dòng)噴霧器噴霧。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中噴灑的地方為:枯死木松樹樹干、枯死木附近松樹樹干和梢頭。
6.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述飛機(jī)噴灑的方法具體為:采用菌液噴霧，每畝噴 霧400克。
7.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述機(jī)動(dòng)噴霧器噴霧的方法具體為:采用菌液噴霧，每畝噴霧500-1000克。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于防治松材線蟲病的細(xì)菌菌株Smal-007及其應(yīng)用，所述菌株為嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌，保藏編號(hào)為CGMCC No.6990。菌株的16s rDNA堿基序列如SEQ ID No1所示。本發(fā)明還涉及該菌株的發(fā)酵培養(yǎng)和林間應(yīng)用，具體步驟包括(1)發(fā)酵培養(yǎng)基配方；(2)發(fā)酵方法(包括發(fā)酵參數(shù)和技術(shù))；(3)菌劑分裝和運(yùn)輸技術(shù)；(4)菌劑林間噴灑技術(shù)(林間防治技術(shù))。
文檔編號(hào)A01N63/02GK103205385SQ20131013904
公開日2013年7月17日 申請(qǐng)日期2013年4月22日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月22日
發(fā)明者韓正敏, 曾腓力, 賁愛玲, 劉侃誠, 孫京天, 糜文琪 申請(qǐng)人:南京林業(yè)大學(xué)