專利名稱：一種黃顙魚在低滲溶液中的人工授精方法
技術領域：
本發明屬水產養殖技術領域，涉及黃顙魚的人工繁殖關鍵技術，尤其是涉及一種黃顙魚在低滲溶液中的人工授精方法。
背景技術：
養殖魚類的種苗生產一般是通過自然繁殖和人工繁殖兩種途徑獲得，而大規模生產主要依靠人工繁殖實現；在人工繁殖生產過程中，受精率是生產的關鍵技術指標，而影響受精率的關鍵因子，除卵子和精子的質量外，人工授精方法也是影響受精率的穩定性一個重要因素；目前常規的人工授精方法，無論是濕法授精，或是干法授精，卵子和精子的受精 過程是以水媒介同步激活后完成，對于強粘性卵類型的魚類如黃顙魚，人工授精過程中卵遇水后極易粘成團或成塊，不僅影響人工授精的操作，而且還影響受精率的穩定性，降低孵化率；
目前黃顙魚種苗繁育也是通過池塘自然產卵或人工繁殖方式獲得，盡管自然產卵的生產方式成本較低，但由于自然產卵受氣候、水溫等因素的影響，產卵的不同步和不穩定，其生產規模都難以滿足大規模生產的要求；而黃顙魚人工繁殖過程，雌、雄魚發情不同步，常規的人工授精方法因需同步采卵和采精，采卵過程易擠傷內臟造成雌魚產后死亡率高，雄魚需殺雄取精，通過研磨或剪碎精巢取得精子，易受帶入的血塊等組織的污染，精子保存時間短，雄魚浪費大，而且受精過程時間控制嚴格，遇水后卵易成團，影響人工授精的操作及孵化率；因此，常規的黃顙魚人工授精方法，授精條件的可控性較差，生產操作難度較高，影響規模化生產的穩定性。
發明內容
本發明的目的是提供一種克服上述現有技術缺點的，解決黃顙魚在人工繁殖過程中受精率不穩定狀況的，減少人工授精過程的干擾因子的，同時具有操作更簡捷、更穩定、生產效率更高的一種黃顙魚在低滲溶液中的人工授精方法；
為實現上述目的，本發明所采用的技術方案為該種黃顙魚在低滲溶液中的人工授精方法，包括以下步驟
(1)經注射激素催情發情的雄魚，在下頜靠近心臟處剪斷動脈處放血l-3min后取出精巢，用精子保存液沖洗1-3次，將精巢放入80-120目的篩絹中擠出精液，每尾雄魚收集的精液用10-50ml精子保存液稀釋4-8°C保存待用；
(2)經注射激素催情發情的雌魚，采用兩指擠卵方式采集卵子，即一只手抓住黃顙魚頭部，另一只手虎口輕扣背鰭硬刺后基部，大拇指和食指輕扣腹部，沿生殖孔方向輕輕滑動擠壓，將卵擠入干燥碗中或盆中，每批魚卵的采集時間控制20min之內；
(3)取300-500ml左右的低滲溶液，加入2_4ml經精子保存液稀釋的精液，攪拌3 5s預激活精子，然后將混合液倒入到500-1000g的卵子中，攪拌20-30s左右，即完成人工授精過程；所述的一種黃顙魚在低滲溶液中的人工授精方法，其特征在于所述黃顙魚精子保存液配方為檸檬酸三鈉7. 5g，葡萄糖29g，氯化鉀O. 2g，碳酸氫鈉2. Ig,磷酸二氫鉀O. 06g,抗壞血酸O. lg, ATP O. 05g,防腐劑O. 3g和蒸懼水IOOOml,試劑要求等級為分析純或生化級，配制的溶液4°C下保存；
所述的一種黃顙魚在低滲溶液中的人工授精方法，其特征在于低滲溶液的濃度為
