專利名稱：海鮮菇液體菌種發酵工藝方法
技術領域：
本發明屬于農業生物工程領域，具體的說是一種海鮮菇液體菌種發酵工藝方法。
背景技術：
海鮮燕，學名[Hypsizygusmarmoreus (Peck) H. E. Bigelow],中文名真姬燕，又名玉蕈、斑玉蕈，質地脆嫩，味道鮮美，具有海蟹味，在日本稱之為“蟹味菇”、“海鮮菇”。海鮮菇營養豐富，是近年來十分具有商業潛力的食用菌品，目前多為工廠化栽培。現階段海鮮菇的栽培是固體菌種栽培法，在試管中的固體斜面培養基上培養好菌種之后直接從試管中接入菌包中，上述固體菌種栽培法接種時完全依靠人工，效率較低。此夕卜，固體菌種培養過程是靜止的，在靜止的條件下，在菌體或培養細胞的周圍，形成透過養分的壁障，養分的攝入受到阻礙，導致菌種的活力低，培養時間長，間接導致提高了成本。
發明內容
本發明的目的在于提供一種海鮮燕液體菌種發酵工藝方法，該方法具有培養時間短、菌種活力強、接種效率高的特點。本發明解決其技術問題所采取的技術方案是海鮮菇液體菌種發酵工藝方法，其特征是，包括以下步驟(I)培養試管種；將海鮮菇的純菌種接種在試管中的固體斜面培養基上，于21 23°C恒溫培養10 15天；上述的固體斜面培養基由馬鈴薯、瓊脂、葡萄糖及蒸餾水構成，馬鈴薯與蒸餾水的重量比為20%，瓊脂與蒸餾水的重量比為I. 5 2. 0%，葡萄糖與蒸餾水的重量比為2%，PH自然；(2)將試管種轉移到搖瓶中；用接種鉤和接種鏟將試管中固體培養基上的菌種劃分為小塊，在無菌操作下將試管中的菌種接種到搖瓶中的液體培養基上，每個搖瓶中接種6 8塊；上述的液體培養基由馬鈴薯、麩皮、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂及蒸餾水構成，馬鈴薯與蒸餾水的重量比為20%，麩皮與蒸餾水的重量比為I. 5 2. 0%，葡萄糖與蒸餾水的重量比為2%，蛋白胨與蒸餾水的重量比為O. 05 O. 07%，磷酸二氫鉀與蒸餾水的重量比為O. 2%，硫酸鎂與蒸餾水的重量比為O. 05%，并根據液體培養基體積總量按照10毫克/升的含量添加入維生素BI，PH自然；(3)在搖瓶中培養液體菌種；搖瓶中的菌種在21 23°C靜止培養3 4天后，觀察長勢和有沒有污染雜菌，確定沒有染菌后放置于搖床上，搖床為旋轉式搖床，搖床的轉速為120 140轉/分；然后搖瓶中的菌種于搖床上21 23°C恒溫培養3 4天；(4)將搖瓶中的菌種接種到發酵罐中；按照菌種與發酵罐的體積比為10%將菌種接種到發酵罐中，發酵罐的內壓為正壓且內壓小于O. 02兆帕，菌種在發酵罐中于21 23°C恒溫培養4 6天；
(5)將發酵罐中的菌種接入菌包；每一個菌包接入菌種的量為15 25毫升，終止發酵。所述的固體斜面培養基的制作方法如下I)將馬鈴薯洗凈去皮，已發芽的要挖掉芽眼，按量稱取后切成薄片，置于鋁鍋加水煮沸30分鐘，用4 6層紗布過濾取汁，加入按照重量比稱取的蒸餾水；瓊脂按量稱取，剪碎后加入馬鈴薯汁液內，微火加熱，不時攪拌直至瓊脂全部溶化，再加入葡萄糖，煮3 6分鐘，其液汁裝入試管；2)趁熱分裝入試管，裝量為試管長度的1/4 1/5，緊塞棉塞，分裝時應注意不使培養基黏附在試管口上，以免雜菌感染；3)及時高壓滅菌,滅菌時將試管每7 10支扎成一捆,棉塞一端用牛皮紙包好,直立放入高壓鍋內進行蒸汽滅菌，當壓力達O. 