專利名稱：一種海蔥組織培養的方法
技術領域：
本發明涉及植物組織培養技術、植物莖尖培養技術，主要是一種海蔥組織培養的方法。
背景技術：
海蔥(Ornithogalum caudatum),別名虎眼萬年青,俗稱玻璃球花,葫蘆蘭等,為百合科、虎眼萬年青屬植物，多年生球根草本花卉，原產非洲南部，喜陽光，夏季忌陽光直射，亦半陰耐寒，好濕潤環境，冬季重霜后葉叢仍保持綠色。海蔥未開花時株高約為30 40cm，開花時花莖可達50 60cm高，一般每年4月中旬至5月上旬開花，錐形花序，花有白色、橙色和重瓣種，幽雅、樸素，花期長，是布置自然式園林和巖石園和優良材料，也適用于切花和盆栽觀賞。同時，海蔥也有一定的要用價值，將其葉子和下面的鱗莖切片或塊泡酒，可舒筋活血，用于內服外敷，對于跌打扭傷、肌肉過度疲勞有良好的恢復作用。目前，海蔥的繁殖主要通過種子及分球繁殖方式進行，但是種球一般每年8 9月才能夠作為種球用來繁殖，而實生苗需要培育3 4年才能開花，種球、種子生產受季節、年限限制嚴重，同時每年繁殖數量有限，不利用海蔥的推廣。同時，由于海蔥種球長期處于地下，容易受到各種病毒的感染，若利用種球進行無性繁殖，一旦種球感染病毒，便很難通過化學藥物根除，更嚴重降低海蔥的觀賞價值。植物組織培養技術被認為是目前最高效的植物種苗快繁技術手段，目前，國內外尚未見到利用植物組培技術對海蔥進行快速繁殖的文獻報道。
發明內容
本發明的目的在于克服現有技術存在的不足，而提供一種蔥組織培養的方法，解決建立良好的海蔥組培再生體系，為海蔥種苗生產、新品種創制及品質遺傳改良等做好技術支持。本發明的目的是通過如下技術方案來完成的。這種海蔥組織培養的方法，該方法包括以下幾個步驟:1)、外植體的選取及處理:選取海蔥地下鱗莖及尚未開放的花穗作為起始材料，將鱗莖剝去外部I 2層鱗片，花穗切成Icm長度，作為組培用外植體；2)、初代培養:在超凈工作臺上，將經過表面消毒的外植體在轉移至無菌接種盤中，用無菌濾紙吸去外植體表面水分，接種于初代培養基MS+6-BA0.1 0.5mg/L+NAA0.05 0.2mg/L中進行初代培養，培養溫度25±2°C，光照時間為12 14h/d，光照強度為 45 60 μ.mo I.m 2.s 1 ;3)不定芽誘導:初代培養獲得的干凈、成活材料在無菌工作臺上接種于不定芽誘導培養基MS+6-BA2.0 4.0mg/L+NAA0.05 0.2mg/L中，進行不定芽的誘導，培養溫度25±2°C,光照時間為12 14h/d,光照強度為45 60 μ.mo I.τα2.s_1 ；4)不定芽增殖:不定芽增殖:在無菌工作臺上，將不定芽誘導培養獲得的2 3cm高的不定芽2 3個一叢，利用無菌的解剖刀將不定芽基部輕輕造成一些傷口，接種于不定芽增殖培養基中進行增殖培養，不定芽增殖培養基為MS+6-BA0.5 3.0mg/L+NAA0.05 0.2mg/L,培養溫度25±2°C,光照時間為12 14h/d,光照強度為45 60 μ.moI.πΓ2 *s_1 ；5)、不定芽生根誘導:從基部將高生長到3 5cm的叢生不定芽分開成單個不定芽，接入生根培養基中進行不定根的誘導，生根培養基為MS+IBA0 0.5mg/L或1/2MS+IBA0 0.5mg/L,培養溫度25±2°C，光照時間為12 14h/d，光照強度為45 60 μ.mo I.m 2.s 1 ；6)、組培苗馴化及移栽:不定芽基部長出3 5條I 2cm的不定根后，將組培移至溫室，散射光培養5d后打開瓶蓋，再培養I 2d，完成組培苗移栽前馴化，然后將組培苗從培養瓶取出，洗凈組培苗表面瓊脂，栽入基質中，保濕90 %以上培養15d，然后在溫室中正常培養。初代培養、不定芽誘導及增殖、不定芽生根誘導基本培養基均為MS培養基，蔗糖用量為20 40g/L，凝固劑為瓊脂粉，用量為8 9g/L，培養基pH分裝前調整為5.7 5.8。本發明有益的效果是:1、通過組織培養技術進行海蔥種苗快繁，生產不受地區、季節、氣候及母株生長年限的限制，便于工廠化育苗，可根據訂單進行生產，生產時間及規模可控，為海蔥的推廣應用提供充足的優質種苗保障。2、繁殖系數達到3 5，生根率100%，移栽成活率100%，達到花卉種苗工廠化育苗生產的要求，目前尚未見關于海蔥組織培養的文獻報道。3、海蔥不定芽誘導采用直接器官發生，無愈組織傷誘導及愈傷分化誘導環節，減少植物組培過程中后代變異的發生，后代種苗遺傳背景一致，最大限度保持母本的優良性狀。4、有利于結實率低、甚至不結實的優良海蔥品種的推廣。5、建立良好的組培快繁體系，為今后利用植物生物技術對海蔥進行新品種培育、遺傳改良等研究工作奠定基礎。
