專利名稱：以海藻糖為原料的皮膚保存液及制備方法和皮膚保存方法
技術領域：
本發明涉及一種以海藻糖為原料的人體皮膚保存液及其制備方法。
背景技術：
目前國內多采用低溫冷凍保存皮膚，其主要缺陷在于，復溫過程中生產的重結晶對皮膚產生有害的冰晶損傷。研究表明只有復溫速度達到3. 3^17°C /s時，才能避免冰晶損傷，如此快的復溫速度在臨床應用時難以達到。在深低溫冷凍保存皮膚時常會加入二甲基亞砜作為細胞的保護劑。因其抗凍的作用，用于細胞凍存的保護，二甲基亞砜能夠降低細胞 冰點，減少冰晶的形成，減輕自由基對細胞損害，改變生物膜對電解質、藥物、毒物和代謝的通透性。但有研究表明二甲基亞砜存在一定的毒性作用，與蛋白質疏水集團發生作用，導致蛋白質變性，具有血管毒性和肝腎毒性。冷凍皮膚用于臨床復溫時，可能對皮膚造成污染。專利號為89105183. X的專利公開了一種用蜂蜜保存皮膚的方法，對異體皮膚用蜂蜜浸泡進行保存。利用蜂蜜作為保存介質。可以較長時間保存皮膚。方法是把異體皮膚進行消毒、浸泡之后放入盛有蜂蜜的容器內保存。蜂蜜中含有大量糖，二十余種氨基酸，十余種酶、維生素、激素、抗菌素、高效醇、樹脂礦物質等，具有殺菌，抗菌特性。用蜂蜜保存皮膚方法的處理過程比較簡單，但蜂蜜因蜂種、蜂源、環境之不同，其化學組成有很大差異，質量難以保證，在實踐中較難把握。
發明內容
本發明的目的之一在于提供一種保存離體皮膚活力明顯高于傳統皮膚保存的以海藻糖為原料的皮膚保存液。本發明的另一目的在于提供一種制備工藝簡單、操作方法簡便、運輸方便，取材簡單的所述以海藻糖為原料的皮膚保存液保存液制備方法。本發明的另一目的在于提供一種保存離體皮膚活力、時間較長、安全可靠的皮膚保存方法。本發明所述以海藻糖為原料的皮膚保存液，含海藻糖45 165g/L，含小牛血清
4.5 16. 5g/L。本發明所述以海藻糖為原料的皮膚保存液的制備方法，包括以下步驟(1)取海藻糖干粉，與蒸餾水混合攪拌并使之溶解，配制成為濃度為45-165g/L海藻糖溶液；
(2)加入小牛血清，攪拌均勻；
(3)將攪拌均勻的溶液調節PH值至7.0-7. 2。本發明所述以海藻糖為原料的皮膚保存液的制備方法中蒸餾水溫度在250C ±2°C時，加入海藻糖干粉并進行攪拌，并使其充分溶解。本發明所述皮膚保存方法為把新鮮同種異體皮膚經無菌生理鹽水清洗2-5次，甩干后放入已配制好海藻糖保存液中浸泡8小時以上，用量以浸沒保存物為準。本發明取材容易，操作過程相對簡單，可適應長途運輸，保存時間較長；減少缺血對離體皮膚造成的各種損傷，使離體皮膚保持有效活力，以便完成運輸，臨床手術。使異體皮膚在移植手術后迅速恢復功能。
具體實施例方式海藻糖是一種安全，可靠的天然糖類，自身性質非常穩定，并對多種生物活性物質有神奇的保護作用。科學家們發現，沙漠植物卷葉柏在干旱近枯死遇水后卻又可以奇跡復活；高山植物復活草能夠耐過冰雪嚴寒；一些昆蟲在高寒，高溫和干燥失水等條件下不凍結，不干死，就是他們體內海藻糖創造的生命奇跡。海藻糖對生物體具有神奇保護作用，是因為海藻糖在高溫、高寒、高滲透壓及干燥失水等惡劣條件下在細胞表面能形成獨特的保護膜，有效地保護蛋白質分子不變性失活，從而維持生命體的生命過程和生產特征。而自然界中如蔗糖、葡萄糖等其他糖類均不具有這一功能。小牛血清中含有蛋白質、脂肪、糖、無機鹽、維生素等營養成分，對離體缺血的皮膚細胞起到某種保護作用。摘要海藻糖對生物體具有神奇的保護作用，是因為海藻糖在高溫、高寒、高滲透壓及干燥失水等惡劣環境下在細胞表面形成獨特的保護膜，有效地保護蛋白質分子不變性失活。從而維持對皮膚的生物特 征保護。皮膚保存的目的是減少缺血對離體皮膚造成的各種損傷，以便完成貯存，運輸期間保持有效活力。本發明提供一種不同以往技術的貯存方法，利用海藻糖溶液作為保存介質，可在普通冰箱(rio°c)較長時間保存皮膚，方法是把同種異體皮膚經無菌生理鹽水清洗后，放入海藻糖溶液浸泡，經鈷-60 Y射線輻照滅菌即可。以下結合實施例對本發明進行詳細說明。實施例1 :