05兆帕時，打開排氣閥，使壓力降至“0”，繼續加熱，在O. 110兆帕的壓力下保持30 35分鐘，待壓力表自動降到“O”時再打開鍋蓋，取 出試管按照下述操作趁熱擺斜面；4)試管取出后趁熱將試管口一端墊高,斜靠在桌上的小木棒上,使試管內培養液斜面長度達試管長度的2/3 3/5，試管上面覆蓋毛巾，冷卻后即成斜面固體培養基；5)滅菌后置常溫下48小時，未發現有雜菌產生，即可接種。試管中固體培養基上的菌種劃分為小塊的體積大小為O. 3立方厘米。所述的液體培養基制作方法如下I)將馬鈴薯洗凈去皮，已發芽的要挖掉芽眼，按量稱取后切成薄片；麩皮選用新鮮無霉變的大麩，按量稱取后與馬鈴薯同煮，煮沸后文火維持20 30分鐘，用4 6層紗布過濾取汁，加入按照重量比稱取的蒸餾水和其他原料煮沸然后分裝；2)分裝入搖瓶，容量為1000毫升的搖瓶每瓶裝入500 600毫升，瓶口用棉塞、牛皮紙密封；3)及時高壓滅菌，直立放入高壓鍋內進行蒸汽滅菌，在O. 12 O. 14兆帕的壓力下保持40分鐘，高壓鍋排兩次冷氣，冷卻壓力降到O. 03兆帕時緩慢把高壓鍋內的壓力排盡；4)冷卻后即成液體培養基。與現有技術相比，本發明具有以下有益效果I、菌種活力強。液體培養基在通氣或在振蕩的條件下，可消除固體菌種在靜止條件下形成的壁障，從而消除了菌種吸收養分的障礙，且增加供氧量，所以有利于細胞生長，提高生產量；僅培養4 6天的菌絲體，正值生長旺盛期，生活力強，接種后，菌絲恢復生長快，發菌時間短，菌絲健壯。液體菌種發滿菌的時間為29 33天，固體菌種40天左右。2、制種周期短。固體菌種制種周期需70 95天，而液體菌種制種周期為24 35天，縮短了一半以上。3、接種速度快。固體菌種接種時完全依靠人工，接種速度為125 150包/人/小時；而液體菌種接種時可采用接種槍，實現了半機械化，接種速度能夠達到400包/人/小時，效率高，節省人力，從而節約了生產成本。4、菌齡一致。固體菌種，瓶或袋上下部的菌齡差異很大，瓶底前端的菌絲正處于萌動階段，而上層表面的菌絲已接近老化程度，上下部菌絲的菌齡相差20 30天。液體菌種因含有許多小的菌絲球和菌絲片段，可以形成許多生長中心，多點同步增殖，菌絲體生長發育比較整齊、均勻，菌齡比較一致。5、污染率低。液體接種各環節無菌條件可控，從而減少了人為因素造成的污染；此夕卜，液體接種方式速度快，使菌包敞口時間縮短，大大縮短了外界空氣與物料的接觸時間，從而減少了污染機率。固體接種污染率在5 15%，液體接種污染率可控制在1%。以內。
具體實施例方式海鮮菇液體菌種發酵工藝方法，包括以下步驟(I)培養試管種；將海鮮菇的純菌種接種在試管中的固體斜面培養基上，于23°C恒溫培養14天；上述的固體斜面培養基的配方是馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，蒸餾水1000克，PH自然； 所述的固體斜面培養基的制作方法如下I)將馬鈴薯洗凈去皮，已發芽的要挖掉芽眼，稱取200克切成薄片，置于鋁鍋加水煮沸30分鐘，用6層紗布過濾取汁，補足蒸餾水1000克；瓊脂20克，剪碎后加入馬鈴薯汁液內，微火加熱，不時攪拌直至瓊脂全部溶化，再加入葡萄糖，煮4分鐘，其液汁裝入試管；2)趁熱分裝入試管，裝量為試管長度的1/4，緊塞棉塞，分裝時應注意不使培養基黏附在試管口上，以免雜菌感染；3)及時高壓滅菌，滅菌時將試管每7支扎成一捆，棉塞一端用牛皮紙包好，直立放入高壓鍋內進行蒸汽滅菌，當壓力達O. 