具體實施例方式下面通過具體實施方式
對本發明作進一步闡述，實施例將幫助更好地理解本發明，但本發明并不僅僅局限于下述實施例。本發明所述的一種蔥組織培養的方法，步驟如下:1、培養基及培養條件:初代培養、不定芽誘導及增殖、不定芽生根誘導基本培養基均為MS培養基，蔗糖用量為20 40g/L，凝固劑為瓊脂粉，用量為8 9g/L，培養基pH分裝前調整為5.7 5.8 ;初代培養基為MS+6-BA0.1 0.5mg/L+NAA0.05 0.2mg/L ;不定芽誘導培養基為MS+6-BA2.0 4.0mg/L+NAA0.05 0.2mg/L ;不定芽增殖培養基為 MS+6-BA0.5 3.0mg/L+NAA0.05 0.2mg/L ;生根培養基為 MS+IBA0 0.5mg/L 或1/2MS+IBA0 0.5mg/L ;初代培養、不定芽誘導及增殖、不定芽生根培養條件為，培養溫度25±2°C,光照時間為12 14h/d,光照強度為45 60 μ.mo I.πΓ2.s'2、外植體的處理與消毒:選取海蔥地下鱗莖及尚未開放的花穗作為起始材料，將鱗莖剝去外部I 2層鱗片，花穗切成Icm左右長度，處理好的外植體用洗潔精溶液清洗20min，期間不斷輕輕攪拌，然后流水沖洗經洗潔精清洗的外植體材料20 30min，在已經過消毒的超凈工作臺上將經流水清洗過的外植體轉移至無菌錐形瓶中，用75%酒精浸泡60s，期間不斷輕輕晃動錐形瓶，去除附在外植體表面氣泡，倒出75%酒精，再用0.l%HgCl2溶液浸泡材料8 lOmin，或用有效氯濃度為l%NaC10溶液浸泡材料10 15min，浸泡期間不斷輕輕晃動錐形瓶，去除附在外植體表面氣泡，倒出0.1ffigCl2溶液或l%NaC10溶液，用無菌水清洗經過消毒處理的外植體4 5次，用無菌水浸泡、備用。3、初代培養:在超凈工作臺上，將經過表面消毒的外植體在轉移至無菌接種盤中，用無菌濾紙吸去外植體表面水分，接種于初代培養基MS+6-BA0.1 0.5mg/L+NAA0.05
0.2mg/L中進行初代培養，培養溫度25±2°C，光照時間為12 14h/d，光照強度為45 60 μ.mo I^m2-S104、不定芽誘導:初代培養獲得的干凈、成活材料在無菌工作臺上接種于不定芽誘導培養基MS+6-BA2.0 4.0mg/L+NAA0.05 0.2mg/L中，進行不定芽的誘導，培養溫度25±2°C,光照時間為12 14h/d,光照強度為45 60 μ.mo I.πΓ2.s'5、不定芽增殖:在無菌工作臺上，將不定芽誘導培養獲得的2 3cm高的不定芽2 3個一叢，利用無菌的解剖刀將不定芽基部輕輕造成一些傷口，接種于不定芽增殖培養基中進行增殖培養，不定芽增殖培養基為MS+6-BA0.5 3.0mg/L+NAA0.05 0.2mg/L,培養溫度25±2°C,光照時間為12 14h/d,光照強度為45 60 μ.mo I.m_2.s'6、不定芽生根誘導:從基部將高生長到3 5cm的叢生不定芽分開成單個不定芽，接入生根培養基中進行不定根的誘導，生根培養基為MS+IBA0 0.5mg/L或1/2MS+IBA0
0.5mg/L,培養溫度25±2°C,光照時間為12 14h/d,光照強度為45 60 μ.mol.1rT2-S-1,生根率100%。7、組培苗馴化及移栽:不定芽基部長出3 5條I 2cm的不定根后，將組培移至溫室，散射光培養5d后打開瓶蓋，再培養I 2d，完成組培苗移栽前馴化，然后將組培苗從培養瓶取出，洗凈組培苗表面瓊脂，栽入基質中，保濕90%以上培養15d，然后在溫室中正常培養，移栽成活率100%。最后，應當指出，以上 實例僅是本發明較有代表性的例子。顯然，本發明的技術方案并不限于上述實例，還可以有許多變形，本領域的普通技術人員能從本發明公開的內容直接導出或聯想到的所有變形，均應認為是本發明的保護范圍。