本發明方法包括以下步驟海藻糖溶液的配置取干凈的容器，導入IOOOml蒸餾水(25°C )，緩緩加入45g海藻糖干粉，邊加邊用玻璃棒攪拌,使干粉完全溶解,加適量NaHC03，調節PH值至7. O過濾除菌。(2)新買的小牛血清存儲在_20°C冰箱中，使用前至于4°C冰箱解凍10小時左右，然后至于56°C恒溫水浴鍋中滅活補體30分鐘，水浴中不斷搖動血清瓶使受熱均勻，過濾除菌。(3)在常溫下(25°C)加入小牛血清4. 5g制好后放入保存物(皮膚)加蓋密封，即配即用讓其自由冷卻約2小時。放入4°C冰箱保存
(4)容器內的保存液以浸沒皮膚為準。實施例2:
取干凈的容器，導入IOOOml蒸餾水(26°C)，緩緩加入IOOg海藻糖干粉，邊加便用玻璃棒攪拌，使干粉完全溶解，加適量NaHC03，調節PH值至7.1過濾除菌。(2)新買的小牛血清存儲在_20°C冰箱中，使用前至于4°C冰箱解凍10小時左右，然后至于56°C恒溫水浴鍋中滅活補體30分鐘，水浴中不斷搖動血清瓶使受熱均勻，過濾除菌。(3)在常溫下(24°C)加入小牛血清IOg制好后放入保存物(皮膚)加蓋密封，即配即用讓其自由冷卻約2小時。放入4°C冰箱保存
(4)容器內的保存液以浸沒皮膚為準。實施例3 取干凈的容器，導入IOOOml蒸餾水(25°C)，緩緩加入165g海藻糖干粉，邊加便用玻璃棒攪拌，使干粉完全溶解，加適量NaHC03，調節PH值至7. 2過濾除菌。(2)新買的小牛血清存儲在-2(T-30°C冰箱中，使用前至于4±2°C冰箱解凍l(Tll小時，然后至于58±2°C恒溫水浴鍋中滅活補體30分鐘，水浴中不斷搖動血清瓶使受熱均勻，過濾除菌。(3)在常溫下(25°C)加入小牛血清16. 5g配制好后放入保存物(皮膚)加蓋密封，即配即用讓其自由冷卻約2 3小時。放入4±2°C冰箱保存
(4)容器內的保存液以浸沒皮膚為準。同種異體皮膚選擇標準
(1)取皮取健康捐獻者的新鮮尸體皮，用手動取皮刀取厚度為O.4mm的斷層皮片
(2)年齡18-50周歲
(3)取材時間常溫下不超過8小時，4°C以下不超過24小時。(4)無結核、肝炎、梅毒、艾滋病或風濕病史。(5)無嚴重創傷，主要包括大面積燒傷，多發性刺傷。(6)血清檢測HIV、HbsAg, HCV和梅毒血清檢測反映陰性。以下提供采用MTT皮膚細胞活性的檢測方法對傳統方法與本發明采用方法進行比對。MTT測定時設置陽性對照(新鮮皮膚)和陰性對照。應用MTT法檢測皮膚活性(新鮮皮膚值為100)
權利要求
1.一種以海藻糖為原料的皮膚保存液，其特征在于含海藻糖45 165g/L，含小牛血清4.5 16. 5g/L。
2.如權利要求1所述的皮膚保存液的制備方法，其特征在于 (1)取海藻糖干粉，與蒸餾水混合攪拌并使之溶解，配制成為濃度為45-165g/L海藻糖溶液； (2)加入小牛血清，攪拌均勻； (3)將攪拌均勻的溶液調節PH值至7.0-7. 2。
3.如權利要求2所述的皮膚保存液的制備方法，其特征在于蒸餾水溫度在250C ±2°C時，加入海藻糖干粉并進行攪拌，并使其充分溶解。
4.一種皮膚保存方法，其特征在于把新鮮同種異體皮膚經無菌生理鹽水清洗2-5次，甩干后放入已配制好海藻糖保存液中浸泡8小時以上，用量以浸沒保存物為準。
全文摘要
本發明公開了一種以海藻糖為原料的皮膚保存液，含海藻糖45~165g/L，含小牛血清4.5~16.5g/L。所述皮膚保存液的制備方法，包括以下步驟取海藻糖干粉，與蒸餾水混合攪拌并使之溶解，配制成為濃度為45-165g/L海藻糖溶液；加入小牛血清，攪拌均勻；將攪拌均勻的溶液調節pH值至7.0-7.2。本發明所述皮膚保存方法為把新鮮同種異體皮膚經無菌生理鹽水清洗2-5次，甩干后放入已配制好海藻糖保存液中浸泡8小時以上。本發明取材容易，操作過程相對簡單，可適應長途運輸，保存時間較長；減少缺血對離體皮膚造成的各種損傷，使離體皮膚保持有效活力，以便完成運輸，臨床手術。使異體皮膚在移植手術后迅速恢復功能。
文檔編號A01N1/02GK103004752SQ20131001881
公開日2013年4月3日 申請日期2013年1月18日 優先權日2013年1月18日
發明者雷良偉, 曾愛林, 韓新, 雷金, 談慧 申請人:江西省科星生物工程有限公司