專利名稱：一種提高長春花組培苗移栽成活率的方法
技術領域：
本發明涉及一種長春花組培苗移栽方法，尤其是涉及一種提高長春花組培苗移栽成活率的方法。
背景技術：
LHGeitlmreinthus roseus L.)屬夾竹桃科一年生草本植物,可產生100多種具有很高藥用價值的抗癌職類卩引哚生物堿(Terpenoid Indole Alkaloids, TIAs)。如長春喊(Vinblastine)、長春新喊(Vincristine)、阿嗎喊(Ajmalicine)、利血平(Reserpine)、文多靈(Vindoline)、長春質堿(Catharanthine)。長春堿臨床上主要用于治療何杰金氏病及絨毛膜癌，對乳腺癌的治療效果也非常好。因此，長春花被認為是一種具有很高開發應用價值的藥用植物。 目前，長春花抗癌生物堿主要從長春花植株的地上部分提取，但這些藥物在長春花中的含量極其微少(僅為百萬分之幾至十萬分之幾)，使長春花生物堿遠遠不能滿足市場需求，導致長春花藥用成分的供需矛盾相當嚴重(每年只能生產12 kg長春堿和I kg長春新堿)，使其價格極為昂貴(高達6000美元/克)。長春花快速繁殖和轉基因均是以長春花組織培養為基礎的，通過組織培養技術可獲得大量長春花無菌試管苗。現有的長春花組培苗移栽方法，通常是當植株長到一定程度的時候，將用于封口廣口培養瓶的繩子解開，3 4天后，使廣口培養瓶敞口，在光照培養箱中放置數天之后，直接移栽到花盆中。但長春花試管苗移栽到土壤中后，容易感染細菌，導致根部腐爛死亡，長春花試管苗的移栽成活率極低，僅僅在20%到30%之間，其主要原因是長春花再生植株的根系在清洗過程中不能徹底除去吸附在根系上的培養基，移栽到土壤后，一旦細菌和真菌接觸到了植物根系上的培養基，培養基中的營養物質就導致了細菌和真菌的大量繁殖與生長，最終導致植株的根系出現腐爛問題，不能充分吸收營養，而使植株死亡。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種通過水培培養方式提高長春花組培苗移栽成活率的方法，該方法能增強長春花組培苗的抗菌能力，顯著提高長春花組培苗移栽成活率。本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為:一種提高長春花組培苗移栽成活率的方法，包括以下步驟:
(1)煉苗:選取生長健壯正常的長春花無菌試管苗，移栽前，將培養瓶瓶蓋打開，向培養瓶中加入適量蒸懼水浸沒長春花根部，然后置于光照培養箱中培養3-4d完成煉苗,培養條件為1500-2500 Lx、23-27°C、每天光照周期為光照8-12 h，黑暗12-16 h ；
(2)水培:將經步驟(I)煉苗的長春花無菌試管苗用鑷子從培養瓶中小心取出，將根系上的培養基用流水沖洗干凈，放入盛有水培營養液的試管或培養皿中，置光照培養箱中繼續煉苗，培養2-7d后，從長春花植株根部長出新的水生根，完成水培，其中水培營養液隔天換一次；
(3)移栽:將長出新根的長春花水培植株移栽到含有蛭石、珍珠巖和泥炭的移栽基質中，即完成長春花組培苗的移栽。所述的水培營養液為蒸餾水或者濃度100-200 mg/L的羧芐青霉素水溶液。所述的移栽基質中蛭石、珍珠巖和泥炭的重量比為2:1:6。步驟(I)中所述的光照培養箱的培養條件為2000 Lx、25°C、每天光照周期為光照8 h，黑暗 16 h0與現有技術相比，本發明的優點在于:本發明首次公開了一種提高長春花組培苗移栽成活率的方法，該方法通過水培培養方式提高長春花組培苗移栽成活率，使長春花無菌試管苗經過一段時間的水培馴化以后，長出新的水生根，再將水培長春花再生植株移栽到培養基質中，增強長春花組培苗的抗菌能力，顯著提高長春花組培苗的移栽成活率，使其移栽成活率達80%以上，該方法操作簡單方便，費用低，適于批量處理和工廠化生產，具有很好的經濟效益和社會效益。本發明所用水培營養液為蒸餾水或添加羧芐青霉素的蒸餾水，而不用富含營養的培養基，目的是防止培養基中的營養物質招致細菌或真菌繁殖生長，而使試管苗污染死亡。放入蒸餾水中則可使根系中的一些細菌或真菌因缺乏營養物質而死亡，而對于長春花沒有很大的影響，這樣，能大大提高移栽的成活率。
具體實施例方式以下結合實施例對本發明作進一步詳細描述。
實施例1
本發明一種提高長春花組培苗移栽成活率的方法，具體包括以下步驟:
(1)煉苗:選取生長健壯正常的長春花無菌試管苗，移栽前，將培養瓶瓶蓋打開，向培養瓶中加入適量蒸餾水浸沒根部(以恰能浸沒根部為宜)，繼續在光照培養箱中培養3-4d，培養條件為2000 Lx、25°C、每天光照周期為光照8 h，黑暗16h ；
(2)水培:將煉苗的長春花無菌試管苗用鑷子從培養瓶中小心取出，用流水將根系上的培養基沖洗干凈，放入盛有水培營養液的試管或培養皿中，置光照培養箱中繼續煉苗。水培營養液以浸沒根為宜，注意隔天換水，一經發現根部長霉應及時用蒸餾水沖洗。培養2-7d后，從長春花植株根部長出新的水生根；
(3)移栽:將長出新根的長春花水培植株移栽到含有蛭石、珍珠巖、泥炭的移栽基質中，即完成長春花組培苗的移栽。在此具體實施例中,水培營養液為蒸餾水或者濃度100-200 mg/L的羧芐青霉素水溶液。移栽基質中蛭石、珍珠巖和泥炭的重量比為2:1:6。在水培煉苗的30株長春花再生植株中，一共有26株成活，成活率為86.67%。相比于以往的煉苗方法，這可以說是一種突破。以往的煉苗方法僅僅是當植株長到一定程度的時候，將用于封口廣口培養瓶的繩子解開，3-4天后，使廣口培養瓶敞口，在光照培養箱中放置數天之后，直接移栽到花盆中。這種舊的方法，長春花再生植株的成活率僅僅在20%到30%之間。實施例2同實施例1，其區別在于:光照培養箱的培養條件為1500 Lx、23°C、每天光照周期為光照12h，黑暗12h。在水培煉苗的30株長春花再生植株中，一共有25株成活，移栽成活率為83.33%。實施例3
同實施例1，其區別在于:光照培養箱的培養條件為2500 Lx、27°C、每天光照周期為光照10h，黑暗14h。在水培煉苗的30株長春花再生植株中，一共有25株成活，移栽成活率為83.33%。當然，上述說明并非對本發明的限制，本發明也并不限于上述舉例。本技術領域的普通技術人員在本發明的實質范圍內，作出的變化、改型、添加或替換，也應屬于本發明的保 護范圍。
權利要求
1.一種提高長春花組培苗移栽成活率的方法，其特征在于包括以下步驟:(1)煉苗:選取生長健壯正常的長春花無菌試管苗，移栽前，將培養瓶瓶蓋打開，向培養瓶中加入適量蒸懼水浸沒長春花根部，然后置于光照培養箱中培養3-4d完成煉苗,培養條件為1500-2500 Lx、23-27°C、每天光照周期為光照8-12 h，黑暗12-16 h ；(2)水培:將經步驟(I)煉苗的長春花無菌試管苗用鑷子從培養瓶中小心取出，將根系上的培養基用流水沖洗干凈，放入盛有水培營養液的試管或培養皿中，置光照培養箱中繼續煉苗，培養2-7d后，從長春花植株根部長出新的水生根，完成水培，其中水培營養液隔天換一次；(3)移栽:將長出新根的長春花水培植株移栽到含有蛭石、珍珠巖和泥炭的移栽基質中，即完成長春花組培苗的移栽。
2.根據權利要求1所述的一種提高長春花組培苗移栽成活率的方法，其特征在于:所述的水培營養液為蒸餾水或者濃度100-200 mg/L的羧芐青霉素水溶液。
3.根據權利要求1或2所述的一種提高長春花組培苗移栽成活率的方法，其特征在于:所述的移栽基質中蛭石、 珍珠巖和泥炭的重量比為2:1:6。
4.根據權利要求3所述的一種提高長春花組培苗移栽成活率的方法，其特征在于:步驟(I)中所述的光照培養箱的培養條件為2000 Lx、25°C、每天光照周期為光照8 h，黑暗16h0
全文摘要
本發明公開了一種提高長春花組培苗移栽成活率的方法，特點是包括以下步驟(1)選取生長健壯正常的長春花無菌試管苗，將培養瓶瓶蓋打開，向培養瓶中加入適量蒸餾水浸沒長春花根部，然后置于光照培養箱中培養3-4d完成煉苗；(2)將長春花無菌試管苗用鑷子從培養瓶中小心取出，將根系上的培養基用流水沖洗干凈，放入盛有水培營養液的試管或培養皿中，置光照培養箱中繼續煉苗，培養2-7d后，從長春花植株根部長出新的水生根，完成水培；(3)將長出新根的長春花水培植株移栽到含有蛭石、珍珠巖和泥炭的移栽基質中，即完成移栽，優點是增強長春花組培苗的抗菌能力，顯著提高長春花組培苗移栽成活率。
文檔編號A01G31/00GK103069981SQ201310008320
公開日2013年5月1日 申請日期2013年1月10日 優先權日2013年1月10日
發明者龔一富, 潘益芳, 李君 , 王何瑜, 袁泉, 盧鵬 申請人:寧波大學