O.2% O. 4%的NaCl水溶液，或是NaCl和KCl的3:1比例的水溶液，在人工授精時提前2_3小時配制，常溫保存。本發明與現有技術相比的有益效果本發明一種黃顙魚在低滲透壓溶液的人工授精方法，其精子采集通過放血和篩絹擠壓方式采集精子，避免了精子采集過程中血污和其它組織的污染，提高了精子采集質量；精子預先采集在精子保存液中4°C冷藏保存，保存24h精子的激活率超過90%，對受精率無顯著影響，保存72h精子激活率仍在50%以上，解決 了黃顙魚精子保存和精卵同步采集的技術問題；擠卵方式通過一只手的虎口輕輕壓住背鰭硬刺基部，大拇指和食指輕扣腹部，虎口、大拇指和食指沿生殖孔方向滑動的擠壓方式，減少了擠卵過程對內臟的損傷，減少了擠空卵所需要的次數，提高擠卵效率，雌魚產后成活率可保持在90%以上；
人工授精過程以低滲溶液取代水為受精媒介，卵子和精子都能在低滲透壓溶液中激活，精子的激活率超過90%，精子的活力和壽命顯著延長，精子的活力可從21s 23s提高到32s 35s，延長了受精時間；通過精子在低滲溶液中預激活人工授精比精卵同步人工授精的受精率提高10%左右，每尾雄魚的精液能夠配備7. 5kg卵子人工授精，顯著降低雄魚的消耗，受精的卵在低滲溶液中不存在粘性，遇水后可恢復粘性，減少了受精過程中的干擾因子，增強了人工授精的穩定性，顯著提高了受精率，操作更靈活、簡便和快捷，更適合規模化生產，也適用于同性質卵類型的魚類。
具體實施例方式 下面結合具體實施例，進一步闡述本發明；應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍；
本實施例的黃顙魚親魚，為2011年6月從江蘇省射陽縣的射陽河收集，在公司養殖基地馴養I年的2冬齡以上黃顙魚，催產時雌魚均重137. 6±4. 2g，成熟系數18. 7±3. 1%，雄魚均重274. 8±3. 6g;在水溫26°C 28°C條件下，從6月18日至6月23日連續催產6個批次，每批雌魚150kg左右，雄魚3尾；具體操作方法及結果如下
①人工催情雌魚采用二針注射，第一針注射LHRH-A212ug/kg，第二針注射LHRH-A212ug/kg+D0M 3. 5mg/kg+HCG 1500IU/kg，兩針的間隔時間為14 16h ;雄魚采用一針注射，劑量為雌魚的40%，在注射雌魚的第二針時注射；采用背鰭基部注射，注射后放入20m2水泥池中，流水飼養，為防止缺氧，用氣泵增氧；
②精子保存液的配制黃顙魚精子保存液配方為檸檬酸三鈉7.5g，葡萄糖29g，氯化鉀O. 2g,碳酸氫鈉2. Ig,磷酸二氫鉀O. 06g,抗壞血酸O. lg, ATP O. 05g,防腐劑O. 3g和蒸懼水1000ml，試劑要求等級為分析純或生化級；按所述的配方配制IOOOml精子保存液，轉移至IOOOml的棕色廣口瓶中在4°C冷藏待用；③精子采集與保存注射激素后約13h后雄魚開始發情，在雄魚下頜靠近心臟用剪刀剪斷動脈，在水中放血2min左右；將雄魚擦干從肛門口沿腹部剪開，用鑷子取出精巢，用精子保存液沖洗2次，沖洗后的精巢放在100目篩絹中擠壓出的精液至IOOml的棕色廣口瓶中，再用IOml注射器吸取IOml精子保存液洗滌篩絹上剩余的精液一起轉移至廣口瓶中，稀釋至90ml搖勻在4°C冷藏保存；