05兆帕時，打開排氣閥，使壓力降至“0”，繼續加熱，在O. 110兆帕的壓力下保持33分鐘，待壓力表自動降到“O”時再打開鍋蓋，取出試管趁熱按照下述操作擺斜面；4)試管取出后趁熱將試管口一端墊高,斜靠在桌上的小木棒上,使試管內培養液斜面長度達試管長度的2/3，試管上面覆蓋毛巾，冷卻后即成斜面固體培養基；5)滅菌后置常溫下48小時，未發現有雜菌產生，即可接種。(2)將試管種轉移到搖瓶中；用接種鉤和接種鏟將試管中固體培養基上的菌種劃分為體積為O. 3立方厘米的小塊，在無菌操作下將試管中的菌種接種到搖瓶中的液體培養基上，每個搖瓶中接種7塊；上述的液體培養基的配方是馬鈴薯200克，麩皮20克，葡萄糖20克，蛋白胨O. 6克，磷酸二氫鉀2克，硫酸鎂O. 5克，蒸餾水1000克，并根據液體培養基體積總量按照10毫克/升的含量添加入維生素BI，PH自然；所述的液體培養基制作方法如下I)將馬鈴薯洗凈去皮，已發芽的要挖掉芽眼，稱取200克切成薄片；麩皮選用新鮮無霉變的大麩，稱取20克與馬鈴薯同煮，煮沸后文火維持25分鐘，用6層紗布過濾取汁，補足蒸餾水1000克和其他原料煮沸，添加入維生素BI，然后分裝；2)分裝入搖瓶，容量為1000毫升的搖瓶每瓶裝入500 600毫升，瓶口用棉塞、牛皮紙密封；3)及時高壓滅菌，直立放入高壓鍋內進行蒸汽滅菌，在O. 13兆帕的壓力下保持40分鐘，高壓鍋排兩次冷氣，冷卻壓力降到O. 03兆帕時緩慢把高壓鍋內的壓力排盡；4)冷卻后即成液體培養基。
(3)在搖瓶中培養液體菌種；搖瓶中的菌種在23°C靜止培養3天后，觀察長勢和有沒有污染雜菌，確定沒有染菌后放置于搖床上，搖床為旋轉式搖床，搖床的轉速為130轉/分；然后搖瓶中的菌種于搖床上23°C恒溫培養4天；(4)將搖瓶中的菌種接種到發酵罐中；按照菌種與發酵罐的體積比為10%將菌種接種到發酵罐中，發酵罐的內壓為O. 015兆帕，菌種在發酵罐中于23°C恒溫培養5天；(5)將發酵罐中的菌種接入菌包；每一個菌包內接入菌種的量為20毫升，終止發·酵。
權利要求
1.海鮮菇液體菌種發酵エ藝方法，其特征是，包括以下步驟 (1)培養試管種；將海鮮菇的純菌種接種在試管中的固體斜面培養基上，于21 23°C恒溫培養10 15天； 上述的固體斜面培養基由馬鈴薯、瓊脂、葡萄糖及蒸餾水構成，馬鈴薯與蒸餾水的重量比為20%，瓊脂與蒸餾水的重量比為I. 5 2. 0%，葡萄糖與蒸餾水的重量比為2%，PH自然； (2)將試管種轉移到搖瓶中；用接種鉤和接種鏟將試管中固體培養基上的菌種劃分為小塊，在無菌操作下將試管中的菌種接種到搖瓶中的液體培養基上，每個搖瓶中接種6 8塊； 上述的液體培養基由馬鈴薯、麩皮、葡萄糖、蛋白胨、磷酸ニ氫鉀、硫酸鎂及蒸餾水構成，馬鈴薯與蒸餾水的重量比為20%，麩皮與蒸餾水的重量比為I. 5 2. 0%，葡萄糖與蒸餾水的重量比為2%，蛋白胨與蒸餾水的重量比為0. 05 0. 07%，磷酸ニ氫鉀與蒸餾水的重量比為0. 2%，硫酸鎂與蒸餾水的重量比為0. 