權利要求
1.一種海蔥組織培養的方法，其特征在于:該方法包括以下幾個步驟: 1)、外植體的選取及處理:選取海蔥地下鱗莖及尚未開放的花穗作為起始材料，將鱗莖剝去外部I 2層鱗片，花穗切成Icm長度，作為組培用外植體； 2)、初代培養:在超凈工作臺上，將經過表面消毒的外植體在轉移至無菌接種盤中，用無菌濾紙吸去外植體表面水分，接種于初代培養基MS+6-BA0.1 0.5mg/L+NAA0.05 0.2mg/L中進行初代培養，培養溫度25±2°C，光照時間為12 14h/d，光照強度為45 60 μ.mo I.m 2.s 1 ； 3)不定芽誘導:初代培養獲得的干凈、成活材料在無菌工作臺上接種于不定芽誘導培養基MS+6-BA2.0 4.0mg/L+NAA0.05 0.2mg/L中，進行不定芽的誘導，培養溫度25±2°C,光照時間為12 14h/d,光照強度為45 60 μ.mo I.πΓ2.s_1 ； 4)不定芽增殖:不定芽增殖:在無菌工作臺上，將不定芽誘導培養獲得的2 3cm高的不定芽2 3個一叢，利用無菌的解剖刀將不定芽基部輕輕造成一些傷口，接種于不定芽增殖培養基中進行增殖培養，不定芽增殖培養基為MS+6-BA0.5 3.0mg/L+NAA0.05 0.2mg/L,培養溫度25±2°C,光照時間為12 14h/d,光照強度為45 60 μ.mo I.m 2.s 1 ； 5)、不定芽生根誘導:從基部將高生長到3 5cm的叢生不定芽分開成單個不定芽,接入生根培養基中進行不定根的誘導，生根培養基為MS+IBA0 0.5mg/L或1/2MS+IBA0 0.5mg/L,培養溫度25±2°C,光照時間為12 14h/d,光照強度為45 60 μ.moI.πΓ2 *s_1 ； 6)、組培苗馴化及移栽:不定芽基部長出3 5條I 2cm的不定根后，將組培移至溫室，散射光培養5d后打開瓶蓋，再培養I 2d，完成組培苗移栽前馴化，然后將組培苗從培養瓶取出，洗凈組培苗表面瓊脂，栽入基質中，保濕90%以上培養15d，然后在溫室中正常培養。
2.根據權利要求1所述的海蔥組織培養的方法，其特征在于:初代培養、不定芽誘導及增殖、不定芽生根誘導 基本培養基均為MS培養基，蔗糖用量為20 40g/L，凝固劑為瓊脂粉，用量為8 9g/L，培養基pH分裝前調整為5.7 5.8。
全文摘要
本發明涉及一種海蔥組織培養的方法，包括如下步驟培養基的配制、外植體的選取與消毒、初代培養、不定芽誘導、不定芽增值、不定芽生根誘導、組培苗馴化及移栽。基本培養基選用MS培養基，蔗糖用量為20～40g/L，凝固劑為瓊脂粉，用量為8～9g/L，培養基pH分裝前調整為5.7～5.8；初代培養基為MS+6-BA0.1～0.5mg/L+NAA0.05～0.2mg/L；不定芽誘導培養基為MS+6-BA2.0～4.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L；不定芽增殖培養基為MS+6-BA0.5～3.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L；生根培養基為MS+IBA0～0.5mg/L或1/2MS+IBA0～0.5mg/L。本發明的優點建立的海蔥組培快繁技術體系增殖系數3～5，生根率100％，移栽成活率100％，組培苗健壯均勻，適合優良海蔥種苗脫毒及規模化生產。
文檔編號A01H4/00GK103141388SQ20131007405
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月8日 優先權日2013年3月8日
發明者汪一婷, 陳志 , 牟豪杰, 呂永平, 周迪江, 陳劍平 申請人:浙江省農業科學院