④卵子的采集和人工授精雌魚注射約14h發情產卵，用毛巾擦干魚體，將卵擠入到容量2000ml干燥的不銹鋼碗中，每批卵控制500g在左右；取300ml濃度為O. 3%的低滲溶液，加入I. 5ml稀釋后的精液攪拌3 5s，迅速倒入卵中攪拌40s，完成授精過程；
⑤脫粘與孵化將授精后的卵沉淀30s，傾去上清液，放入8%濃度的黃泥漿懸濁液中攪拌2min，倒入60目篩絹中濾去懸濁液，再用清水漂洗干凈，然后將卵移至容量約80L的孵化桶中孵化，每個孵化桶放入6kg的受精卵，孵化過程按常規方法管理孵化； ⑥實施結果卵和魚苗的數量按重量法計數，卵發育至原腸中期開始計算受精率；6批共催產雌魚936kg，催產率92. 30± I. 68%，共獲得卵5349. 4萬粒，受精率86. I ±5. 2%，孵化出魚苗3608. 8萬尾，出苗率78. 4±3. 9%。
權利要求
1.一種黃顙魚在低滲溶液中的人工授精方法，包括以下步驟 (1)經注射激素催情發情的雄魚，在下頜靠近心臟處剪斷動脈處放血l-3min后取出精巢，用精子保存液沖洗1-3次，將精巢放入80-120目的篩絹中擠出精液，每尾雄魚收集的精液用10-50ml精子保存液稀釋4-8°C保存待用； (2)經注射激素催情發情的雌魚，采用兩指擠卵方式采集卵子，即一只手抓住黃顙魚頭部，另一只手虎口輕扣背鰭硬刺后基部，大拇指和食指輕扣腹部，沿生殖孔方向輕輕滑動擠壓，將卵擠入干燥碗中或盆中，每批魚卵的采集時間控制20min之內； (3)取300-500ml左右的低滲溶液，加入2_4ml經精子保存液稀釋的精液，攪拌3 5s預激活精子，然后將混合液倒入到500-1000g的卵子中，攪拌20-30s左右，即完成人工授精過程。
2.根據權利要求I所述的一種黃顙魚在低滲溶液中的人工授精方法，其特征在于所 述黃顙魚精子保存液配方為檸檬酸三鈉7. 5g，葡萄糖29g，氯化鉀O. 2g，碳酸氫鈉2. Ig,磷酸二氫鉀O. 06g，抗壞血酸O. lg, ATP O. 05g，防腐劑O. 3g和蒸餾水1000ml，試劑要求等級為分析純或生化級，配制的溶液4°C下保存。
3.根據權利要求I所述的一種黃顙魚在低滲溶液中的人工授精方法，其特征在于低滲溶液的濃度為O. 2% O. 4%的NaCl水溶液，或是NaCl和KCl的3:1比例的水溶液，在人工授精時提前2-3小時配制，常溫保存。
全文摘要
一種黃顙魚在低滲溶液中的人工授精方法，屬水產養殖技術，通過創新黃顙魚精卵的采集方式、精子保存液的設計以及在低滲溶液中采用預激活精子完成人工授精的技術。其技術方案包括以下要點(1)雄魚經放血后取出的精巢在篩絹中以擠壓方式濾出精液，提高精子采集質量，在保存液中冷藏保存，每尾雄魚精液可供7.5kg的卵子人工授精；(2)兩指擠卵方式降低了對雌魚內臟損傷，提高產后成活率；(3)以0.2～0.4%濃度低滲溶液取代水為受精媒介，在低滲溶液中預激活精子后與卵子授精，提高了精子活力和人工授精條件的可控性，從而提高了人工授精的受精率和穩定性。此方法穩定可靠，適合大規模生產，也適用于同性質卵類型的魚類。
文檔編號A01K61/00GK102960279SQ20121050323
公開日2013年3月13日 申請日期2012年11月30日 優先權日2012年11月30日
發明者王德忠, 徐漢連 申請人:射陽康余水產技術有限公司