05%,并根據液體培養基體積總量按照10毫克/升的含量添加入維生素BI，PH自然； (3)在搖瓶中培養液體菌種；搖瓶中的菌種在21 23°C靜止培養3 4天后，觀察長勢和有沒有污染雜菌，確定沒有染菌后放置于搖床上，搖床為旋轉式搖床，搖床的轉速為120 140轉/分；然后搖瓶中的菌種于搖床上21 23°C恒溫培養3 4天； (4)將搖瓶中的菌種接種到發酵罐中；按照菌種與發酵罐的體積比為10%將菌種接種到發酵罐中，發酵罐的內壓為正壓且內壓小于0. 02兆帕，菌種在發酵罐中于21 23°C恒溫培養4 6天； (5)將發酵罐中的菌種接入菌包；每一個菌包接入菌種的量為15 25毫升，終止發酵。
2.根據權利要求I所述的海鮮菇液體菌種發酵エ藝方法，其特征是，所述的固體斜面培養基的制作方法如下 1)將馬鈴薯洗凈去皮，已發芽的要挖掉芽眼，按量稱取后切成薄片，置于鋁鍋加水煮沸30分鐘，用4 6層紗布過濾取汁，加入按照重量比稱取的蒸餾水；瓊脂按量稱取，剪碎后加入馬鈴薯汁液內，微火加熱，不時攪拌直至瓊脂全部溶化，再加入葡萄糖，煮3 6分鐘，其液汁裝入試管； 2)趁熱分裝入試管，裝量為試管長度的1/4 1/5，緊塞棉塞，分裝時應注意不便培養基黏附在試管口上，以免雜菌感染； 3)及時高壓滅菌,滅菌時將試管姆7 10支扎成ー捆,棉塞一端用牛皮紙包好，直立放入高壓鍋內進行蒸汽滅菌，當壓カ達0. 05兆帕時，打開排氣閥，使壓カ降至“ 0”，繼續加熱，在0. 110兆帕的壓力下保持30 35分鐘，待壓カ表自動降到“0”時再打開鍋蓋，取出試管按照下述操作趁熱擺斜面； 4)試管取出后趁熱將試管ロー端墊高，斜靠在桌上的小木棒上，使試管內培養液斜面長度達試管長度的2/3 3/5，試管上面覆蓋毛巾，冷卻后即成斜面固體培養基； 5)滅菌后置常溫下48小時，未發現有雜菌產生，即可接種。
3.根據權利要求I所述的海鮮菇液體菌種發酵エ藝方法，其特征是，試管中固體培養基上的菌種劃分為小塊的體積大小為0. 3立方厘米。
4.根據權利要求I所述的海鮮菇液體菌種發酵エ藝方法，其特征是，所述的液體培養基制作方法如下1)將馬鈴薯洗凈去皮，已發芽的要挖掉芽眼，按量稱取后切成薄片；麩皮選用新鮮無霉變的大麩，按量稱取后與馬鈴薯同煮，煮沸后文火維持20 30分鐘，用4 6層紗布過濾取汁，加入按照重量比稱取的蒸餾水和其他原料煮沸然后分裝； 2)分裝入搖瓶，容量為1000毫升的搖瓶每瓶裝入500 600毫升，瓶ロ用棉塞、牛皮紙密封； 3)及時高壓滅菌，直立放入高壓鍋內進行蒸汽滅菌，在0.12 0. 14兆帕的壓力下保持40分鐘，高壓鍋排 兩次冷氣，冷卻壓カ降到0. 03兆帕時緩慢把高壓鍋內的壓カ排盡； 4)冷卻后即成液體培養基。
全文摘要
本發明公開了一種海鮮菇液體菌種發酵工藝方法，它包括以下步驟培養試管種，將試管種轉移到搖瓶中，在搖瓶中培養液體菌種，將搖瓶中的菌種接種到發酵罐中，將發酵罐中的菌種接入菌包。本發明具有菌種活力強，制種周期短、接種速度快、菌齡一致、污染率低等優點，液體菌種可以通過接種槍進行接種，實現半機械化，效率高，節省人力，適于在食用菌栽培領域推廣。
文檔編號A01G1/04GK102845225SQ20121036477
公開日2013年1月2日 申請日期2012年9月26日 優先權日2012年9月26日
發明者劉克東, 盧欽寶, 侯有福, 張娟, 胥寶剛, 錢立雙, 溫麗君, 劉振濤, 楊華威 申請人:濟南蓬生農業科技有限公司